HPLC法测定复方鲜竹沥液中南烛木树脂酚-3α-O-β-d-葡萄糖苷的含量.pdf

化学工程师Sum335No.8ChemicalEngineerDOI:10.16247/ki.23-1171/tq.20230825分析测试HPLC法测定复方鲜竹沥液中南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷的含量*2023年第8 期肖小武，潘蕾，林凯鹏，付辉政,周志强（江西省药品检验检测研究院江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西南昌330 0 2 9）摘要：目的建立复方鲜竹沥液中南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷含量的测定方法。方法采用HPLC法,以资生堂capcellpakC1(250mm4.6mm5m）为色谱柱，柱温30，乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱，流速为1.0 mLmin-，检测波长为2 2 0 nm。结果南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷在0.2 2 6 4 11.32 gmL-1浓度范围内线性良好（R2=0.9999）,加标回收率为97.0 6%，RSD（n=9)为1.0 8%，且方法的精密度、稳定性以及重复性的RSD均小于3.0%。结论该方法快速、简便、准确，可为复方鲜竹沥液的质量控制和评价提供依据。关键词：复方鲜竹沥液;南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷;HPLC;含量测定中图分类号：R284.1Determination of lyoniresinol-3-O-d-glucopyranoside in Fufang Xianzhuli Ye by HPLC*XIAO Xiao-wu,PAN Lei,LIN Kai-peng,FU Hui-zheng,ZHOU Zhi-qiang(NMPA Key Laboratory for Quality Evaluation of Traditional Chinese Medicine,Jiangxi Provincial Engineering Research Centerfor Drug and Medical Device Quality,Jiangxi Institute for Drug Control,Nanchang 330029,China)Abstract:OBJECTIVE To establish a method for the determination of lyoniresinol-3-O-d-glucopyranosidein Fufang Xianzhuliye,METHODS The HPLC was used and peformed on capcell pak Cie(250mmx4.6mmx5m)with column temperature of 30.G r a d i e n t e l u t i o n w a s p e r f o r me d w i t h a c e t o n i t r i l e-0.1%p h o s p h a t e w a t e r a t a f l o wrate of 1.0 mLminand the detection wavelength was 220nm.RESULTS The linear ranges of phenol-3-O-D-glucoside have good resolution and linear relation ships(R2=0.9999),The spiked recoveries was 97.06%withRSD(n=9)was 1.08%.RSDs of methed precision,stability and reproducibility were less than 3.0%.CONCLUSIONThe method is simple,accurate,reliable,and could be uesd for quality control and evaluation of Fufang XianzhuliYe.Key words:Fufang Xianzhuli Yei lyoniresinol-3-O-d-glucopyranoside;HPLC;content determination复方鲜竹沥液具有清热化痰、止咳的功效，临床上主要用于痰热咳嗽、痰黄黏稠等，处方是由鲜竹沥、鱼草、生半夏、生姜、枇杷叶，桔梗以及薄荷素油组成，方中鲜竹沥为君药，占比40%1-31。复方鲜竹沥液现行质量标准收载在中国药典2 0 2 0 年版（一部）,标准中仅对鱼草、枇杷叶以及桔梗3味药进收稿日期：2 0 2 2-0 6-2 4基金项目：中国药品监督管理科学行动计划重点项目（NMPAJGKX-2023-047)；江西省重大科技研发专项（2 0 2 2 3AAG02020）；江西省药品监督管理局科研项目（2 0 2 0 JS04）作者简介：肖小武（198 5-），男，主管药师，2 0 11年毕业于南昌大学药物分析专业，硕士研究生，主要从事中药活性成分与质量控制研究。通信作者：周志强，男，主管药师，硕士研究生。文献标识码：A酪氨酸为对照的薄层色谱鉴别及pH值等检查项151。上述标准控制技术水平较低,标准落后,均难以有效控制产品的质量，直接影响鲜竹沥及其复方制剂临床用药的有效性和安全性。南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷是课题组在鲜竹沥中提取分离出的指标成分16-8 1,且也为竹子中的成分(9,10 1。据课题组调研得知，市场上鲜竹沥工艺混乱，存在严重价格倒挂现象。因此，建立鲜竹沥及其复方制剂中指标成分南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷的质量控制项目可保证鲜竹沥的来源真实性。本实验在课题组前期研究基础上参考文献11，12 1建立了复方鲜竹沥液中行了鉴别控制，并未对占处方量最大的君药鲜竹沥进行控制41,且收载在中华人民共和国卫生部药品标准（1992 版）的鲜竹沥质量标准也仅有性状、以26指标成分南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷的含量的HPLC测定方法，可为复方鲜竹沥液的质量标准研究以及质量评价提供参考。1实验部分1.11仪器与试剂Agilent12601I型高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；SartoriusBSA124S-CW型电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）;Capcell pak C1：柱(250mmx4.6mmx5m,资生堂)。