大鼠牙髓组织AIM2炎症体表达及其与炎症反应关系.pdf

第5 9卷 第3期2 0 2 3年0 6月青 岛 大 学 学 报(医 学 版)J OUR NA LO FQ I N G D AOUN I V E R S I T Y(ME D I C A LS C I E N C E S)V o l.5 9,N o.3J u n e 2 0 2 3 收稿日期2 0 2 2-1 2-1 2;修订日期2 0 2 3-0 5-2 3 基金项目山东省自然科学基金面上项目(Z R 2 0 2 2 MH 0 6 2)第一作者王继玲(1 9 6 5-),女,副主任护师。通信作者王亚飞(1 9 8 7-),男,博士,主治医师。E m a i l:w y f-1 9 8 7 0 8 0 41 2 6.c o m。大鼠牙髓组织A I M 2炎症体表达及其与炎症反应关系王继玲1,吴广升2,王亚飞2(中国人民解放军海军青岛特勤疗养中心,山东 青岛 2 6 6 0 7 1 1 疾病预防控制科;2 口腔科)摘要 目的 探讨黑色素瘤缺乏因子2(A I M 2)炎症体在大鼠牙髓组织中的分布及其在牙髓炎症发生、发展中的表达变化。方法 通过开髓法建立大鼠牙髓炎症模型,采用免疫荧光染色检测A I M 2炎症体在牙髓组织中的表达分布;利用实时定量P C R(R T-P C R)检测大鼠牙髓组织中A I M 2炎症体基因表达量的变化。结果 苏木精-伊红(HE)染色显示单纯的开髓可诱发大鼠牙髓炎症反应,开髓3d后出现炎性反应并在7d后出现牙髓坏死。免疫荧光染色显示,大鼠牙髓组织中有A I M 2炎症体表达,开髓5d后牙髓细胞层出现明显阳性表达。R T-P C R结果显示,开髓术后3dA I M 2基因表达显著增加(F=11 7 8.9 1 0,P0.0 1),下游c a s p a s e-1基因表达上调(F=8 1.2 2 4,P0.0 5),I L-1在开髓5d后显著上调(F=1 6 4.4 1 4,P0.0 5)。结论 A I M 2炎症体存在于大鼠牙髓组织中,并且其表达量与牙髓炎症反应呈正相关。关键词 牙髓炎;黑色素瘤缺乏因子2;炎性小体;大鼠,S p r a g u e-D a w l e y 中图分类号 R 7 8 1.3 1 文献标志码 A 文章编号 2 0 9 6-5 5 3 2(2 0 2 3)0 3-0 4 0 7-0 5d o i:1 0.1 1 7 1 2/j m s.2 0 9 6-5 5 3 2.2 0 2 3.5 9.0 7 8 开放科学(资源服务)标识码(O S I D)网络出版 h t t p s:/k n s.c n k i.n e t/k c m s 2/d e t a i l/3 7.1 5 1 7.R.2 0 2 3 0 7 2 5.0 9 3 6.0 0 3.h t m l;2 0 2 3-0 7-2 6 1 4:0 5:4 7E X P R E S S I O NO FA B S E N TI N ME L A N OMA2I N F L AMMA T O R YB O D YI NR A TD E N T A LP U L PA N DI T SA S S O C I A T I O N W I T HI N F L AMMA T O R YR E S P O N S E WANGJ i l i n g,WU G u a n g s h e n g,WANG Y a f e i(D i s e a s eP r e v e n t i o na n dC o n t r o lS e c t i o n,Q i n g d a oS p e c i a lS e r v i c eS a n a t o r i u mo f t h eP L AN a v y,Q i n g d a o2 6 6 0 7 1,C h i n a)A B S T R A C T O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h ed i s t r i b u t i o no f a b s e n t i nm e l a n o m a2(A I M 2)i n f l a mm a t o r yb o d y i nr a td e n t a lp u l pt i s s u ea n dt h ec h a n g e i n i t se x p r e s s i o n i nt h ed e v e l o p m e n t a n dp r o g r e s s i o no fp u l p i t i s.M e t h o d s O p e n i n go fp u l pc h a m b e rw a sp e r f o r m e dt oe s t a b l i s har a tm o d e l o fd e n t a l p u l p i n f l a mm a t i o n.I mm u n o f l u o r e s