盐酸氮卓斯汀滴眼液对实验动物眼部的安全性评价试验_周艳艳.pdf

1305药品评价 Drug Evaluation 2022,19（21）盐酸氮卓斯汀滴眼液对实验动物眼部的安全性评价试验周艳艳1，文皓頲2，杨倚天1，徐丽瑛1，郑国安1，张俊明11.江西省医疗器械检测中心，江西省药物安全评价重点实验室，江西 南昌 330029；2.江西中医药大学，江西 南昌330004摘要目的：观察多次给予盐酸氮卓斯汀滴眼液、原研药和赋形剂后实验兔眼及周围组织是否产生刺激症状及症状强弱，客观评价其可能存在的毒性反应及安全性，为临床安全用药提供实验参考。方法：取检疫并符合要求的新西兰兔12 只，分为供试品组、赋形剂组和原研药品组，采用左右同体自身对照法，按组别左眼分别给予受试物盐酸氮卓斯汀滴眼液、不含主药成分的赋形剂阴性溶液和原研药品，实验兔右眼均滴入 0.9%氯化钠注射液作为对照，每次给药 1 滴，2 次/d，每次间隔 6 h，连续给药 28 d，给药期间和规定的观察期间用裂隙灯观察实验兔眼球是否存在刺激性及其他损伤。结果：盐酸氮卓斯汀滴眼液、赋形剂阴性溶液、市售的原研盐酸氮卓斯汀滴眼液和 0.9%氯化钠注射液均未对兔眼及眼周围产生刺激反应，结膜、虹膜均未见异常反应，评分均为 0。结论：盐酸氮卓斯汀滴眼液、赋形剂和原研药品对实验兔眼局部用药均无刺激性反应。关键词药物毒性；药物相关性副作用和不良反应；盐酸氮卓斯汀滴眼液；兔；眼刺激DOI:10.19939/ki.1672-2809.2022.21.07Safety Evaluation of Azelastine Hydrochloride Eye Drops on the Eyes of Experimental AnimalsZHOU Yanyan1,WEN Haoting2,YANG Yitian1,XU Liying1,ZHENG Guoan1,ZHANG Junming11.Jiangxi Medical Device Testing Center,Jiangxi Province Key Laboratory for Safety Evaluation of Drugs,Nanchang Jiangxi 330029,China;2.Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanchang Jiangxi 330004,China.Abstract Objective:To observe the irritation symptoms and the strength of symptoms in rabbit eyes and surrounding tissues after repeated administration of azelastine hydrochloride eye drops,the original drug and excipient,and to objectively evaluate the possible toxic reactions and safety,so as to provide experimental reference for clinical safe drug use.Rabbit eyes was observed after administering azelastine hydrochloride eye drops,evaluate the irritation and reaction intensity of the experimental rabbit eyes within a specified time,and objectively evaluate the possible toxicity and safety of the drug,which is clinically safe Provide reference for medication.Methods:Twelve New Zealand rabbits that met the quarantine requirements were divided into test group,excipient group and original study drug group.The left and right body self control method was used.The subjects were given azelastine hydrochloride eye drops,excipient negative solution without the main drug component