磁微粒化学发光法与胶体金法在临床SARS-CoV-2抗体检测中的性能比较.pdf

磁微粒化学发光法与胶体金法在临床S A R S-C o V-2抗体检测中的性能比较熊 丹,邬根香*,刘海英,卢惠文,陈杜鹃(高安市人民医院 检验科,江西 高安 3 3 0 8 0 0)摘 要:目的:探讨磁微粒化学发光法(C L I A)与胶体金法检测新型冠状病毒抗体I g M、I g G的差异。方法:分别用C L I A与胶体金法对新型冠状病毒I g M、I g G抗体进行测定,分析两种检测方法检测新型冠状病毒抗体的敏感性以及最低检测限值。结果:C L I A检测新型冠状病毒I g M、I g G的S/C O值小于1时,胶体金法检测均为阴性;S/C O值大于1 0时,胶体金法检测I g M的阳性率为1 0 0%、检测I g G的阳性率为9 9.1 4%;S/C O值大于1小于1 0时,胶体金法检测新型冠状病毒I g M与I g G的阳性率分别为0.8 7%与1.5 6%。结论:C L I A法检测新型冠状病毒I g M、I g G的检出率高于胶体金法;C L I A检测新型冠状病毒I g M与I g G最低检测的S/C O值1判定为阳性,而S/C O值大于1 0时,胶体金法显示阳性,C L I A的阳性阈值更低。关键词:新型冠状病毒I g M抗体;新型冠状病毒I g G抗体;C L I A;胶体金法中图分类号:R 4 4 6.6 文献标识码:A 文章编号:1 6 7 1 3 8 0 X(2 0 2 3)0 6 0 0 8 4 0 3T h e C o m p a r a t i v e A n a l y s i s o f S A R S C o V 2 A n t i b o d y L e v e l T e s t e d w i t h t h e C h e m i l u m i n e s c e n t M i c r o p a r t i c l e I m m u n o a s s a y a n d C o l l o i d a l G o l d M e t h o dX I O N G D a n,WU G e n x i a n g*,L I U H a i y i n g,L U H u i w e n,C H E N D u j u a n(C l i n i c a l L a b o r a t o r y o f G a o a n P e o p l es H o s p i t a l,G a o a n 3 3 0 8 0 0,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e:T o i n v e s t i g a t e t h e d i f f e r e n c e s b e t w e e n t h e c h e m i l u m i n e s c e n t m i c r o p a r t i c l e i mm u n o a s s a y(C L I A)a n d c o l l o i d a l g o l d m e t h o d i n t h e d e t e c t i n g o f S A R S C o V 2 I g M a n d I g G a n t i b o d y.M e t h o d s:S A R SC o V 2 I g M a n d I g G a n t i b o d y d e t e r m i n a t i o n w a s c o n d u c t e d b y C L I A a n d c o l l o i d a l g o l d r e s p e c t i v e l y.T h e s e n s i t i v i-t y a n d m i n i m u m l i m i t v a l u e s a r e a n a l y z e d a n d c o m p a r e d t h r o u g h t w o d e t e c t i o n m e t h o d s.R e s u l t s:W h e n t h e S/C O v a l u e o f S A R S C o V 2 I g M a n d I g G d e t e c t e d b y C L I A w a s l e s s t h a n 1,t h e c o l l o i d a l g o l d m e t h o d w a s n e g a-t i v e.W h e n t h e S/C O v a l u e o f S A R S C o V 2 I g M a n d I g G d e t e c t e d b y C L I A w a s g r e a t e r t h a n 1 0,t h e p o s i t i v e r a t e d e t e c t e d b y c o l l o i d a l g o l d m e t