DB1509∕T 0002-2023 奶绵羊超数排卵-胚胎移植技术规程(乌兰察布市).pdf

ICS65.020.30CCSB 431509乌兰察布市地方标准DB1509/T 00022023奶绵羊超数排卵-胚胎移植技术规程Technical regulations for multipleovulation and embryo transfer of dairysheep2023-12-08 发布2024-01-08 实施乌兰察布市市场监督管理局发 布DB1509/T 00022023I前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由乌兰察布市农牧局提出并归口。本文件起草单位：内蒙古大学、乌兰察布市畜牧工作站、蒙天然牧业科技发展有限公司、乌兰察布市市场监督管理局、内蒙古丰东知盈牧业科技有限公司、察右中旗市场监督管理局。本文件主要起草人：王申元、张立、张立果、郑重、苏小虎、孟根、寇慧娟、李光鹏、朱怡静、萨仁格勒、杨磊、于涛、窦红艳、魏润元、苏广华、刘建宁、刘信、刘权、杨柳、郝佳惠、王秀莲、孙庆俊、郑少华、张莉、王春伟、徐全忠。DB1509/T 000220231奶绵羊超数排卵-胚胎移植技术规程1范围本文件规定了奶绵羊超数排卵及胚胎移植技术的术语和定义、方法及技术处理流程。本文件适用于规模化奶绵羊胚胎生产及胚胎移植。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 1571羊胚胎移植技术规程NY 5027无公害食品 畜禽饮用水水质DB15/T 2042肉羊同期发情与人工授精技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1奶绵羊dairy sheep以产奶为主的绵羊。3.2供体羊donor提供胚胎的母羊3.3受体羊recipient接受胚胎的母羊。3.4同期发情estrous synchronizationDB1509/T 000220232用激素制剂或其它方法控制并调整群体母畜发情周期,使其在预定的时间内集中发情的技术，也称同步发情。3.5发情周期estrous cycle在生理周期或非妊娠条件下，母羊每间隔一定的时期均会出现一次发情，通常将这次发情开始至下次发情开始、或这次发情结束至下次发情结束所间隔的时间，称为发情周期。奶绵羊发情周期 15 d18 d，平均为 16.5 d。3.6超数排卵multipleovulation以外源性促性腺激素诱发动物卵巢的卵泡发育，并排出超出自然几倍到几十倍具有受精能力的卵子的过程。3.7胚胎移植embryo transfer将良种母畜体内早期胚胎或体外受精及其他方式获得的早期胚胎，移植到同种生理状态相同的受体母畜体内，使之继续发育成个体的技术。4供体羊的选择与饲养管理4.1供体羊的选择供体羊应符合以下条件：a）产奶性能稳定，繁殖性能好，遗传性能稳定，谱系清楚；b）体质健壮，结构匀称，生殖器官正常，无遗传和传染性疾病；c）无流产史，无阴道炎、子宫内膜炎、卵巢囊肿等疾病；d）年龄宜在 8 月龄到 5 周岁之间；e）繁殖母羊产羔后有两次以上正常发情记录。4.2供体羊的饲养管理按照如下步骤进行：a）饲养环境良好，避免应激反应；b）制定合理的日粮配方；c）满足供体清洁饮水的需要（水质应符合 NY 5027 的要求）；d）超排前 8 周开始补充青绿饲料、维生素 A 和微量元素等；DB1509/T 000220233e）超排前 1 个月进行相关传染病的检疫，疫苗注射和体内外驱虫；f）适当运动，每天自由运动 1 h 以上。