学术讨论—第三章-血液分析仪检查.ppt

第三章第三章 血液血液(xuy)分析仪检查分析仪检查第一页，共一百零四页。目的目的(md)要求要求 l1、掌握：血液分析仪各项参数的缩写、参考值、直、掌握：血液分析仪各项参数的缩写、参考值、直方图概念。方图概念。l2、熟悉：血液分析仪电临床应用、检测参数、方、熟悉：血液分析仪电临床应用、检测参数、方法学平价、血细胞直方图正常形态法学平价、血细胞直方图正常形态(xngti)特点及常特点及常见异常形态见异常形态(xngti)、临床应用。、临床应用。l3、了解：血液分析仪的进展。、了解：血液分析仪的进展。第二页，共一百零四页。l重点重点:1、血液分析仪测定的原理、血液分析仪测定的原理(yunl)、方法方法 2、血液分析仪各参数临床意义、血液分析仪各参数临床意义l难点难点:血液分析仪检验的质控血液分析仪检验的质控第三页，共一百零四页。1 1 血液血液(xuy)(xuy)分析仪的发展史分析仪的发展史第四页，共一百零四页。自动血液分析仪（自动血液分析仪（automated hematology analyzer,AHA)，早年称血细胞计数仪（，早年称血细胞计数仪（blood cell counter)，是目前国内外临床检验，是目前国内外临床检验(jinyn)最常最常用的筛检仪器之一。用的筛检仪器之一。1、传统采用手工方法、传统采用手工方法 2、20世纪世纪50年代年代，美国的美国的Coulter设计了第一台设计了第一台电子血细胞计数仪电子血细胞计数仪。还产生了血红蛋白仪。还产生了血红蛋白仪。第五页，共一百零四页。3、20世纪世纪70年代年代 检测血小板检测血小板的仪器的仪器Baker-8104、20世纪世纪80年代，可打印年代，可打印WBC、RBC、PLT体积分布体积分布(fnb)直方图直方图。5、20世纪世纪90年代，白细胞分类的开发（二分类、年代，白细胞分类的开发（二分类、三分类）；将网织红细胞检测技术用于血细三分类）；将网织红细胞检测技术用于血细胞分析仪；生产了血液学全自动系统。胞分析仪；生产了血液学全自动系统。6、现在，白细胞五分类，仪器组合化、现在，白细胞五分类，仪器组合化第六页，共一百零四页。血细胞分析仪近年来的发展血细胞分析仪近年来的发展(fzhn)变变化化1.血常规检验多参数化血常规检验多参数化2.多功能合成扩展多功能合成扩展3.检测速度的提高检测速度的提高4.方法的改进方法的改进(gijn)和进展和进展5.应用的方便性应用的方便性第七页，共一百零四页。血液分析仪功能血液分析仪功能(gngnng)：全血细胞全血细胞计数功能。计数功能。白细胞分类功能。白细胞分类功能。扩展功能。扩展功能。血液分析仪优势血液分析仪优势(yush)检测项目多检测项目多速度快速度快精度高精度高易操作易操作第八页，共一百零四页。2 2 检测检测(jin c)(jin c)原理原理 第九页，共一百零四页。检检测测(jin c)原原理理电学电学光学光学(gungxu)电阻电阻(dinz)抗抗法法 射频电导法射频电导法激光散射法激光散射法分光光度法分光光度法第十页，共一百零四页。一、电阻一、电阻(dinz)抗法抗法 血血细细胞胞计计数数原原理理即即库库尔尔特特原原理理（Coulter principle):根根据据血血细细胞胞非非传传导导的的性性质质，以以电电解解质质溶溶液液中中悬悬浮浮(xunf)的的血血细细胞胞在在通通过过计计数数小小孔孔时时引引起起的的电电阻阻变变化化进进行行检检测测为为基基础础，进进 行行 血血 细细 胞胞 计计 数数 和和 体体 积积 测测 定定。第十一页，共一百零四页。第十二页，共一百零四页。第十三页，共一百零四页。l小孔管小孔管是电阻抗法细胞计数的一个重要组是电阻抗法细胞计数的一个重要组成部分。检测期间，当电流接通成部分。检测期间，当电流接通(ji tn)后，后，位于小孔两侧的电极产生稳定的电流。如位于小孔两侧的电极产生稳定的电流。如果供给的阻抗也是稳定的，则小孔的电压果供给的阻抗也是稳定的，则小孔的电压是不变的。是不变的。第十四页，共一百零四页。l当有一个细胞通过小孔时，由于电阻增当有一个细胞通过小孔时，由于电阻增加，于瞬间引起电压变化加，于瞬间引起电压变化通过脉冲。通过脉冲。l细胞体积越大，脉冲振幅细胞体积越大，脉冲振幅(zhnf)越高；细胞越高；细胞数量越多，脉冲数量也越多。