h o d w e r e 1 0 0%a n d 9 9.1 4%r e s p e c t i v e l y.W h e n t h e S/C O v a l u e o f S A R S C o V2 I g M a n d I g G d e t e c t e d b y C L I A w a s f r o m 1 t o 1 0,t h e p o s i t i v e r a t e s d e t e c t e d b y c o l l o i d a l g o l d m e t h o d w e r e 0.8 7%a n d 1.5 6%r e s p e c t i v e l y.C o n c l u s i o n:T h e d e t e c t i o n r a t e o f S A R S C o V 2 I g M a n d I g G b y C L I A m e t h o d i s h i g h e r t h a n t h a t b y c o l l o i d a l g o l d m e t h o d.W h e n t h e S/C O v a l u e o f t h e l o w e s t d e t e c t i o n o f S A R S C o V 2 I g M a n d I g G b y C L I A i s g r e a t e r t h a n 1,i t i s p o s i t i v e.W h e n t h e S/C O v a l u e i s g r e a t e r t h a n 1 0,t h e c o l l o i d a l g o l d m e t h o d s h o w s p o s i t i v e.T h e p o s i t i v e t h r e s h o l d o f C L I A i s l o w e r t h a n t h a t o f c o l l o i d a l g o l d m e t h o d.K e y w o r d s:S A R S C o V 2;I g M a n t i b o d y;I g G a n t i b o d y;c h e m i l u m i n e s c e n t m i c r o p a r t i c l e i mm u n o a s s a y,c o l-l o i d a l g o l d m e t h o d 2 0 1 9年1 2月以来,湖北省武汉市出现新型冠状病毒肺炎(2 0 1 9 n c o v)且病例数不断增加,世界卫生组织将新型冠状病毒命名为“C O V I D 1 9”,其传染性强,传播速度快,在短期内席卷全国,目前已在48第4 5卷 第6期2 0 2 3年6月 宜春学院学报J o u r n a l o f Y i c h u n U n i v e r s i t y V o l.4 5,N o.6J u n.2 0 2 3 收稿日期:2 0 2 3 0 2 0 7基金项目:宜春市科技局指导性科技计划项目(编号:2 0 2 2 Z D J H 6 3 9 5)。作者简介:熊丹(1 9 8 6),女,江西高安人,主管检验师,硕士,研究方向为血液细胞学检验。*通信作者:邬根香(1 9 7 5),女,江西高安人,副主任技师,研究方向为血液免疫学检验。全球多个国家和地区流行,给全世界人民带来了沉重的灾难。14在近三年的抗疫过程中,全国人民积极参与,提出了许多抗战新冠肺炎的措施。临床尚无确切有效的治疗和预防药物。5目前,可供临床使用的新型冠状病毒特异性I g M抗和I g G抗体检测试剂盒种类较多,6本研究通过用胶体金法和C L I A两种方法检测新型冠状病毒抗体,从而对两种方法的敏感性进行评价,也可为抗体检测试剂的应用提供数据参考。1 资料与方法1.1 一般资料收集2 0 2 1年7月2 0 2 1年8月江西省高安市人民医院住院及门诊新冠抗体检验自愿检测人员血液标本1 6 0 0份,年龄1 9 5 9岁,平均3 9.4 5.7岁,其中男9 7 8例,女6 2 2例。所有研究对象均清晨采集空腹静脉血3 m L,静置待血液凝固,4 0 0 0 r/m i n,离心1 0 m i n,获取血清。分别用C L I A与胶体金法检测新型冠状病毒I g M、I g G抗体。所有标本均在研究对象知情同意条件下获得,并获得江西省高安市人民医院伦理委员会批准许可(G R Y 2 0 2 2 0 5)。1.2 仪器与试剂新型冠状病毒C L I A检测试剂盒(郑州安图生物工程股份有限公司),全自动化学发光测定仪(郑州安图实验仪器有限公司,型号A 2 0 0 0 P l u s)。新型冠状病毒特异性I g M和I g G抗体胶体金检测试剂盒(英诺特生物技术有限公司)。1.3 方法(1)C L I A检测:检测原理:采用间接法原理进行检测。