c e n t s t a i n i n gw a su s e dt om e a s u r et h ee x p r e s-s i o na n dd i s t r i b u t i o no fA I M 2 i n f l a mm a t o r yb o d y i nd e n t a l p u l p t i s s u e,a n dR T-P C Rw a su s e d t om e a s u r e t h e c h a n g e i n t h emR NAe x p r e s s i o n l e v e l o fA I M 2 i n f l a mm a t o r yb o d y i nr a td e n t a l p u l pt i s s u e.R e s u l t s HEs t a i n i n gs h o w e dt h a to p e n i n go fp u l pc h a m-b e ra l o n ec o u l d i n d u c e i n f l a mm a t o r yr e s p o n s eo f r a td e n t a lp u l p;i n f l a mm a t o r yr e s p o n s ew a so b s e r v e do nd a y3a f t e rp u l po p e n i n ga n dd e n t a l p u l pn e c r o s i sw a so b s e r v e do nd a y7a f t e rp u l po p e n i n g.I mm u n o f l u o r e s c e n t s t a i n i n gs h o w e d t h ee x p r e s s i o no fA I M 2 i n-f l a mm a t o r yb o d y i nr a t d e n t a l p u l p t i s s u e,w i t hm a r k e dp o s i t i v ee x p r e s s i o n i np u l pc e l l l a y e ro nd a y5a f t e rp u l po p e n i n g.R T-P C Rs h o w e dt h a t o nd a y3a f t e r p u l po p e n i n g,t h e r ew e r e s i g n i f i c a n t i n c r e a s e s i n t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f t h eA I M 2g e n e(F=11 7 8.9 1 0,P0.0 1)a n dd o w n s t r e a mc a s p a s e-1(F=8 1.2 2 4,P0.0 5),a n d t h e r ew a s a s i g n i f i c a n t i n c r e a s e i nI L-1o nd a y5a f t e rp u l po p e-n i n g(F=1 6 4.4 1 4,P0.0 5).C o n c l u s i o n A I M 2 i n f l a mm a t o r yb o d ye x i s t s i nr a td e n t a lp u l pt i s s u e,a n dt h ec h a n g i n gt r e n do fi t se x p r e s s i o n i sp o s i t i v e l ya s s o c i a t e dw i t hd e n t a l p u l p i n f l a mm a t o r yr e s p o n s e.K E Y WO R D S p u l p i t i s;a b s e n t i nm e l a n o m a2;i n f l a mm a s o m e;r a t s,S p r a g u e-D a w l e y 牙髓炎是口腔常见疾病,因其能引起较为剧烈的疼痛易对工作、学习和生活等方面产生较大的影响,但其发病机制尚不完全清楚。近1 0余年,因为炎症体的发现,人们对牙髓炎的发生、发展及转归有了全新的认识。已有研究结果表明,在脂多糖等因素刺激下,牙髓成纤维细胞中黑色素瘤缺乏因子2(A I M 2)炎症体的表达增加1-2,并随着炎症的进展其表达量有一定的升高。然而,目前对A I M 2炎症体在牙髓组织中尤其是体内研究还相对较少。本文通过构建大鼠牙髓炎模型,研究A I M 2炎症体在大鼠牙髓炎症发生、发展中的作用机制,为后期寻找牙髓炎拮抗剂或治疗分子靶点提供理论依据。现将结果报告如下。