数量越多，脉冲数量也越多。第十五页，共一百零四页。l脉冲信号经过下列步骤，得出细胞计数脉冲信号经过下列步骤，得出细胞计数结果：结果：1.放大放大 由于由于(yuy)血细胞通过微孔时产生的血细胞通过微孔时产生的脉冲信号微弱，必须通过放大器将讯号脉冲信号微弱，必须通过放大器将讯号放大。放大。2.阈值调节阈值调节 在一定范围内调节参考电平的在一定范围内调节参考电平的大小，使计数结果尽可能符合实际。大小，使计数结果尽可能符合实际。第十六页，共一百零四页。3.甄别甄别 利用甄别器根据阈值调节器提供的利用甄别器根据阈值调节器提供的参考电平，将低于参考电平的假讯号（细参考电平，将低于参考电平的假讯号（细胞碎片，杂质胞碎片，杂质(zzh)微粒）去掉。微粒）去掉。4.整形整形 通过整形器作用，将脉冲讯号波形通过整形器作用，将脉冲讯号波形修整成一致标准的平顶波，才能触发电路修整成一致标准的平顶波，才能触发电路第十七页，共一百零四页。5 计数计数(j sh)血细胞的脉冲信号，经过放大、血细胞的脉冲信号，经过放大、甄别、整形后，送入计数系统，得出计数甄别、整形后，送入计数系统，得出计数结果。结果。电阻抗法可准确测量出细胞（或类似颗粒）电阻抗法可准确测量出细胞（或类似颗粒）的大小，是三分群血液分析仪的主要应用的大小，是三分群血液分析仪的主要应用原理，并与光学检测原理组合应用于五分原理，并与光学检测原理组合应用于五分类血液分析仪中。类血液分析仪中。第十八页，共一百零四页。三分群血液分析仪基本三分群血液分析仪基本(jbn)组成组成 信号发生器信号发生器 各种微粒通过检测各种微粒通过检测(jin c)(jin c)小孔产小孔产生电阻抗脉冲信号的检测生电阻抗脉冲信号的检测(jin c)(jin c)源。源。放大器放大器 将血细胞微弱脉冲信号放大以触发将血细胞微弱脉冲信号放大以触发电路系统。电路系统。阈值调节器阈值调节器 调节能区分不同群细胞合适的调节能区分不同群细胞合适的信号电平。信号电平。第十九页，共一百零四页。甄别器甄别器 去除非参考电平的各种假信号以去除非参考电平的各种假信号以提高计数的准确性。提高计数的准确性。整形器整形器 将不一致的脉冲波形信号将不一致的脉冲波形信号(xnho)(xnho)调调整为标准的波形后触发计数电路系统。整为标准的波形后触发计数电路系统。计数系统计数系统 将整形后的血细胞脉冲信号显将整形后的血细胞脉冲信号显示为不同类群的细胞数。示为不同类群的细胞数。第二十页，共一百零四页。二、激光二、激光(jgung)散射法散射法 激光散射法应用了流式细胞术激光散射法应用了流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测原理。检测原理。流式细胞术检测原理：流式细胞术检测原理：细胞通过激光束被照射细胞通过激光束被照射时，产生与细胞特征相应的各种角度的散射时，产生与细胞特征相应的各种角度的散射光。对经信号检测器接收的散射光信息进行光。对经信号检测器接收的散射光信息进行综合分析综合分析(fnx)，即可准确区分正常类型的细，即可准确区分正常类型的细胞。胞。第二十一页，共一百零四页。第二十二页，共一百零四页。半导体激光半导体激光(jgung)的流式细胞的流式细胞术术 侧向荧光侧向荧光(ynggung)（RNA/DNA含量）含量）激光激光(jgung)（波长（波长633nm）侧向散射侧向散射（细胞内部结构，如核的（细胞内部结构，如核的大小）大小）前向散射光前向散射光（细胞大小）（细胞大小）第二十三页，共一百零四页。低角度散射光低角度散射光（前向散射光）：反映细胞的（前向散射光）：反映细胞的数量和表面体积大小。数量和表面体积大小。高角度散射光高角度散射光（侧向散射光）：反映细胞的（侧向散射光）：反映细胞的内部内部(nib)颗粒、细胞核等复杂性。颗粒、细胞核等复杂性。第二十四页，共一百零四页。l激光散射法在区别体积相同激光散射法在区别体积相同(xin tn)而类型而类型不同的细胞特征时，比电阻抗法分群更不同的细胞特征时，比电阻抗法分群更加准确。故激光散射法已成为现代五分加准确。故激光散射法已成为现代五分类血液分析仪的主要检测原理之一。类血液分析仪的主要检测原理之一。第二十五页，共一百零四页。