用2 0 1 9 n C o V抗原包被磁微粒,辣根过氧化物酶标记人I g G抗体制备酶结合物,通过免疫反应形成固相抗原 抗体 酶标二抗复合物,该复合物催化发光底物发出光子,发光强度与新型冠状病毒(2 0 1 9 n C o V)I g G抗体的含量成正比。检验步骤:a:消耗品检查,根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足;b:试剂包装载,试剂包首次上机前,轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成分,避免产生气泡。不要倒转已经打开的试剂包,仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数;如果特殊情况下仪器无法识别条码,可以手工输入。c:测试,将样本容器放置在仪器配套样本架中,装载样本架,在仪器软件界面中输入样本信息,选择“运行”开始测试,系统自行进行试验操作。测试结果以相对发光强度(r e l a t i v e l i g h t u n i t,R L U)表示。以待检样本发光值(S)与c u t o f f(C O)的比值(S/C O值)表示。S/C O值1判定为阳性,反之判定为阴性。本次实验根据S/C O值将样本进行分组,C L I A(S/C O值)1 0的分为A组;1 C L I A(S/C O)1 0分为B组;C L I A(S/C O值)1分为C组。(2)胶体金法:将A、B、C三组样本分别使用胶体金法进行检测。该法采用免疫层析技术原理,应用捕获法检测对人血清抗体进行定性检测。I g M抗体和I g G抗体判读窗口在C线位置出现清晰的紫红色条带,判为新型冠状病毒抗体阴性,I g M与I g G抗体检测试剂判读窗口T线和C线位置出现清晰的紫红色条带,判为新型冠状病毒I g M或I g G抗体阳性。1.4 统计学方法应用S P S S 2 2 0软件分析数据,组间比较采用卡方(2)检验,计数资料以(%)表示,P1 0,胶体金法检测I g G的阳性检出率分别为1 0 0%、9 9.1 4%。胶体金法检测I g M、I g G与C L I A检测新型冠状病毒I g M、I g G无差异(2=0.0 0 0 4,P=0.9 8),两种检测方法的阳性率一致。C L I A法1S/C O值1 0时,胶体金法检测I g M、I g G的阳性检出符合率分别为1.1 7%、1.5 6%,与C L I A检测新型冠状病毒I g M、I g G有差异(2=5 7 8.0 4,P0.0 1),差异有统计学意义。C L I A检测新型冠状病毒I g M、I g G的阳性率及灵敏度更高。C L I A S/C O值 1 0C L I A法阳性数1 22 3 2胶体金法阳性数1 22 3 0符合率1 0 0.0 0%9 9.1 4%B组1 S/C O 1 0C L I A法阳性数1 7 07 6 8胶体金法阳性数21 2符合率1.1 7%1.5 6%C组 1C L I A法阳性数6 0 06 0 0胶体金法阴性数6 0 06 0 0符合率1 0 0.0 0%1 0 0.0 0%3 讨论辅助诊断新冠肺炎患者重要的技术手段有新冠特异性抗体I g G和I g M的检测,余珊等7的研究表明普通型患者I g M和I g G抗体浓度高于无症状感染者,重型患者I g M和I g G抗体浓度高于普通型患者。对于多次核酸检测呈阴性者的疑似新冠患者,检测特异性58第6期 熊 丹,邬根香,刘海英,等:磁微粒化学发光法与胶体金法在临床S A R S C o V 2抗体检测中的性能比较 第4 5卷I g G、I g M抗体,可以根据抗体浓度判断患者类型,还能够减少因采样不规范或病毒载量极低等问题所致的核酸检测假阴性所导致的漏诊。此外,全国已经大规模接种新冠疫苗,检测免疫接种后抗体产生情况是评价疫苗免疫效果很重要的方法。因此我们希望通过比较,找到简便易行,可以根据临床需要准确检测标本的检测方法。在本研究中根据C L I A测定新冠抗体3个范围的S/C O值(即S/C O值小于1、大于1小于1 0以及大于1 0)与胶体金法比较。本研究发现,当C L I A(S/C O值)1时,胶体法测定结果阴性符合率为1 0 0%;当1 C L I A(S/C O)1 0时,胶体金法检测I g M、I g G的阳性符合率分别为1 0 0%、9 9.1 4%。由此,我们推断出C L I A检测新型冠状病毒I g M、I g G的检出率高于胶体金法。有研究8报道显示,C L I A检测新型冠状病毒特异性抗体I g M的敏感性较高,本研究结果与之一致。当C L I A检测新型冠状病毒I g M、I g G的S/C O值大于1 0时,胶体金法才显示阳性。现在临床最常采用的检测冠状病毒特异性抗体的检测方法有化学发光法,研究结果显示,采用化学发光法检测S A R S C o V 2 I g M和I g G抗体的敏感性和特异性均较高。9但是,C L I A不可避免地会有假阳性结果,有研究表明,由于I g M和I g G抗体的变化特点、方法学及试剂本身的局限性,会导致假阳性的结果。1 0C L I A的结果不可避免地会出现假阳性,是因为本身是通过统计学方法或R O C曲线得到的阳性结果为假阳性率和假阴性率都较低或最适当的测定信号。