5种公羊的选择与饲养管理5.1种公羊的选择符合以下条件：a）遗传性能稳定、系谱完整清楚；b）符合该品种种公羊的体型外貌，具有明显的品种特征，应为特级或一级；c）体质健壮、生殖器官正常、无遗传和传染性疾病；d）年龄在 12 月龄到 6 周岁之间；e）提前调教好。5.2种公羊饲养管理按照如下方法：a）增加优质蛋白饲料，每只日给专用精料 0.75 kg1.5 kg，胡萝卜 0.5 kg，足量优质青干草及苜蓿；b）加强运动，每天早晚驱赶运动不应少于 2 h，按慢快慢的方式运动；c）在配种前两周排精，第一周排两次，第二周排一次。6供体羊的同期、超数排卵及人工授精6.1药品PG（氯前列烯醇）、CIDR(EAZI-BREED，含孕激素的阴道装置，一般含 0.3 g)、PMSG（孕马血清）、FSH（促滤泡素）、LH（促黄体生成素）、GnRH（促性腺激素释放激素）。6.2供体同期6.2.1自然同期以自然发情当日为 0 d。6.2.2PG 同期任意一天注射 PG，以注射 PG 后发情日为 0 d。6.2.3CIDR 同期任意一天放入 CIDR，记为 0 d。DB1509/T 0002202346.3超数排卵6.3.1激素剂量6.3.1.1FSH 剂量按照产品说明，使用剂量。6.3.1.2LH/GnRH 剂量按照产品说明，使用剂量。6.3.1.3PG 剂量肌注 0.12 mg/次0.15 mg/次。6.3.1.4PMSG 剂量肌注 200 IU/次300 IU/次。6.3.2超数排卵方法6.3.2.1自然发情或 PG 同期法奶绵羊以母羊发情之日做为发情周期的 0 d，在母羊发情周期的第 12 d13 d 开始，每天早晚各注射 1 次 FSH，中间间隔时间 12 h，连续 3 d，递减注射，在注射第六针 FSH 时同时注射 PG 0.15 mg（见附录 A）。6.3.2.2孕激素 CIDR 法奶绵羊在放入 CIDR 之日计为 0 d，在放入 CIDR 的第 10 d 开始超排（见附录 A），在注射第 1 针 FSH时，注射 PMSG 200 IU300 IU；在注射第五针 FSH 时，注射 PG 1.5 mg；在注射第六针 FSH 时，取出CIDR（见附录 A）。6.3.3供体羊发情鉴定应符合NY/T 1571的要求。6.4配种6.4.1采精6.4.1.1常规采精DB1509/T 000220235应符合DB15/T 2042的要求。6.4.1.2电采精对品质优良种公羊但无法正常采精的采用电采精技术。6.4.1.3精液检测应符合DB15/T 2042的要求。6.4.2输精6.4.2.1常规人工输精应符合NY/T 1571的要求。6.4.2.2腹腔内窥镜输精输精前 24 h 禁食空腹；内窥镜输精器械等提前用 0.1%新洁尔灭液浸泡消毒。将待输精羊麻醉保定。移植部位剪毛、剃毛、常规消毒，移植时呈仰卧斜倒立保定，角度为 4060。腹腔镜的套管穿刺针在母羊腹部乳房下腹中线两侧 5 cm8 cm 处的位置分别插入套管针，然后通过套管分别放入腹腔镜冷光源和输精枪，在卵巢有滤泡侧子宫角进行输精。输精时间及剂量如下：a）输精时间：选择在出现发情征兆后的 12 h18 h，一次适时输精；b）输精剂量：每只羊输 1 支 0.25 mL 细管冻精（或鲜精）。7奶绵羊手术冲胚及胚胎质量鉴定7.1冲胚应符合 NY/T 1571 的要求。7.2检胚应符合 NY/T 1571 的要求。7.3胚胎等级鉴定应符合 NY/T 1571 的要求。不同发育时期及不同等级胚胎形态见附录 B。