and original study drug respectively in the left eye of each group.0.9%sodium chloride injection was dropped into the right eye of all experimental rabbits as control.One drop per time,twice a day,each time at an interval of 6 h,continuous administration for 28 d.Slit lamp was used to observe whether irritation and other injuries existed in the eyes of experimental rabbits during the administration and the specified observation period.Results:Azelastine hydrochloride eye drops,excipient negative solution,commercially available original azelastine hydrochloride eye drops and 0.9%sodium chloride injection did not produce irritating reactions to the eyes and surrounding eyes of rabbits,and no abnormal reactions were observed in conjunctiva and iris,and the scores were all 0.Conclusion:Azelastine hydrochloride eye drops,excipients and the original drug had no irritant reaction to local administration of experimental rabbit eyes.Key Words Drug toxicity;Drug-related side effects and adverse reactions;Azelastine hydrochloride eye drops;Rabbit;Eye irritation作者简介：周艳艳，硕士，助理研究员。研究方向：新药药效及安全性评价。E-mail:通信作者：张俊明，副研究员。研究方向：新药药效及安全性评价。E-mail:过敏性结膜炎（allergic conjunctivitis，AC）是眼科临床上较常见的疾病，可见眼部过敏产生的一些刺激性症状，如眼痒并伴有流泪、畏光、刺痛、分泌物等，结膜水肿同时眼睑肿胀，血管扩张或出血可导致眼结膜发红1-2。过敏性结膜炎通常分为几类亚型3：季节性结膜炎（SAC）、常年性结膜炎（PAC）、春季性角结膜炎（VKC）、巨乳头性结膜炎（GPC）和特应性角结膜炎（AKC），临床上1306药品评价 Drug Evaluation 2022,19（21）以季节性和常年性较为常见。季节性角结膜炎患者经常伴随着出现相关的鼻部症状，诱发鼻结膜炎，特应性严重时，最终会导致视力下降，对患者日常生活产生不良后果。现代医学临床仍主要以眼局部用药缓解症状为主4。目前市售的盐酸氮卓斯汀滴眼液为原研进口药品，用于治疗过敏性结膜炎，效果良好。本试验通过在规定时间内观察各组实验兔经眼分别给药盐酸氮卓斯汀滴眼液（企业自制）、赋形剂及原研药品对实验兔眼的刺激反应及反应程度，比较之间的区别，客观评价委托方生产的盐酸氮卓斯汀滴眼液可能存在的毒性反应5-6。1 实验材料1.1 供试药物供试品：盐酸氮卓斯汀滴眼液（企业自制），规格：8 mL4 mg，由江西珍视明药业有限公司提供，批号：181102；赋形剂：不含盐酸氮卓斯汀阴性溶液，规格：8 mL/支，由江西珍视明药业有限公司提供，批号：190501；原研药品：盐酸氮卓斯汀滴眼液，规格：6 mL3 mg（0.05%），由 Tubilux Pharma S.p.A 生产，批号：7M663A；空白对照：0.9%氯化钠注射液，规格：250 mL2.25 g，生产单位：江西科伦药业，批号：D19040605-2。1.2 实验动物参照药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则6，本次实验采用普通级新西兰兔，自长沙市天勤生物技术有限公司购入，生产许可证号：SCXK（湘）2014-0010。雌雄各半，1215 w，2.02.6 kg。