1 1类风湿因子、补体、嗜异性抗体、溶菌酶等也可对C L I A检测新型冠状病毒抗体的检测产生影响。1 2胶体金试纸条法检测放法判断结果的反应时间一般较短,在1 m i n内完成,有时抗原抗体可能无法充分混匀而不能反应,造成假阴性的结果;此外,在人血清标本中I g G和I g M的含量极高,而真正待测抗体的浓度在万分之一以下,而胶体金标记的二抗与血清标本中如此高浓度的I g M或I g G完全结合会产生钩状效应,导致因灵敏度不足而出现假阴性。2 0 2 0年3月1 3日国家卫生健康委临床检验中心张瑞等1 1的研究指出类风湿因子会造成胶体金法检测新型冠状病毒特异抗体(I g M、I g G)检测的假阳性。而外源性的干扰物质,比如溶血、乳糜、黄疸等,未发现对胶体金的判读产生干扰。1 3综上所述,C L I A法是近几年发展起来的磁微粒化学发光免疫方法,其优点是操作简单方便,人为影响因素少,结果稳定,但需要专门的化学发光分析仪器和配套的检测试剂盒进行检测。胶体金方法检测I g M和I g G抗体快速简单,不需要特殊的仪器设备,但准确性不高,无法定量,只用于快速初步筛检。1 4因此,可以根据检验需求选择最优的检测方法。参考文献:1Z HU N a,Z HA N G D i n g y u,W A N G W e n l i n g,e t a l.A N o v e l C o r o n a v i r u s f r o m P a t i e n t s w i t h P n e u m o n i a i n C h i n a,2 0 1 9J.N e w E n g l a n d J o u r n a l o f M e d i c i n e,2 0 2 0,3 8 2(8):7 2 7 7 3 3.2Z h o n g N S,Z h e n g B J,L i YM,e t a l.E p i d e m i o l o g y a n d c a u s e o f s e v e r e a c u t e r e s p i r a t o r y s y n d r o m e(S A R S)i n G u a n g d o n g,P e o-p l es R e p u b l i c o f C h i n a,i n F e b r u a r y,2 0 0 3J.L a n c e t,2 0 0 3,3 6 2(9 3 9 3):1 3 5 3 1 3 5 8.3W o n g G,L i u W,L i u Y,e t a l.M E R S,S A R S,a n d E b o l a:T h e R o l e o f S u p e r S p r e a d e r s i n I n f e c t i o u s D i s e a s eJ.C e l l H o s t M i c r o b e,2 0 1 5,1 8(4):3 9 8 4 0 1.4洪慧勤,刘华之,邱卉卉,等.赣州市某新冠病毒疫苗接种门诊群众接种满意度效果评价J.江西医药,2 0 2 1,5 6(1 0):1 7 1 4 1 7 1 7.5李倩,卢洪洲.新型冠状病毒疫苗研究最新进展J.新发传染病电子杂志,2 0 2 0,5(4):2 6 8 2 7 3.6刘威,杨超杰,瞿良,等.1 0种新型冠状病毒抗体检测试剂盒效果评价J.国际药学研究杂志,2 0 2 0,4 7(9):7 1 6 7 2 1.7余珊,叶祖峰,陈丽,等.4 1例新型冠状病毒肺炎患者血清抗体检测分析J.微生物学免疫学进展,2 0 2 1,4 9(1):4 8 5 2.8李萍,李志勇,赵四林,等.血清2 0 1 9 n C o V I g M和I g G抗体用于诊断新型冠状病毒肺炎的初探J.中华检验医学杂志,2 0 2 0,(4):3 5 2 3 5 7.9潘婧,梁芸,梁翠娟,等.S A R S-C o V-2抗体不同方法学检测结果的差异分析J.检验医学,2 0 2 1,3 6(1):2 2 9 2 3 0.1 0 郭元元,王昆,张宇,等.6种国产新型冠状病毒核酸检测试剂检测性能比较与分析J.重庆医学,2 0 2 0,4 9(1 5):2 4 3 52 4 3 9.1 1 张瑞,李金明.2 0 1 9新型冠状病毒特异抗体检测“假阳性”原因分析及对策J.中华检验医学杂志,2 0 2 0,4 3(5):5 0 7 5 1 0.1 2 宁明哲,陶月,陈雨欣,等.新型冠状病毒血清特异性抗体检测的假性问题分析和对策探讨J.现代检验医学杂志,2 0 2 0,3 5(6):1 2 9 1 3 1.1 3 贾兴旺,刘青,陈泽衍,等.胶体金法检测血清2 0 1 9新型冠状病毒I g M和I g G抗体的临床应用及干扰因素分析J.标记免疫分析与临床,2 0 2 0,2 7(5):8 4 5 8 4 9.1 4 童伟,陈登奕,陈俊文,等.2 0 1 9 n C o V总抗体两种免疫学检测方法的应用评价J.现代检验医学杂志,2 0 2 0,3 5(2):8 0 8 2.68第6期 宜春学院学报 第4 5卷