流式细胞仪的技术流式细胞仪的技术(jsh)特点特点 流式细胞仪在设计上采用了许多独特的技术，流式细胞仪在设计上采用了许多独特的技术，比如液流系统、光路系统、信号测量和细胞比如液流系统、光路系统、信号测量和细胞分选方面都有自己的技术特点分选方面都有自己的技术特点(tdin)。着重讲。着重讲述液流系统述液流系统鞘流原理。鞘流原理。第二十六页，共一百零四页。第二十七页，共一百零四页。雷诺系数雷诺系数 ReRed/d:管子的直径管子的直径(zhjng)：液体的密度液体的密度：液体的流速液体的流速：液体的粘滞系数液体的粘滞系数Re2300，液流液流处处于湍流状于湍流状态态第二十八页，共一百零四页。通常把标本流的流速控制在通常把标本流的流速控制在10m/s以内以内(y ni)，就能保持标本流处于稳流状态。，就能保持标本流处于稳流状态。外面包被有高速流动的鞘液，实现标本与外面包被有高速流动的鞘液，实现标本与鞘液稳定的同轴流动状态。鞘液稳定的同轴流动状态。同时利用液流聚焦原理，使标本流直径变同时利用液流聚焦原理，使标本流直径变小，通常只有小，通常只有1020m，避免细胞多个，避免细胞多个重叠进入检测区。重叠进入检测区。第二十九页，共一百零四页。激光散射法系统激光散射法系统(xtng)基本组成基本组成1、光源光源气体（氦氖）激光或固体（半导气体（氦氖）激光或固体（半导体）激光（单色光）；钨光源（多色光）。体）激光（单色光）；钨光源（多色光）。2 2、鞘流、鞘流维持颗粒于液流中央，顺序维持颗粒于液流中央，顺序(shnx)(shnx)、单个、恒速向前流动，即流体动力学聚焦。单个、恒速向前流动，即流体动力学聚焦。第三十页，共一百零四页。3 3、细胞悬液、细胞悬液被检测细胞（颗粒）的悬被检测细胞（颗粒）的悬液，由气压导入流动池。液，由气压导入流动池。4 4、光检测器、光检测器接受接受(jishu)(jishu)来自各种角度的来自各种角度的散射光或吸收光信号，并转换成相应特散射光或吸收光信号，并转换成相应特征的电信号征的电信号第三十一页，共一百零四页。三、射频三、射频(sh pn)电导法电导法l 射频（射频（radio frequency,RF)指射频电流，指射频电流，是每秒变化大于是每秒变化大于10 000次的高频次的高频(o pn)交流电磁交流电磁波。高频波。高频(o pn)电流能通过细胞壁。电流能通过细胞壁。l 用高频电磁探针渗入细胞膜脂质可测定细胞用高频电磁探针渗入细胞膜脂质可测定细胞的导电性，提供细胞内部化学成分、细胞核的导电性，提供细胞内部化学成分、细胞核和细胞质、颗粒成分等特征信息。和细胞质、颗粒成分等特征信息。第三十二页，共一百零四页。第三十三页，共一百零四页。四、分光四、分光(fn un)光度法光度法Lambert-Beer定律：定律：A=lg(I0/I)A:吸光度，或称光密度；吸光度，或称光密度；I0：单色入射光强度；单色入射光强度；I：透过光强度：透过光强度分光光度法仪器分光光度法仪器(yq)的组成的组成：单色光源、检测池：单色光源、检测池和比色容器、光检测器。和比色容器、光检测器。第三十四页，共一百零四页。l分光光度法是所有类型的血细胞分析仪检测分光光度法是所有类型的血细胞分析仪检测Hb 的原的原理：被稀释的血液加入溶血剂后，理：被稀释的血液加入溶血剂后，红细胞溶红细胞溶解解(rngji)，释放血红蛋白，后者与溶，释放血红蛋白，后者与溶血剂结合形成血剂结合形成Hb衍生物，在特定波长（衍生物，在特定波长（530550nm）下比色，吸光度的变化与液体中）下比色，吸光度的变化与液体中Hb含量成比例。含量成比例。第三十五页，共一百零四页。第三十六页，共一百零四页。血红蛋白血红蛋白(xuhng dnbi)血红蛋白血红蛋白(xuhng dnbi)衍生物衍生物吸光度吸光度(gungd)Hb浓度浓度溶血剂溶血剂540nm第三十七页，共一百零四页。血红蛋白血红蛋白(xuhng dnbi)测定的溶血剂测定的溶血剂溶血溶血(rn xu)剂剂含氰化物的溶血含氰化物的溶血(rn xu)剂剂不含氰化物的溶血剂不含氰化物的溶血剂第三十八页，共一百零四页。3 3 血液血液(xuy)(xuy)分析仪检测参数分析仪检测参数原理原理第三十九页，共一百零四页。不同类型血液分析仪检测参数的原理不同类型血液分析仪检测参数的原理(yunl)不尽相同。高档仪器应用不尽相同。