购入动物饲养于江西省药物研究所安全评价中心，实验动物使用许可证号：SYXK（赣）2018-0008。1.3 实验仪器及试剂1.3.1 仪器 LYL-裂隙灯（凤凰光学仪器集团）；JS15-01 电子天平（上海浦春计量仪器有限公司）。1.3.2 试剂 荧光素钠（批号：C10530874，上海麦克林生化科技有限公司）。2 实验方法5与结果2.1 给药前眼检查给药前 1 d 用裂隙灯显微镜检查实验兔的双眼，有存在眼及周围组织刺激症状、角膜缺陷和脸结膜、球结膜损伤的动物不能用于试验。2.2 分组将符合“2.1”要求的实验兔 12 只分为 3 组，赋形剂组、供试品组和原研药品组，每组各 4 只，雌雄各半，按组别左眼分别给予赋形剂（不含盐酸氮卓斯汀阴性溶液）、盐酸氮卓斯汀滴眼液（企业自制）和原研的盐酸氮卓斯汀滴眼液，各组右眼均给予 0.9%氯化钠注射液作为空白对照，具体见表 1。2.3 给药方式用左右同体对照法，将滴眼液弃去 23 滴，拉开实验兔左眼下眼睑呈杯状，各组实验兔分别滴入相应赋形剂溶液、盐酸氮卓斯汀滴眼液和原研药品各 1 滴，然后轻合眼睑约 10 s，实验兔右眼均滴入0.9%氯化钠注射液 1 滴，轻合眼睑约 10 s。2 次/d，每次给药间隔为 6 h 左右，连续给药 28 d。2.4 观察项目（1）给药期间，每日给药前用 1%荧光素钠及裂隙灯对兔眼部进行检查，观察角膜、结膜、虹膜和其他损伤，并按表 2 进行评分。（2）停药后，于末次给药后 1、2、4、24、48 和 72 h 用 1%荧光素钠及裂隙灯对兔眼部进行检查，观察角膜、结膜、虹膜和其他损伤，并按药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则6标准（见表 2）进行评分。如存在损伤，再延长 21 d 的观察期。（3）在给药前 1 d 和停药后的观察期（1、2、4、24、48 和72 h）对实验兔给药部位进行拍照。（4）按表 2 的要求，将每只动物所有的评分分值相加得总分，将总分与动物数求均值，即得最后分值。按药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则6中的标准（见表 3）判断其刺激程度。表1 盐酸氮卓斯汀滴眼液实验兔眼刺激性试验分组设计组别药物给药量/（滴/次）给药频率/（次/d）给药周期/d给药部位兔数/只雌雄赋形剂组0.9%氯化钠注射液1228右眼22不含盐酸氮卓斯汀的赋形剂阴性溶液1228左眼供试品组0.9%氯化钠注射液1228右眼22盐酸氮卓斯汀滴眼液（企业自制）1228左眼原研药品组0.9%氯化钠注射液1228右眼22市售的原研盐酸氮卓斯汀滴眼液1228左眼1307药品评价 Drug Evaluation 2022,19（21）表2 眼刺激反应分值标准眼刺激反应分值角膜 无混浊0 散在或弥漫性混浊，虹膜清晰可见1 半透明区易分辨，虹膜模糊不清2 出现灰白色半透明区，虹膜细节不清，瞳孔大小勉 强可见3 角膜不透明，虹膜无法辨认4虹膜 正常0 皱褶明显加深、充血、肿胀，角膜周围轻度充血，瞳孔对光仍有反应1 出血/肉眼可见坏死/对光无反应（或其中一种）2结膜 充血（指睑结膜和球结膜）血管正常0 血管充血呈鲜红色1 血管充血呈深红色，血管不易分辨2 弥漫性充血呈紫红色3水肿 无水肿0 轻微水肿（含眼睑）1 明显水肿伴部分眼睑外翻2 水肿至眼睑近半闭合3 水肿至眼睑超过半闭合4分泌物 无分泌物0 少量分泌物1 分泌物使眼睑和睫毛潮湿或黏着2 分泌物使整个眼区潮湿或黏着3最大总积分16表3 眼刺激性评价标准分值评价03无刺激性48轻度刺激性912中度刺激性1316重度刺激性2.5 结果2.5.1 给药前眼检 实验兔在给药前双眼裂隙灯检测，未发现眼及眼周组织的刺激症状、角膜缺陷及结膜损伤等异常情况，可用于试验，如图 1 所示。赋形剂组（给药前）供试品组（给药前）市售药品组（给药前）图1 给药前24 h眼检结果2.5.2 多次给药试验眼检 三组实验兔左眼分别滴入盐酸氮卓斯汀滴眼液、赋形剂和原研药品，局部用药及停药后，用药部位结膜、虹膜及角膜均未发现异常，眼睑无水肿，未见异常分泌物，眼刺激反应平均积分均为 0。实验兔右眼滴入空白溶液作为自身对照，局部用药部位结膜、虹膜及角膜均未发现异常，眼睑无水肿，未见异常分泌物，眼刺激反应平均积分均为 0，结果见图 2、表 4。