1 材料与方法1.1 实验材料低温离心机(C e n t r i f u g e5 8 0 4 R,E p p e n d o r f公司,德 国);P C R仪(M a s t e r c y l e rg r a d i e n t,E p p e n-d o r f公司,德国);超低温冰箱(E KY 0 0 1 4 5 9 5,三洋公司,日本);N a n o d r o p2 0 0 0分光光度计(T h e r m o 4 0 8青 岛 大 学 学 报(医 学 版)5 9卷S c i e n t i f i c公司,美国);荧光定量P C R仪(A B I 7 5 0 0,赛默飞公司,美国);O D Y S S E Y双色红外线激光成像系统(L I-C O R公司,美国);T r i z o l(I n v i t r o g e n公司,美国);八联管(I n v i t r o g e n公司,美国);牙科高速涡轮机手机(N S K公司,日本);1/2球钻(松风公司,日本);氯仿、异丙醇、无水乙醇、R NA酶灭活水(上海士锋生物科技有限公司);A n t i-A I M 2(S a n t a-C r u z公司,美国)。1.2 实验方法1.2.1 大鼠牙髓炎症模型的建立 所用实验动物为8周龄雄性S D大鼠2 0只,购于空军军医大学动物中心。1 0 0g/L水合氯醛腹腔注射麻醉后,仰卧固定于鼠板上,用金属镊子撑开大鼠下颌,暴露上颌磨牙,用高速涡轮机(不喷水,1/2球钻)在大鼠上颌磨牙面开髓,开髓深度约为1mm,待有透红点时停止磨切,用金属探针在透红点加压,形成穿髓孔。每只大鼠右侧上颌磨牙为开髓牙,左侧为对照牙。每3只同样处理的大鼠为1组。开髓组仅依靠物理刺激形成牙髓炎症反应。根据苏木精-伊红(HE)染色后炎症程度,即组织切片中浸润的炎性细胞的程度不同分为正常组、3d组(少量炎性细胞浸润)、5d组(大量炎性细胞浸润)、7d组(牙髓组织坏死)和1 0d组(大部分牙髓组织坏死)。1.2.2 HE染色 大鼠给予1 0 0g/L水合氯醛腹腔注射,待完全麻醉后,开胸;用4 0g/L多聚甲醛行心脏灌注,待全身僵硬后,解剖大鼠上颌,取出上颌双侧磨牙及部分上颌骨。将标本置于4 0g/L多聚甲醛中固定1 2h。常规乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋制作切片,进行HE常规染色,观察动物模型牙髓炎症状态。1.2.3 免疫荧光染色 组织固定包埋制成石蜡切片,常规脱蜡水化后,以P B S(p H值7.4,0.0 1m o l/L)洗3次,每次5m i n;用甲醇新鲜配制的体积分数0.0 0 3H2O2孵育1 5m i n;P B S洗3次,每次5m i n;胰蛋白酶行抗原修复3 7下孵育3 0m i n;P B S洗3次,每次5m i n;体积分数0.1 0牛血清清蛋白(B S A)3 7孵育3 0m i n;加入一抗A I M 2(15 0 0,美国S a n t a-C r u z),4湿盒中孵育过夜;P B S洗3次,每次5m i n;在避光条件下,加F I T C标记的二抗(12 0 0,英国A b c a m),3 7孵育3 0m i n;P B S洗3次,每次5m i n;加入D I P A(细胞核染色)室温下孵育3m i n;P B S洗3次,每次5m i n;体积分数0.1 0缓冲甘油封片,4避光保存。荧光显微镜下观察切片(观察期间应处于避光环境中)。1.2.4 R T-P C R检测 1 0 0g/L水合氯醛腹腔注射麻醉后,活体进行大鼠上颌磨牙取材,将磨牙小心剥离,去净周围软组织后置于液氮罐中保存。进行mR NA提取时,将牙齿去除,用手术刀片小心刮净牙齿周围组织,放入液氮中5m i n后置于匀浆器中研磨。采用T R I z o l法提取细胞总R NA,置于-8 0冰箱保存备用。应用T a k a r a.R R 0 3 7 A反转录试剂盒将R NA逆转录为c D NA。以c D NA为模板利用P C R扩增试剂盒完成扩增。P C R的反应条件为:9 5下变性3 0s,9 5 下5s,共4 0个循环;6 0 下离解3 03 4s。以内参照蛋白G A P DH基因水平为默认值1。P C R引物种类及其序列见表1。1.3 统计学分析采用G r a p h P a dP r i s m5.0软件进行统计学分析。所得计量资料数据以xs形式表示,两组比较采用L S D法,多组比较采用单因素方差分析。以P0.0 5为差异有统计学意义。2 结 果2.1 组织病理学观察大鼠上颌双侧切牙的HE染色结果显示,对照侧无处理的牙齿牙髓组织正常,开髓5d后出现炎性细胞,开髓7d后聚集了大量的炎性细胞并有部分牙髓组织坏死。见图1 AC。