血清样本与抗凝血液样本在猪...综合征抗体检测中的比较分析_吴蔚.pdf

福建畜牧兽医第45卷第1期2023年血清样本与抗凝血液样本在猪瘟及猪繁殖与呼吸综合征抗体检测中的比较分析吴蔚1廖媛1肖丰庆1詹文辉1董 政2伍宏彪3吴发丹1（1.南平市动物疫病预防控制中心福建南平354200；2.光泽县动物疫病预防控制中心福建光泽354100；3.松溪县动物疫病预防控制中心福建松溪353500）摘要血液样本的采集是抗体检测的重要环节。血液的处理有不加抗凝剂与加入抗凝剂两种方式，本文对比分析两种方式的猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征抗体检测结果。结果表明，采用这两种方式的抗体检测结果差异不显著，总体区别不大，但会影响个别样本的判定结果。关键词血清抗凝血抗体检测比较分析文献标识码：A文章编号：1003-4331（2023）01-0007-02Comparative analysis of serum and anticoagulant blood in antibody detection of CSF and PRRSWu Wei1Liao Yuan1Xiao Fengqing1Zhan Wenhui1Dong Zheng2Wu Hongbiao3Wu Fadan1(1.Nanping Center for Animal Disease Control and Prevention,Nanping Fujian 354200;2.Guangze Center for Animal Disease Control and Prevention,Guangze Fujian 354100;3.Songxi Center for Animal Disease Control and Prevention,Songxi Fujian 353500)Abstract Blood drawing is an important part of antibody detection.There are two ways of blood treatment:with or without anticoagu-lant.The results of antibody detection of CSF and PRRS by these two ways were compared and analyzed in this paper.The resultsshowed that there was no significant difference between the two methods,and the overall difference was not significant,but it wouldaffect the decision of individual samples.Key words SerumAnticoagulationAntibody detectionComparative analysis在畜牧兽医采样检测过程中，对于血液样本，一般有两种不同的处理方式，一种是未加抗凝剂采集的血清样本，另一种是加入抗凝剂（草酸钾、肝素、枸橼酸钠、EDTA等）处理的样本1。在对家畜常规免疫后，通常采用前一种方式采集血清检测家畜的抗体水平。但也有发现使用加入抗凝剂的真空采血管对家畜进行采样，静置离心后析出上清液，把上清液错当血清送检。本文通过对同一样品不同处理（不加抗凝剂与加入抗凝剂）进行比较分析，初步研究加入抗凝剂对待检样品抗体水平的影响。1材料与方法1.1样本与试剂从4个以上不同规模场采集猪全血共20份，采集时同一血样分为两组，一组不加抗凝剂，另一组加入抗凝剂。猪瘟（CSF）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）抗体ELISA检测试剂盒（世纪元亨）。1.2仪器低速离心机、微量移液器、纯水仪、恒温培养箱、酶标仪等。1.3方法1.3.1试验设计将同一血样分为两组，采血时一组不加抗凝剂，另一组加入抗凝剂（或直接使用加入抗凝剂的真空管进行采集）。采集的同时对两组平行血样进行标记，不加抗凝剂的组按次序标注120，加入抗凝剂的组按次序对应标注120。将两组血样静置一段时间后离心，取上清液进行检测。猪瘟（CSF）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）抗体检测分别依据试剂盒说明书进行，大体步骤为：稀释、加样、温育、洗板，加酶结合物、洗板，加底物、加终止液，在450 nm波长用酶标仪测定OD值。1.3.2结果判定在阴性、阳性对照成立的条件下，样品OD值定性临界值（即阳性对照OD值0.3）为阳性，否则为阴性。2结果试验测定结果见表1。将不加抗凝剂的样品和加入抗凝剂的样品的猪瘟（CSF）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）抗体检测的OD值作成对样本t检验，结果见表2。由表2可以看出，P（sig.）=0.8790.05，差异不显著。3分析与讨论从表1可以看出，不加抗凝剂与加入抗凝剂的血液样本在分别进行猪瘟、猪蓝耳病的ELISA检测中，大部分还是维持原先的定性结果，即阴性、阳性7福建畜牧兽医第45卷第1期2023年的结果基本一致。只有个别样本（如13号、19号）的猪蓝耳病抗体检测定性结果不同。通过分析发现，加入抗凝剂后，这两个样本的蓝耳病检测OD值稍有不同，导致越过判断定性的临界值，使得弱阳性变为阴性，从而影响个别样本的定性结果。而由表2的成对样本t检验结果可见，差异不显著，说明不加抗凝剂与加入抗凝剂对样本的检测结果总体影响并不大。在针对动物免疫效果的抗体水平检测中，通常是采用不加抗凝剂的采血器进行采血，血液静置凝集后析出血清。但偶尔也会发现有基层兽医使用含抗凝剂的采血管，加入抗凝剂后，血液不会凝固，离心分层后上清液不是血清，而是血浆；而血清和血浆的最大区别就是血清中无纤维蛋白原。对于抗体，则普遍存在于血清与血浆中。在人医研究中，一些抗凝剂对血液测定结果有较大影响，如肝素和枸橼酸钠会使PLT计数降低2，加入EDTA-Na2的样本不能用于钙、钠、含氮物质的测定3，不同的样本类型（血清和抗凝血浆）在人医的九项生化指标检测中测定值有显著差异等4。而本次的猪瘟、猪蓝耳病抗体检测不受较大影响。考虑成本及方便实用等各方面因素，日常的抗体检测采样中，还是建议使用不加抗凝剂的一次性采血器进行采样，静置一段时间后离心，用自然析出无纤维蛋白原的血清检测抗体、评估免疫效果。参考文献：1梁春滢,李小江.抗凝剂对体外诊断试剂检测结果的影响及其干扰研究方法J.中国医疗器械信息,2016,22(22):1-3.2聂凤英,焦晓宁.不同抗凝剂对血液分析仪测定参数的影响J.中国当代医药,2012,19(23):140-141.3李霞莲,苗晋华.抗凝剂对实验室检查结果的影响J.实用医技杂志,2015,22(6):620-621.4刘远琴.探讨血清与抗凝血浆样本在临床检验分析中的应用J.中国实用医刊,2016,43(5):97-98.表1不加抗凝剂与加抗凝剂的血液抗体检测结果样品号不加抗凝剂样品号加抗凝剂CSF抗体OD值试验结果PRRS抗体OD值试验结果CSF抗体OD值试验结果PRRS抗体OD值试验结果12345678910111213141516171819202.86322.70292.13133.03252.89092.71653.05162.70782.78782.62292.1352.21021.44411.55011.45182.63862.54892.58932.79932.7294+0.49430.68230.72060.50050.46470.18780.32590.13830.12710.12540.57670.59930.37810.09560.51660.58470.29250.44640.38170.5153+-+-+-+12345678910111213141516171819202.86962.54472.0492.98482.95572.45582.90232.83722.59333.14092.25641.3272.16882.6452.19782.7492.72732.60472.67721.8611+0.37860.62480.51920.45270.51920.16040.13180.150.11250.16290.66880.55070.29630.1090.62430.66610.2690.42920.32730.3876+-+-+-+-+表2成对样本t检验成对样本成对差分tdfSig.（双侧）均值标准差均值的标准误差分的95%置信区间下限上限对1：不加抗凝剂-加抗凝剂-.0082525.3395279.0536841-.1168388.1003338-.15439.8798