高档仪器应用2种或种或2种以上检种以上检测原理测原理(yunl)，组合电学、光学、细胞化学，组合电学、光学、细胞化学等技术，在独特检测通道测定红细胞、血等技术，在独特检测通道测定红细胞、血小板和白细胞系列的数量、亚类及相关参小板和白细胞系列的数量、亚类及相关参数。数。第四十页，共一百零四页。一、白细胞系列一、白细胞系列(xli)参数检测原理参数检测原理第四十一页，共一百零四页。l仪器将体积仪器将体积(tj)(tj)为为3535450fL450fL的血细胞，分的血细胞，分为为256256个通道（个通道（channelchannel）。每个通道：）。每个通道：1.64fl1.64fl。根据细胞大小，分别置于不同。根据细胞大小，分别置于不同的通道中，显示血细胞体积的通道中，显示血细胞体积(tj)(tj)分布直方分布直方图图(Histogram)(Histogram)。（一）电阻（一）电阻(dinz)抗法抗法第四十二页，共一百零四页。1.分群分群(fn qn)l经溶血素处理脱水后，血细胞体积大小发生了变化！经溶血素处理脱水后，血细胞体积大小发生了变化！l第一第一(dy)(dy)群（群（353590fl90fl）小细胞区：淋巴细胞（体积最小细胞区：淋巴细胞（体积最小）。小）。l第二群（第二群（9090160fl160fl）单个核细胞区，（中间细胞）：单个核细胞区，（中间细胞）：单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、幼稚单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等。细胞、异常细胞等。l第三群（第三群（160fl160fl以上）以上）大细胞区：嗜中性粒细胞（体积最大）大细胞区：嗜中性粒细胞（体积最大）。第四十三页，共一百零四页。第四十四页，共一百零四页。2.白细胞分布白细胞分布(fnb)直方图直方图三分群血液分析仪三分群血液分析仪正常正常(zhngchng)(zhngchng)白细胞分类模式图（直方图）白细胞分类模式图（直方图）35 90 160 300 400 450(fl)%第四十五页，共一百零四页。（二）光散射（二）光散射(snsh)法白细胞分类法白细胞分类1.体积体积(tj)、电导和光散射法（、电导和光散射法（volume,conductivity,light scatter,VCS)V C S电电阻阻抗抗(zkng)技技术术细细胞胞大大小小和和内内部部结结构构细细胞胞内内的的颗颗粒粒性性、核核分分叶叶性性和和细细胞胞表表面面结结构构第四十六页，共一百零四页。体积体积(tj)(tj)电导电导 光散射光散射第四十七页，共一百零四页。2 2、电电阻阻抗抗与与射射频频法法（能能透透入入细细胞胞内内，测测量量(cling)(cling)核的大小及颗粒的多少）。核的大小及颗粒的多少）。RF:RF:射频电流射频电流(dinli)(dinli)细胞内部结构信息细胞内部结构信息DC:DC:直流电直流电 细胞细胞(xbo)(xbo)大小的信大小的信息息 第四十八页，共一百零四页。（1）嗜酸性粒细胞检测系统）嗜酸性粒细胞检测系统 专用的专用的E溶血溶血(rn xu)剂，电阻抗法剂，电阻抗法（2）嗜碱性粒细胞检测系统）嗜碱性粒细胞检测系统 专用的专用的B溶血剂，溶血剂，电阻抗法电阻抗法（3）淋巴、单核和粒细胞检测系统）淋巴、单核和粒细胞检测系统 电阻抗和电阻抗和射频联合检测射频联合检测第四十九页，共一百零四页。（4）幼稚细胞）幼稚细胞(xbo)检测系统检测系统 电阻抗法电阻抗法成熟成熟幼稚幼稚成熟成熟幼稚幼稚膜上脂质少膜上脂质少膜上脂质多膜上脂质多加入加入(jir)溶血剂溶血剂结合结合(jih)AA多多结合结合AA少少加入硫化加入硫化AA幼稚幼稚保持完整保持完整细胞破坏细胞破坏第五十页，共一百零四页。3、多角度偏振光散射、多角度偏振光散射(snsh)法（法（MAPSS)（1）白细胞计数）白细胞计数 用含用含DNA染料碘化丙啶试剂染料碘化丙啶试剂可破坏有核红细胞膜和细胞质，只留下细胞核，可破坏有核红细胞膜和细胞质，只留下细胞核，裸核易于染色。染料对有活性的白细胞只有极裸核易于染色。染料对有活性的白细胞只有极小渗透性或无渗透性，故不出现小渗透性或无渗透性，故不出现(chxin)细胞核染细胞核染色。从而鉴别有核红细胞和活性白细胞，计算色。