2.2 免疫荧光染色观察荧光显微镜下观察显示,健康的大鼠牙髓组织中A I M 2主要表达于成牙本质细胞层,而在牙髓成纤维细胞中表达较少(牙髓成纤维细胞层中绿色荧光分布较少且荧光强度较低);但在开髓5d后的牙表1 R T-P C R所用引物及其序列基因名称 上游引物 下游引物A I M 25 -G T T C T G T T G C T T C T G C C A C C T-3 5 -T G T T C T G C C A C C A T C T G T T T C T 3 c a s p a s e-15 -A C T C G T A C A C G T C T T G C C C T C A-3 5 -C T G G G C A G G C A G C AAA T T C-3 I L-5 -C T A C C T A T G T C T T G C C C G T G GA G-3 5 -G G GAA C A T C A C A C A C T A G C A G G T C-3 G A P DH5 -G G C A C A G T C AA G G C T GA GAA T G-3 5 -A T G G T G G T GAAGA C G C C A G T A-3 3期王继玲,等.大鼠牙髓组织A I M 2炎症体表达及其与炎症反应关系4 0 9髓组织中,牙髓成纤维细胞中A I M 2的表达量有明显的增加(牙髓成纤维细胞层中绿色荧光分布范围增加且荧光强度升高)。见图2 A、B。2.3 R T-P C R检测A I M 2、c a s p a s e-1和白细胞介素1(I L-1)的基因表达水平单因素方差分析结果显示,5组间A I M 2、I L-1、c a s p a s e-1基因表达比较,差异均有统计学意义(F=1 6.3 4 5、5 0.3 7 3、6.2 1 7,P0.0 5);两两比较结果显示,每组数据与前一组进行对比,在开髓3d组与空白组比较,A I M 2和c a s p a s e-1基因表达量差异有统计学意义(F=11 7 8.9 1 0、8 1.2 2 4,P0.0 1、0.0 5),I L-1基因的表达量在开髓5d组有显著升高(F=1 6 4.4 1 4,P0.0 5),并且在7d后显著下降(F=1 8.7 8 6,P0.0 5)。见表2。A:正常组;B:开髓后5d;C:开髓后7d。HE染色,1 0倍。图1 大鼠牙髓组织病理形态表现A:健康牙髓组织;B炎性牙髓组织。蓝色荧光:D A P I标记的细胞核;绿色荧光:F I T C标记的A I M 2。免疫荧光染色,2 0倍。图2 不同大鼠牙髓组织中A I M 2的表达 表2 A I M 2、c a s p a s e-1、I L-1 基因表达的比较(n=3,C t值,xs)组别A I M 2c a s p a s e-1I L-1空白组4.2 2 00.1 2 99.2 6 01.0 4 36.5 6 00.6 0 4开髓3d 9.6 1 40.7 5 6*1 2.3 4 71.3 3 4*6.4 8 40.5 6 3开髓5d8.8 3 40.9 6 21 1.3 9 91.4 1 6 8.8 5 10.4 7 1*开髓7d9.4 5 41.2 8 08.8 8 21.5 0 5 6.3 7 70.3 0 5#开髓1 0d1 1.4 8 50.9 5 2 1 1.9 1 21.3 5 67.2 0 40.5 1 7 注:不同指标组间比较,F=1 6.3 4 5、6.2 1 7、5 0.3 7 3,P0.0 5。与空白组比较,*F=11 7 8.9 1 0、8 1.2 2 4、1 6 4.4 1 4,P0.0 5;与开髓3d组比较,#F=1 8.7 8 6,P0.0 5。3 讨 论哺乳动物的天然免疫系统是机体受到外来微生物侵害后启动的第一道防线3-4。免疫细胞对感染的病原微生物及其产物的识别主要是依赖于细胞质内存在的一类被称为“炎症体”的多蛋白复合物5-8,该蛋白复合物为炎症反应的启动者,能够感受外界信号刺激,激活c a s p a s e-1(半胱天冬酶-1),调控I L-1、I L-1 8和I L-3 3的成熟和分泌,从而引发炎症反应5,9-1 2。炎症体是c a s p a s e活化所必需的反应平台,能够识别病原体相关分子模式1 3-1 5,这是一种不同于宿主自身正常细胞的保守分子结构,它可以识别自身物质(例如宿主蛋白)和非自身物质(例如微生物),可以感知像病原微生物或细胞应激等“危险信号”的存在并做出反应,而对自身或共生菌的无害分子没有影响。A I M 2是一种炎症体,通过识别细胞质双链D NA与凋亡相关点状蛋白结合,激活下游的c a s p a s e-1,促进I L-1的合成及分泌,而I L-1是一种针对感染、损伤和炎症刺激最有利的促炎因子之一1 1,1 6-1 8。A I M 2炎症体在肿瘤和自身免疫性疾病中的作用已经得到了广泛的认同,但其在牙髓炎症反应中的作用尚未完全确定。近年来,A I M 2炎症体的体外研究取得了一些进展,而体内研究尤其是牙髓组织中的研究还很少。与体外实验相比,体内试验更接近生物体内实际条件,对后续深入研究以及临床 4 1 0青 岛 大 学 学 报(医 学 版)5 9卷转化更具有参考价值。因此,为了研究A I M 2炎症体在牙髓炎症中的作用,我们采用大鼠上颌磨牙单纯开髓诱导的牙髓炎模型,该方法相对简单实用,且通过设置开髓深度具有较强的条件可控性。