南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷为实验室自制，且经标化纯度为98.2%。复方鲜竹沥液来自生产、流通以及使用环节的市场抽样，覆盖了市场上全部在生产的5家生产企业。阴性样品为按照复方鲜竹沥液生产工艺制备不含鲜竹沥的阴性样品。乙腈（色谱纯迪马科技有限公司）;H;PO、甲醇、正丁醇，分析纯，国药集团化学试剂有限公司。1.2实验方法1.2.1色谱条件?色谱柱为资生堂capcell pakC18（2 50 mmx 4.6 mmx 5m），以乙腈为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B,按表1中的规定进行梯度洗脱；流速为1mLmin；柱温为30,进样量为10 L,检测波长为2 2 0 nm。表1流动相洗脱程序Tab.1Mobilephase elution procedure时间/min流动相A/%05.0105.040.0102240.040.1228040.150.0801.2.2对照品溶液的制备精密称取对照品南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷14.15mg，置于2 5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品母液；精密吸取上述溶液5mL置于50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀,即得。1.2.3供试品溶液的制备精密量取本品50 mL,用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次50 mL,合并正丁醇提取液,蒸干,残渣加人甲醇,溶解后转移至2 5mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。1.2.4阴性样品溶液的制备按照处方工艺，制备不含鲜竹沥药材的阴性样品，按照1.2.3项下供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。肖小武等HPLC法测定复方鲜竹沥液中南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷的含量*11.32gmL-1之间线性关系良好。2.5米精密度实验精密吸取对照品溶液，注入液相色谱仪，连续测定6 次,结果对照品峰面积RSD为 0.43%，表明仪器精密度良好。2.6重复性实验取本品（S1)6份，依照1.2 实验方法制备供试品溶液并进行测定，结果供试品溶液中南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷含量平均值为2 2.7 8 gmL1,RSD为1.6 7%,结果表明,该方法具有较好的重复性。2023年第8 期2结果与讨论2.1前处理方法的确定本实验最初考察了未经处理的原液进样测定，但因基质复杂难以分离,且样品含糖量较高,对色谱柱损伤较大。因此,实验考察了乙酸乙酯、水饱和的正丁醇萃取以及大孔树脂柱层析等前处理方式，结果发现，用同比体积水饱和的正丁醇萃取4次的方法简单、方便且准确度高，故实验采用水饱和的正丁醇萃取的前处理方法。2.2村检测波长的确定取对照品溶液用DAD检测器对（+）-南烛木树脂酚-3-O-d-吡喃葡萄糖苷对照品与样品溶液中与（+)-南烛木树脂酚-3-O-d吡喃葡萄糖苷对照品相应位置上色谱峰在40 0 2 0 0 nm波长范围内进行光谱扫描，结果显示，（+）-南烛木树脂酚-3-O-d-吡喃葡萄糖苷在2 10 nm波长处有最大吸收。由于2 10 nm处于末端吸收，干扰较大,故选择220nm作为检测波长。2.3专属性实验考察取对照品、供试品以及阴性样品溶液按照1.2.1条件进行测定，结果对照品与供试品溶液中南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷色谱峰理论塔板数均大于50 0 0，且复方鲜竹沥液中其他成分对南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷色谱峰无干扰(图1),表流动相B/%明方法的专属性强。9090787820202.4线性关系考察精密吸取上述对照品母液10、15、2 0 L以及对照品溶液2、5工注人液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标进行回归计算并绘制标准曲线，南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷的回归方程为Y=6090.7X+283.79,R=0.9999,说明南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷在0.2 2 6 42023年第8 期6.05.04.03.02.01.00.0246810121416182022,24262830323436384042 444648保留时间/min(B)样品溶液6.05.0nvu.01x/(l4.03.02.01.00.09.0(c)阴性样品溶液8.07.06.0nvw.01x/5.04.03.02.01.00.0肖小武等：HPLC法测定复方鲜竹沥液中南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷的含量*（A)对照品溶液246810121416182022,242628303234363840保留时间/min2468101214 1618202224262830323436384042 444648保留时间/min图1专属性实验色谱图Fig.1HPLC chromatograms of specificity test2742444648282.7稳定性实验取本品（s1)1份，依照1.2 实验方法制备供试品溶液，分别在0、4、8、12、18、2 4h进行测定，结果南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷峰面积的RSD为1.09%,表明南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷峰在2 4h内稳定性较好。2.8加标回收实验采用加样回收实验，精密量取已知含量的本品（S1)2 5m L，按相对于本品的8 0%、10 0%、12 0%3个含量比例精密添加南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷对照品溶液，按“1.2.3 项下供试品溶液制备方法制备，并照“1.2.1 项下条件测定，计算回收率,结果见表2。