从而鉴别有核红细胞和活性白细胞，计算活性白细胞比率。活性白细胞比率。第五十一页，共一百零四页。（2）白细胞分群）白细胞分群 MAPSS0,前向散射光：细胞前向散射光：细胞(xbo)大小、数量大小、数量7，侧向，侧向(c xin)散射光：细胞内部结散射光：细胞内部结构及核染色质的复杂性构及核染色质的复杂性90，垂直角度，垂直角度(jiod)散射光：细胞散射光：细胞内部颗粒及分叶状况内部颗粒及分叶状况90D，垂直角度去偏振散射，垂直角度去偏振散射 光，光，鉴别鉴别E与与N第五十二页，共一百零四页。第五十三页，共一百零四页。MAPSS法可鉴别白细胞亚群、异常细胞类法可鉴别白细胞亚群、异常细胞类型，白细胞分类不受有核红细胞、血小板型，白细胞分类不受有核红细胞、血小板凝聚、未溶解红细胞和细胞碎片等干扰物凝聚、未溶解红细胞和细胞碎片等干扰物质影响质影响(yngxing)。运用这类原理的血细胞分析仪：运用这类原理的血细胞分析仪：SF-3000、CD-3500、MEK-8118K、Diana-5和和EXCELLTM-22等。等。第五十四页，共一百零四页。4、激光与细胞、激光与细胞(xbo)化学技术联合应用化学技术联合应用（1）过氧化物酶（）过氧化物酶（Peroxidase,Perox)染色通道染色通道 过氧化物酶过氧化物酶活性强度：活性强度：ENM,L和和B则无。则无。（2）嗜碱性粒细胞）嗜碱性粒细胞/核分叶性（核分叶性（baso/lobul-arity)通道通道:除除B外其他细胞仅剩裸核，不同外其他细胞仅剩裸核，不同(b tn)细胞的裸核结构不同细胞的裸核结构不同(b tn)，分叶越多散点越靠近横轴右侧，根据多分叶核和单，分叶越多散点越靠近横轴右侧，根据多分叶核和单个核的比例，可计算出左移指数。个核的比例，可计算出左移指数。（3）未染色大细胞计数检测）未染色大细胞计数检测第五十五页，共一百零四页。5.双鞘流动力双鞘流动力(dngl)连续系统连续系统(DHSS)用钨光源流式细胞光吸收、化学染色和电阻抗法用钨光源流式细胞光吸收、化学染色和电阻抗法 WBC计数通道计数通道：电阻抗法：电阻抗法 嗜碱性粒细胞通道嗜碱性粒细胞通道：专用染液：专用染液 WBC分类通道分类通道：双鞘流系统：双鞘流系统(xtng)中，用流式细胞中，用流式细胞光吸收、电阻抗和细胞化学染色液联合检测除光吸收、电阻抗和细胞化学染色液联合检测除B以以外的外的WBC。第五十六页，共一百零四页。DHSS技术技术：在流式通道中有：在流式通道中有2个鞘流装置，个鞘流装置，细胞经第细胞经第1束鞘流后通过阻抗微孔测定束鞘流后通过阻抗微孔测定(cdng)细胞的真实体积，然后经第细胞的真实体积，然后经第2束鞘流后到达束鞘流后到达光窗，测定光窗，测定(cdng)细胞的光吸收，分析细胞细胞的光吸收，分析细胞内部结构。内部结构。第五十七页，共一百零四页。第五十八页，共一百零四页。二、成熟红细胞系列参数检二、成熟红细胞系列参数检测测(jin c)原理原理第五十九页，共一百零四页。1、红细胞数和红细胞比积：、红细胞数和红细胞比积：原理通原理通WBC计数计数红细胞体积红细胞体积(tj)分布直方图分布直方图（一）（一）电阻电阻(dinz)抗法抗法第六十页，共一百零四页。2、血红蛋白、血红蛋白(xuhng dnbi)含量测定含量测定 分光光度分光光度法法3、各项红细胞平均指数检测各项红细胞平均指数检测 根据根据RBC、HCT 和和HGB换算出来。换算出来。第六十一页，共一百零四页。4、红细胞体积分布宽度（、红细胞体积分布宽度（RDW）不同不同大小的脉冲信号分别贮存在仪器内装计大小的脉冲信号分别贮存在仪器内装计算机的不同通道算机的不同通道(tngdo)，计算出相应的体，计算出相应的体积及细胞数，经统计处理得到积及细胞数，经统计处理得到RDW。第六十二页，共一百零四页。（二）流式细胞术光散射（二）流式细胞术光散射(snsh)法法1 1、光散射法红细胞、血红蛋白检测原理、光散射法红细胞、血红蛋白检测原理 低角度低角度(jiod)(jiod)(2(23)3)：测量红细胞体积。：测量红细胞体积。高高角角度度(5(515)15)：测测定定红红细细胞胞血血红红蛋蛋白白浓浓度。度。第六十三页，共一百零四页。