本文HE染色结果显示,开髓3d后大鼠牙髓组织中有炎性细胞浸润,发生了明显的炎症反应,随着牙髓开放时间的延长,牙髓炎症反应程度逐渐加重,并在开髓7d后出现牙髓坏死。免疫荧光染色结果显示,在健康的大鼠牙髓组织中,A I M 2主要表达于成牙本质细胞层,在牙髓细胞层中仅有少量的表达;而在开髓后的大鼠牙髓细胞层中A I M 2的表达量有明显的增多。因此,我们认为在大鼠牙髓组织中存在A I M 2,并且随着牙髓开放时间的延长,A I M 2的表达量尤其是牙髓细胞层中有显著的升高,预示着A I M 2的表达与牙髓的炎症反应有一定的联系。至此,我们证实了牙髓组织中A I M 2炎症体的表达并且其表达量与炎症呈正相关。本文R T-P C R检测结果显示,牙髓组织开髓的早期,A I M 2、c a s p a s e-1和I L-1基因表达水平均有上升的趋势,表明A I M 2在大鼠牙髓组织中的表达量增加与牙髓炎症反应的程度有着密切的联系,并且A I M 2和c a s p a s e-1表达显著上调的时间节点要早于I L-1,而且上调的趋势更为显著。因此,我们推测A I M 2在大鼠牙髓炎的发生、发展中起到了正调节作用。后期随着牙髓组织的坏死其表达量出现了下降的趋势,我们认为可能是由于组织坏死引起的细胞量减少继而导致A I M 2表达量的下降。同时,A I M 2炎症体对细胞凋亡可能也有一定的调控作用,这一点还有待进一步研究证实。本文研究A I M 2炎症体在大鼠牙髓组织中的表达,结果显示,在基因水平上其表达量与炎症反应呈正相关;对其下游因子的检测结果显示,促炎细胞因子I L-1的表达量变化发生时间要晚于A I M 2,我们认为A I M 2能够在大鼠牙髓组织中对I L-1的表达起到正调节作用,即A I M 2在大鼠牙髓炎发生发展中起到了重要的促进作用。此外,A I M 2炎症体表达量的上调出现的非常早,在开髓3d即出现了显著的上升,提示A I M 2可能在大鼠牙髓炎症的早期或急性期发挥重要作用。开髓71 0d,A I M 2炎症体的表达量出现了小幅度的上升,而HE染色显示这一时间段内牙髓组织开始出现坏死。我们推测除了炎症反应以外,A I M 2炎症体可能与牙髓组织的坏死有着密切的联系。当然,这些结论尚需进一步的研究证实。牙髓炎一直是困扰临床医生的一个难题1 9-2 0,就目前的诊疗方式而言,根管治疗是治疗牙髓炎症,尤其是不可逆炎症的首选方法2 1-2 5。但是,在治疗过程中清除的牙髓组织难以再生,而缺少牙髓组织营养供给的牙本质因其有机物的降解而增加了其脆性,导致术后容易发生冠根折2 6-3 2,最终引起牙齿的缺失3 3。而对于炎症反应的早期干预是否能够有效地降低不可逆性牙髓炎的发生尚不确定3 4。本研究证实了牙髓组织中存在A I M 2炎症信号通路,这将会为后期寻找牙髓炎症上游的调控靶点提供研究基础,也可为后期临床牙髓炎的早期干预提供理论依据。参考文献1WAN GYF,Z HA ISF,WAN G HJ,e ta l.A b s e n t i nm e l a-n o m a2(A I M 2)i nr a td e n t a lp u l pm e d i a t e st h e i n f l a mm a t o r yr e s p o n s ed u r i n gp u l p i t i sJ.J o u r n a lo fE n d o d o n t i c s,2 0 1 3,3 9(1 1):1 3 9 0-1 3 9 4.2Z HA ISF,WAN GYF,J I AN G W K,e t a l.N e m o t i ch u m a nd e n t a l p u l pf i b r o b l a s t sp r o m o t eh u m a nd e n t a lp u l ps t e mc e l l sm i g r a t i o nJ.E x p e r i m e n t a lC e l lR e s e a r c h,2 0 1 3,3 1 9(1 0):1 5 4 4-1 5 5 2.3R AYA,C O T M,P U Z O G,e ta l.B a c t e r i a l c e l lw a l lm a c r o-a m p h i p h i l e s:p a t h o g e n-/m i c r o b e-a s s o c i a t e dm o l e c u l a rp a t t e r n sd e t e c t e db ym a mm a l i a n i n n a t e i mm u n es y s t e mJ.B i o c h i m i e,2 0 1 3,9 5(1):3 3-4 2.4O S H I UM IH,MA T S UMO T O M,S E YAT.R o l eo f u b i q u i t i nl i g a s e i ni n n a t ei mm u n er