7.4胚胎记录按附录 C 做好采胚记录。在细管塞上，标记好胚胎信息，包括胚胎的供体号、发育期、数量、质量DB1509/T 000220236以及生产日期。8胚胎移植8.1受体羊的选择及饲养管理8.1.1受体羊的选择应符合 NY/T 1571 的要求。8.1.2受体羊的饲养管理饲养管理按照如下步骤进行：a）单独组群、编号、饲养，保持环境相对稳定，避免应激反应；b）移植前 5 周，注射 VA、VD、VE 针剂，在移植前 8 周开始补饲，补充微量元素，如硒、锌等；c)移植前 8 周开始补饲，使其保持中等体况，以满足妊娠需要，防止流产；d）移植前 1 个月受体羊进行检疫、防疫和驱虫；8.1.3受体同期发情及鉴定应符合 NY/T 1571 的要求。8.1.4胚胎发育期与受体移植时间的对应关系胚胎发育期与受体移植时间的对应关系见附录 D。8.1.5手术法移植应符合 NY/T 1571 的要求。8.1.6 腹腔内窥镜移植在卵巢有黄体侧子宫角进行移植，移植方法同 5.4.2.2。DB1509/T 000220237附录A（资料性）奶绵羊 FSH 3 天注射法超数排卵奶绵羊 FSH 3 天注射法超数排卵见表 A.1。表 A.1 奶绵羊 FSH 3 天注射法超数排卵发情周期天数（d）PG 法1314151617CIDR 法1011121314时间早FSH+（PMSG）FSHFSH+（PG）发情、AILH/GnRH发情 AI晚FSHFSHFSH+PG发情、AI发情、AI注：括号中的数字为孕激素 CIDR 同期超排方案：a）AI 表示人工授精；b）FSH 和 LH 用生理盐水稀释；c）孕激素 CIDR 同期在第 5 次注射 FSH 同时肌肉注射 PG；自然发情和 PG 同期在第 6 次注射 FSH同时注射 PG；d）确定超排处理羊发情后立即注射 LH/GnRH 同时配种。如果 FSH 未注射完供体羊已发情，停止注射 FSH 同时配种。DB1509/T 000220238附录B（资料性）不同发育阶段的桑椹胚与囊胚形态B.1 不同发育阶段的桑椹胚与囊胚见图 B.1。自左至右依次为桑椹胚(a)、致密桑椹胚(b)、早期囊胚(c)、囊胚(d)和扩展囊胚(e)。图 B.1不同发育阶段的桑椹胚与囊胚B.2 A 级胚胎见图 B.2。A.A 级晚期桑葚胚（CM1）；B.A 级早期囊胚（EB1）；C.A 级囊胚（B1）。图 B.2A 级胚胎B.3 B 级胚胎见图 B.3。A.B 级早期桑葚胚（M2）；B.B 级晚期桑葚胚（CM2）。图 B.3B 级胚胎B.4 C 级、D 级胚胎见图 B.4。A.C 级早期桑葚胚（M3）；B.D 级退化胚。图 B.4C 级、D 级胚胎DB1509/T 000220239附录C（资料性）供体羊胚胎生产记录供体羊胚胎生产记录表见表 C.1。表 C.1供体羊胚胎生产记录表日期供体羊号年龄与配公羊号年龄同期方式FSH（产地）冲胚日期冲胚总数可用胚数细管编号级别数量包装号备注注：桑椹 A 级（M1）、紧缩桑椹 A 级（CM1）、早囊 A 级（EB1）、囊胚 B、扩张囊胚（EXB）、桑椹 B 级（M2）、紧缩桑椹B 级（CM2）、早囊 B 级（EB2）。DB1509/T 0002202310附录D（资料性）胚胎发育期与受体移植时间的对应关系胚胎发育期与受体移植时间的对应关系表见表 D.1。表 D.1胚胎发育期与受体移植时间的对应关系表胚胎发育期受体移植时间（发情之时为 0 d）28 细胞胚60h72 h桑椹胚（M)5.5d0.5 d早期囊胚（EB）6.0d0.5 d囊胚（B）6.5d0.5 d扩张囊（EXB）7.0d0.5 d