2、红细胞散点图、红细胞散点图 是红细胞是红细胞(xbo)体积与血体积与血红蛋白浓度二维散点图，反映光散射与红蛋白浓度二维散点图，反映光散射与细胞细胞(xbo)体积和血红蛋白浓度之间的相互体积和血红蛋白浓度之间的相互关系，能准确区分小红细胞关系，能准确区分小红细胞(xbo)等异常。等异常。线性体积线性体积/血红蛋白浓度（血红蛋白浓度（V/HC)散点图散点图分为分为9个区。个区。第六十四页，共一百零四页。第六十五页，共一百零四页。三、血小板系列参数三、血小板系列参数(cnsh)检测原理检测原理第六十六页，共一百零四页。（一）电阻（一）电阻(dinz)抗法抗法血小板计数（血小板计数（platelet,PLTplatelet,PLT）：）：随红细胞在一个系统随红细胞在一个系统(xtng)(xtng)中进行检测中进行检测。直方图在228fl（不同仪器不一）。%10 20 30(fl)10 20 30(fl)第六十七页，共一百零四页。（二）激光（二）激光(jgung)散射法散射法l根据根据Mie同质性球体光散射理论，球形化同质性球体光散射理论，球形化PLT通过激通过激光光(jgung)照射区时，在高角度得到照射区时，在高角度得到PLT折射指数折射指数（refactive index,RI)，与，与PLT密度有关密度有关（PLT:1.351.40,RBC:含有高浓度含有高浓度Hb，RI为为1.351.44）；低角度得到血小板大小。此法可区分）；低角度得到血小板大小。此法可区分PLT和红细胞。和红细胞。第六十八页，共一百零四页。（三）流式细胞激光核酸荧光染色和电阻抗法（三）流式细胞激光核酸荧光染色和电阻抗法 红细胞红细胞/血小板计数通道电阻抗法结果异常时，血小板计数通道电阻抗法结果异常时，转换至光学转换至光学(gungxu)法核酸荧光染色网织红细胞法核酸荧光染色网织红细胞/血小板检测通道。通过核酸荧光染色鉴别网血小板检测通道。通过核酸荧光染色鉴别网织织Plt、成熟、成熟Plt和成熟和成熟RBC.（四）固体激光散射法、电阻抗法和单克隆抗（四）固体激光散射法、电阻抗法和单克隆抗体荧光染色散射法体荧光染色散射法第六十九页，共一百零四页。四、网织红细胞系列参数四、网织红细胞系列参数(cnsh)检测原理检测原理第七十页，共一百零四页。（一）（一）非荧光染料染色法非荧光染料染色法 用新亚甲蓝对网织红细胞用新亚甲蓝对网织红细胞RNA染色，采用染色，采用(ciyng)VCS技术测定技术测定Ret。此外，应用柔变轮。此外，应用柔变轮廓分析技术，以非线性方式区分红细胞群和成熟红细胞廓分析技术，以非线性方式区分红细胞群和成熟红细胞群。群。（二）（二）荧光染料染色法荧光染料染色法（1）用聚次甲基染）用聚次甲基染RNA和和恶嗪染恶嗪染DNA法（法（2）用氧氮杂芑）用氧氮杂芑750染染RNA法（法（3）用非对称菁荧光染料染用非对称菁荧光染料染RNA法。（法。（4）用噻唑橙染）用噻唑橙染网织红细胞网织红细胞RNA法。法。第七十一页，共一百零四页。五、有核红细胞系列五、有核红细胞系列(xli)参数检参数检测原理测原理第七十二页，共一百零四页。1.VCS法法2.流式激光流式激光(jgung)/荧光染色法荧光染色法 （1）聚次甲）聚次甲基荧光染色法基荧光染色法（2）碘化丙啶染色法）碘化丙啶染色法 3.白细胞计数和分类通道衍生法白细胞计数和分类通道衍生法4.阻抗法和噻唑橙荧光染色流式细胞术阻抗法和噻唑橙荧光染色流式细胞术第七十三页，共一百零四页。六、血细胞分析仪工作六、血细胞分析仪工作(gngzu)流程流程（电阻抗法）（电阻抗法）第七十四页，共一百零四页。第七十五页，共一百零四页。4 4 血细胞分析仪的类型血细胞分析仪的类型(lixng)(lixng)第七十六页，共一百零四页。根据对白细胞分析程度分为二分根据对白细胞分析程度分为二分(r fn)群、三群、三分群、五分类。分群、五分类。根据自动化程度又分为二大类：半自动仪根据自动化程度又分为二大类：半自动仪器须手工稀释标本；全自动仪器可直接用器须手工稀释标本；全自动仪器可直接用抗凝血进样。抗凝血进样。第七十七页，共一百零四页。一、半自动二分一、半自动二分(r fn)群血细群血细胞分析仪胞分析仪第七十八页，共一百零四页。检测速度为检测速度为60个个/h,仪器为双通道，容易操仪器为双通道，容易操作。作。用血量少，准确性、重复性好。用血量少，准确性、重复性好。