e s p o n s ei n m a mm a lJ.S e i k a g a k ut h e J o u r n a l o f J a p a n e s eB i o c h e m i c a l S o c i e t y,2 0 1 2,8 4(6):4 5 5-4 6 2.5S HA RMA B R,KA R K IR,KANN E GAN T IT D.R o l eo fA I M 2 i n f l a mm a s o m e i n i n f l a mm a t o r yd i s e a s e s,c a n c e ra n d i n-f e c t i o nJ.E u r o p e a nJ o u r n a lo fI mm u n o l o g y,2 0 1 9,4 9(1 1):1 9 9 8-2 0 1 1.6F A R S HC H I AN M,N I S S I N E N L,S I L J AMK IE,e ta l.T u m o r c e l l-s p e c i f i cA I M 2r e g u l a t e sg r o w t ha n d i n v a s i o no f c u-t a n e o u ss q u a m o u sc e l lc a r c i n o m aJ.O n c o t a r g e t,2 0 1 7,8(2 8):4 5 8 2 5-4 5 8 3 6.7KA R K IR,KANN E GAN T IT D.D i v e r g i n gi n f l a mm a s o m es i g n a l s i n t u m o r i g e n e s i s a n dp o t e n t i a l t a r g e t i n gJ.N a t u r eR e-v i e w sC a n c e r,2 0 1 9,1 9(4):1 9 7-2 1 4.8J A C O B SSR,D AMAN I AB.N L R s,i n f l a mm a s o m e s,a n dv i-r a l i n f e c t i o nJ.J o u r n a lo fL e u k o c y t eB i o l o g y,2 0 1 2,9 2(3):4 6 9-4 7 7.9F E R NAN D E S-A L N EMR IT,YUJW,J U L I ANAC,e ta l.T h e A I M 2i n f l a mm a s o m ei sc r i t i c a lf o ri n n a t ei mm u n i t yt oF r a n c i s e l l at u l a r e n s i sJ.N a t u r eI mm u n o l o g y,2 0 1 0,1 1(5):3期王继玲,等.大鼠牙髓组织A I M 2炎症体表达及其与炎症反应关系4 1 1 3 8 5-3 9 3.1 0HO R NUN G V,A B L A S S E R A,C HA R R E L-D E NN I SM,e ta l.A I M 2r e c o g n i z e sc y t o s o l i cd s D NAa n df o r m sac a s p a s e-1-a c t i v a t i n gi n f l a mm a s o m e w i t h A S CJ.N a t u r e,2 0 0 9,4 5 8(7 2 3 7):5 1 4-5 1 8.1 1WA R R E NSE,A RM S T R ON GA,HAM I L T ON M K,e t a l.C u t t i n ge d g e:c y t o s o l i cb a c t e r i a lD NAa c t i v a t e s t h e i n f l a mm a-s o m ev i aA i m 2J.J o u r n a lo fI mm u n o l o g y(B a l t i m o r e,M d:1 9 5 0),2 0 1 0,1 8 5(2):8 1 8-8 2 1.1 2S CHR O D E RK,MURUV EDA,T S C HO P PJ.I n n a t e i mm u-n i t y:c y t o p l a s m i cD NAs e n s i n gb yt h eA I M 2i n f l a mm a s o m eJ.C u r r e n tB i o l o g y,2 0 0 9,1 9(6):R 2 6 2-R 2 6 5.1 3T AN G D L,KAN G R,C OYN E C B,e ta l.P AMP sa n dD AMP s:s i g n a l 0 s t h a t s p u ra u t o p