赋形剂组（阴性溶液）-L 赋形剂组（0.9%氯化钠注射液）-R 供试品组（盐酸氮卓斯汀滴眼液）-L 供试品组（0.9%氯化钠注射液）-R 市售药品组（市售盐酸氮卓斯汀滴眼液）-L 市售药品组（0.9%氯化钠注射液）-R 图2 末次给药后72 h眼检结果表4 盐酸氮卓斯汀滴眼液实验兔眼刺激性试验结果评价表（n=4）组别刺激平均积分刺激程度赋形剂组 0.9%氯化钠注射液（右侧）0无刺激 不含盐酸氮卓斯汀滴眼液 阴性溶液组（左侧）0无刺激供试品组 0.9%氯化钠注射液（右侧）0无刺激 盐酸氮卓斯汀滴眼液组（左侧）0无刺激原研药品组 0.9%氯化钠注射液（右侧）0无刺激 市售盐酸氮卓斯汀滴眼液组（左侧）0无刺激3 讨论过敏性结膜炎是一种变态反应性的眼表疾病，1308药品评价 Drug Evaluation 2022,19（21）近年来，随着生活环境和气候的变化，化妆品的广泛应用，其发病率呈逐年增长的趋势7。该病首要的治疗就是快速缓解患者的眼痒、眼红等不适症状。氮卓斯汀滴眼液可在 1020 min 内显著缓解过敏性结膜炎导致的眼睛瘙痒、分泌物渗出、血管舒张，并在治疗7 d后抑制炎症细胞浸润和黏附分子-1的表达。抗组胺药物也是治疗变态性结膜炎的常用药物，氮卓斯汀是对组胺 H1 受体具有高亲和力的酞菁酮衍生物，对 H2 受体也具有一定的亲和力8，通过拮抗呼吸道 H1 受体，氮卓斯汀可阻断大鼠肥大细胞、兔和人嗜碱性细胞对组胺的释放，对白三烯和血小板聚集因子产生拮抗活性，从而抑制肥大细胞及其他细胞介导的过敏反应。另外还可抑制体内 IgE 介导的炎症反应9-10。盐酸氮卓斯汀可明显改善结膜炎，能有效改善炎症因子指标水平，促进泪膜恢复。刺激性是非口服途径给药制剂对局部产生的毒性，为临床前安全性评价的组成部分。眼刺激性是观察滴眼液是否引起眼及其周围黏膜的红肿、充血、变性等炎症性改变。实验兔眼睛对于药物刺激性较为敏感，因此，通过兔眼结膜囊内给予受试物，对于滴眼液安全性评价，其是重要内容之一11。本实验参照药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则6和 Draize 试验5，以新西兰兔为研究对象，通过比较委托方提供的受试物与受试物所使用的辅料（赋形剂）对实验兔眼的刺激性，以判断受试物和赋形剂是否会产生刺激性和产生刺激性的原因；对委托方生产的盐酸氮卓斯汀滴眼液与原研药品对实验兔的眼刺激进行试验和评价，比较受试物与原研药的刺激性反应症状是否一致，评估受试物临床用药的安全性。本研究给药方式、给药量及频次与临床拟用方案一致，采用结膜囊内给药，每天 2 次，1 滴/次。受试物在临床上为长期应用药物，根据指导原则6，选择最长的给药时间 28 d。结果表明，受试物、赋形剂及原研药品三者的刺激记分均为 0，与自身对照无明显的区别，按刺激判断标准受试物对实验兔眼无刺激性，提示同条件下三者对实验兔眼均未发现与给药有关的刺激性反应，停药后也均未观察到与药物有关的刺激性反应，委托方生产的盐酸氮卓斯汀滴眼液与原研药品局部用药安全性均较好，具有广阔的临床使用前景。参考文献1 ABELSON M B,SHETTY S,KORCHAK M,et al.Advances in pharmacotherapy for allergic conjunctivitisJ.Expert Opin Pharmacother,2015,16(8):1219-1231.2 李勇,曾统英.金晶滴眼液对家兔急慢性结膜炎模型的影响 J.海峡药学,2019,31(8):41-44.3 蔡乐琪,李晔,柯婉仪,等.过敏性结膜炎发病机制的研究进展 J.眼科学报,2022,37(4):342-347.4 LEONARDI A,PILIEGO F,CASTEGNARO A,et al.Allergic conjunctivitis:a cross-sectional studyJ.Clin Exper Allergy,2015,45(6):1118-1125.5 茆文革,张恒东,张增利,等.皮肤、眼与骨毒理学 M.北京:北京大学医学出版社,2010:219-235.6 国家食品药品监督管理总局.药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则 S.北京:国家食品药品监督管理总局,2014.7 KUMAH D B,LARTEY S Y,YEMANYI F,et al.Prevalence of allergic conjunctivitis among basic school children in the Kumasi Metropolis(Ghana):a community-based cross-sectional studyJ.BMC Ophthalmol,2015,15(1):1-5.8 LEONARDI A,CASTEGNAROA,VALERIO A L,et al.Epidemiology of allergic conjunctivitis:clinical 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