表2 加标回收率实验结果Tab.2Resultof recoveryexperiments样品取样量中的量加人量测得量回收率回收率RSD/mL/g/g25569.5由表2 可见，南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷的平均回收率为9 7.0 6%，RSD为1.0 8%。表明方法回收率良好。2.9实际样品测定按上述拟定的方法，对收集样品中南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷的含量进行测定，结果发现,D企业的6 批次样品南烛木树脂酚-3-O-d-吡喃葡萄糖的含量远高于其他4家企业。根据课题组调研得知，因鲜竹沥温度等生产工艺参数不固定，导致其成分含量差别较大，且该企业投料的鲜竹沥来源不同于其他4家生产企业，故其含量明显偏高。结果见表3。由表3可见，同时采用该方法对市场上在生产的5家企业的多批次样品中南烛木树脂酚-3-0-d-葡萄糖苷含量进行测定,从样品测定结果可知其含量范围为16.9 7 8 4.6 5gmL=，平均含量为34.43gmL-,考虑到鲜竹沥生产工艺差异等,故拟定其限度以平均值的7 0%计，即34.43*7 0%=2 4gmL，暂定本品每1ml含南烛木树脂酚-3-O-d-吡喃葡萄糖不得少于2 4g。肖小武等：HPLC法测定复方鲜竹沥液中南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷的含量批号S1AS2AS3AS4AS5AS6AS7BS8BS9BS10BS11BS12BS13CS14CS15CS16C平均S17/ug/%452.896.8297.061007.9452.81012.697.86452.81001.295.34566.01107.395.64566.01119.497.16566.01122.697.72679.21227.296.83679.21232.197.56679.21239.298.602023年第8 期表3样品测定结果（n=4）Tab.3Resultof sampletest样品编号生产企业C/%/%1.08含量/gmL-120011022.7819013726.0918120124.0819123022.6219031617.7820011021.632020021231.022020030429.082020021417.782020030523.642020030225.072020021920.3319124217.7119115624.0919061219.7819095825.6919124427.78S18CS19DS20DS21DS22D$23D$24D$25E$26ES27E$28ES29ES30E3丝结论本研究选择鲜竹沥中指标成分南烛木树脂酚-3-O-d-葡萄糖苷并采用高效液相色谱法进行含量测定，通过对实验方法的方法学考察，结果表明，该方法专属性强、准确稳定，可为复方鲜竹沥液以及其他含鲜竹沥的复方制剂质量标准研究、质量控制与评价提供实验依据和参考。参考文献1宋立人,洪恂,丁绪亮,等.现代中药学大辞典 M.北京：人民卫生出版社,2 0 0 1.8 39.2杨宏志.热痰妙方一复方鲜竹沥液 J.中医健康养生，2 0 19,5(7)：31-32.3国家药典委员会.临床用药须知（中药成方制剂卷）M.北京：中国医药科技出版社，2 0 11.4国家药典委员会.中国药典（一部）s.2020:1342-1343.北京：中国医药科技出版社，2 0 2 0.(下转第7 0 页）190928B191145B200413B200341B200430B200343B20041820041720050220042120042020050120041222.7882.0367.3878.2780.6277.3784.6532.3223.7816.9721.0827.0421.69703结论(1)以1,8-二羟基萘和芥酸酰胺合成了双尾表面活性剂ZW。H NM R 分析结果证明,合成反应生成了目标产物；室温下zW的临界胶束浓度CMC为48.84molL-1，并且随着测试温度升高，CMC呈下降趋势。（2)采用分子动力学模拟对比研究了无机盐浓度对设计的耐盐型VES头基水化层的破坏,在理论上证明了所设计分子具有相对较高的耐盐性，同时耐盐性能测试结果也验证了MD模拟计算结果。（3)使用鄂尔多斯盆地某油田地层两种不同矿化度卤水（10 56 8 0 mgL-1和510 32 mgL-)配制成的两种压裂液B和A进行压裂液性能考察，实验结果表明，当温度稳定在12 0 时，B和A黏度分别稳定在40 mPas和7 0 mPas左右,2 0/40 目陶粒在两种压裂液体系中的沉降速度均小于0.2 mms1,溶液减阻率可达7 0%以上；岩芯伤害测试结果表明,B和A对岩芯渗透率的破坏率均小于10%。表明该清洁压裂液具有良好的耐高温性能、携砂性能、减阻性以及低伤害。参考文献【1岳泉.黏弹性双子表面活性剂压裂液的制备及性能评价J.辽宁化工,2 0 2 1,50(6):7 7 6-7 7 9.2Santos L,Taleghani A D,Li G.Smart expandable proppants toachieve sustainable hydraulic fracturing treatmentscJ/SPE Annual徐岗等：鄂尔多斯石油耐盐型清洁压裂分子模拟及室内研究*1993,158(1):40-45,2023年第8 期Technical Conference and Exhibition,ATCE 2016.Society ofPetroleumEngineers(sPE),2016.3Montgomery,C.T.:Smith,M.B.Hydraulic fracturing:history of anenduring technologyJ.Pet.Technol.,2010,62(12):26-28;30-32.4熊利军,王犁，吴洋，等.耐高温清洁压裂液的制备及性能评价.精细化工,2 0 2 2,39(1):2 0 4-2 11.5马喜平，穆红莉，郭士贵.压裂液用黏弹性表面活性剂的合成及性能J.应用化学，2 0 2 1,38（8)：92 3-932.6 MMao J,Yang X,Wang D,et al.A novel gemini viscoelastic surfactant(VEs)forfracturing fluids with good temperature stabilityJJ.RSCAdvances,2016,6(91):88426-88432.7 赵健，申金伟，鲍文辉，等.VES-YF清洁压裂液的构筑及适用性研究J.石油化工高等学校学报，2 0 19,32（3）：6 5-7 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