测量结果超过正常界限和直方图不正常，测量结果超过正常界限和直方图不正常，可出现可出现(chxin)警示符号提示。警示符号提示。1.仪器仪器(yq)性能性能第七十九页，共一百零四页。有质控资料及标本检测资料贮存、手工有质控资料及标本检测资料贮存、手工(shugng)鉴别、设备警告等软件程序。鉴别、设备警告等软件程序。对仪器状况可自动监测。对仪器状况可自动监测。第八十页，共一百零四页。2.检测检测(jin c)项目项目 可检测可检测(jin c)815项参数及项参数及3个直方图，主个直方图，主要有要有WBC,RBC,Hb，PLT,MCV,MCH,MCHC等，并打印出白细胞、红细胞及等，并打印出白细胞、红细胞及血小板直方图。血小板直方图。第八十一页，共一百零四页。图图1半自动分析仪半自动分析仪 这是一个容易操作的系统。接通电源后，仪器处于正常的操作待机状态时，只要把20l 血液样品在机外稀释，混匀后放在样品架上，按下计数键它就可以对15种血液指标和3个细胞直方图进行一次分析。测定完成后结果(ji gu)会立即在LCD上显示并将结果(ji gu)打印出来。第八十二页，共一百零四页。3.半自动血细胞分析仪的测试程序半自动血细胞分析仪的测试程序1）机外手工加溶血剂方式）机外手工加溶血剂方式 先将标本（末梢血或抗凝经先将标本（末梢血或抗凝经脉血）用稀释液进行预稀释（稀释倍数因仪器脉血）用稀释液进行预稀释（稀释倍数因仪器(yq)型型号而异号而异),然后按仪器然后按仪器(yq)说明书要求将适量的溶血剂说明书要求将适量的溶血剂加入已稀释的标本中混匀后上机进行检测，打印或加入已稀释的标本中混匀后上机进行检测，打印或记录测试结果。这类仪器记录测试结果。这类仪器(yq)如如F-820、MEK-5108K。第八十三页，共一百零四页。2）机内自动加溶血剂方式机内自动加溶血剂方式 先将标本（末先将标本（末梢血或抗凝经脉梢血或抗凝经脉(jngmi)血）用稀释液进行预血）用稀释液进行预稀释（稀释倍数因仪器型号而异稀释（稀释倍数因仪器型号而异),然后将然后将已稀释的标本混匀后（溶血剂由仪器自动已稀释的标本混匀后（溶血剂由仪器自动定量注入）定量注入）上机进行检测，打印或记录上机进行检测，打印或记录测试结果。这类仪器如测试结果。这类仪器如 AC-920(预稀释通预稀释通道）、道）、BC-2000。第八十四页，共一百零四页。二、全自动三分二、全自动三分(sn fn)群血细胞分析群血细胞分析仪仪第八十五页，共一百零四页。检测速度为检测速度为6080个个/h,配上自动装置可连配上自动装置可连续续(linx)吸取样本，避免实验室内感染。吸取样本，避免实验室内感染。两种溶血素，即白细胞溶血素和红细胞溶两种溶血素，即白细胞溶血素和红细胞溶血素血素SLS-Hb法（无毒）法（无毒）仪器线性范围宽、重复性好、准确性高、仪器线性范围宽、重复性好、准确性高、变异范围小。变异范围小。1.仪器仪器(yq)性能性能第八十六页，共一百零四页。有的设有浮球式绝对定量装置，携带污染率有的设有浮球式绝对定量装置，携带污染率几乎为零。几乎为零。自动化程度高，对试剂自动化程度高，对试剂(shj)污染、气泡干扰、污染、气泡干扰、异物阻塞有监控系统。有自动报警系统。异物阻塞有监控系统。有自动报警系统。有质控资料及标本检测资料贮存等软件程序。有质控资料及标本检测资料贮存等软件程序。第八十七页，共一百零四页。2.检测项目检测项目 除二分群的除二分群的15项参数外，还增加了项参数外，还增加了中等大小中等大小(dxio)白细胞比率（白细胞比率（W-MCR)、中等、中等大小大小(dxio)白细胞计数（白细胞计数（W-MCC)及大血小板及大血小板比率（比率（P-LCR)，达，达18项参数。项参数。3.代表仪器代表仪器：CD-1700、Coulter ONYX血细血细胞分析仪等。胞分析仪等。第八十八页，共一百零四页。三、全自动五分类三、全自动五分类(fn li)血细胞分析仪血细胞分析仪第八十九页，共一百零四页。速度快，每小时速度快，每小时(xiosh)110150个标本。个标本。具有检测有核红细胞的功能。具有检测有核红细胞的功能。专用幼稚细胞检测通道和试剂。专用幼稚细胞检测通道和试剂。多种分类技术的使用使白细胞分类更加精多种分类技术的使用使白细胞分类更加精确，达到最低分类镜检率。确，达到最低分类镜检率。1.