h a g ya n d i mm u n i t yJ.I m-m u n o l o g i c a lR e v i e w s,2 0 1 2,2 4 9(1):1 5 8-1 7 5.1 4L IN,XU HB,OUYR,e t a l.L P S-i n d u c e dC X C R 7e x p r e s-s i o np r o m o t e sg a s t r i cC a n c e rp r o l i f e r a t i o na n d m i g r a t i o nv i at h eT L R 4/MD-2p a t h w a yJ.D i a g n o s t i cP a t h o l o g y,2 0 1 9,1 4(1):3.1 5L UD GA T EC M.O p t i m i z i n gc a n c e rt r e a t m e n t st oi n d u c ea na c u t e i mm u n er e s p o n s e:r a d i a t i o na b s c o p a le f f e c t s,P AMP s,a n dD AMP sJ.C l i n i c a l C a n c e rR e s e a r c h,2 0 1 2,1 8(1 7):4 5 2 2-4 5 2 5.1 6MA S S OUM IRL,T E P E RY,AKOS,e t a l.D i r e c t e f f e c t so fl i p o p o l y s a c c h a r i d eo nh u m a np a n c r e a t i cc a n c e rc e l l sJ.P a n-c r e a s,2 0 2 1,5 0(4):5 2 4-5 2 8.1 7YOKOYAMAS,C A IY,MUR A T A M,e t a l.An o v e l p a t h-w a yo fL P Su p t a k et h r o u g hs y n d e c a n-1l e a d i n gt op y r o p t o t i cc e l l d e a t hJ.e L i f e,2 0 1 8,7:e 3 7 8 5 4.1 8MUR AKAM I K,KAM I MUR A D,HA S E B E R,e t a l.R h o d o b a c t e ra z o t o f o r m a n sL P S(R A P 9 9-L P S)i s aT L R 4a g o-n i s t t h a t i n h i b i t s l u n gm e t a s t a s i s a n de n h a n c e sT L R 3-m e d i a t e dc h e m o k i n e e x p r e s s i o nJ.F r o n t i e r s i nI mm u n o l o g y,2 0 2 1,1 2:6 7 5 9 0 9.1 9D ONN E RME Y E RD,D AMMA S C HK ET,L I P S K IM,e ta l.E f f e c t i v e n e s so fd i a g n o s i n gp u l p i t i s:as y s t e m a t i cr e v i e wJ.I n t e r n a t i o n a l E n d o d o n t i c J o u r n a l,2 0 2 2.d o i:1 0.1 1 1 1/i e j.1 3 7 6 2.2 0B R O D Z I KOWS KA A,C I E CHANOWS KA M,KO P KA M,e ta l.R o l e o f l i p o p o l y s a c c h a r i d e,d e r i v e d f r o mv a r i o u sb a c t e r i a ls p e c i e s,i n p u l p i t i s-as y s t e m a t i cr e v i e wJ.B i o m o l e c u l e s,2 0 2 2,1 2(1):1 3 8.2 1S K I T I OU IM,S E C KA,N I AN GSO,e t a l.T h e t r e a t m e n t o fm a t u r ep e r m a n e n tt e e t hw i t hi r r e v e r s i b l ep u l p i t i sb yc e r v i c a lp u l p o t o m y:as y s t e m a t i cr e v i e wJ.A u s t r a l i a n E n d o d o n t i cJ o u r n a