仪器仪器(yq)性能性能第九十页，共一百零四页。强大的网络功能及完善的数据管理系统，强大的网络功能及完善的数据管理系统，可开展远程诊断，远程维护和质控提供可开展远程诊断，远程维护和质控提供软件支持。软件支持。高效、自动的标本资料管理高效、自动的标本资料管理(gunl)及强大及强大的工作平台。的工作平台。无错进样管理，包括穿刺进样，条码识无错进样管理，包括穿刺进样，条码识别和双重样本完整性探测器。别和双重样本完整性探测器。第九十一页，共一百零四页。仪器仪器(yq)可与网织红检测仪、自动进样仪、可与网织红检测仪、自动进样仪、自动涂片机相联，形成自动化模块。自动涂片机相联，形成自动化模块。2.检测项目检测项目 可检测可检测25项参数或更多。有些仪项参数或更多。有些仪器可根据需要选择不同检测模式。器可根据需要选择不同检测模式。3.代表仪器代表仪器 SF-3000血细胞分析仪、血细胞分析仪、MEK-811K+QA-810VK、EXCELTM22血细胞分血细胞分析仪等。析仪等。第九十二页，共一百零四页。四、全自动五分类四、全自动五分类(fn li)连接网织红连接网织红细胞分析仪细胞分析仪第九十三页，共一百零四页。准确性高，通过对细胞准确性高，通过对细胞RNA检测比目测检测比目测法更准确、敏感。法更准确、敏感。精确度达精确度达97以上。并可将网织红细胞以上。并可将网织红细胞分类为分类为LFR、MFR及及 HFR，对贫血，对贫血(pnxu)、骨髓移植、白血病、放化疗有重要意义。骨髓移植、白血病、放化疗有重要意义。1.仪器仪器(yq)性能性能第九十四页，共一百零四页。自动化程度高，连续测定每小时可达自动化程度高，连续测定每小时可达60份标本份标本(biobn)。可与五分类联接形成自动化模块。可与五分类联接形成自动化模块。2.检测项目检测项目 检测网织红细胞的有关项目。检测网织红细胞的有关项目。第九十五页，共一百零四页。图图3CD-3500 血球血球(xuqi)计数分析仪计数分析仪30个参数，10项白细胞分类，7个分布图，7个散射表示图可以做网织红细胞分析，以及动物血液测试高达60个品种采用最先进的激光技术和电阻(dinz)法技术20个质控程序，120个带25个参数的质控样品的SD.CV均值第九十六页，共一百零四页。3.全自动血细胞分析仪测试程序全自动血细胞分析仪测试程序1）准全自动分析方式）准全自动分析方式 检查抗凝静脉血标本检查抗凝静脉血标本是否够量、有无凝集等情况，然后将合格是否够量、有无凝集等情况，然后将合格的标本放在混匀器上彻底混匀。的标本放在混匀器上彻底混匀。手工打开瓶盖后上机检测手工打开瓶盖后上机检测(jin c)，打印检测，打印检测(jin c)结果。这类仪器如结果。这类仪器如SDVIA 120（手动开盖（手动开盖方式方式）、Coulter JT-IR等。等。第九十七页，共一百零四页。不用开盖，直接将抗凝管盖盖的一端垂不用开盖，直接将抗凝管盖盖的一端垂直直(chuzh)向下放入进样管并用力下压，进向下放入进样管并用力下压，进样管中的吸样针自动穿破瓶盖西洋检测。样管中的吸样针自动穿破瓶盖西洋检测。这类仪器如这类仪器如 ADVIA 120(手动闭盖方式）。手动闭盖方式）。第九十八页，共一百零四页。2）全自动分析方式全自动分析方式 检查抗凝静脉血标本检查抗凝静脉血标本是否够量、有无凝集等情况，然后将合格是否够量、有无凝集等情况，然后将合格的标本放入自动进样架，依据标本的多少的标本放入自动进样架，依据标本的多少设置待测数量设置待测数量(shling)，将自动进样架放入，将自动进样架放入标本架舱，最后按测试键上机检测，打印标本架舱，最后按测试键上机检测，打印检测结果。这类仪器如检测结果。这类仪器如 ADVIA 120(自动自动方式）、方式）、SF-3000(自动方式）等。自动方式）等。第九十九页，共一百零四页。5 5 血细胞分析仪的常规血细胞分析仪的常规(chnggu)(chnggu)操作操作第一百页，共一百零四页。1.标本采集和准备标本采集和准备(zhnbi)：采抗凝血：采抗凝血 加稀加稀释液释液 加溶血剂加溶血剂 混匀混匀 待上机测待上机测定，同时制备血涂片一块。定，同时制备血涂片一块。2.仪器准备仪器准备（1）启动电源开关）启动电源开关（2）启动血液分析仪开关，仪器自检）启动血液分析仪开关，仪器自检/清洗清洗第一百零一页，共一百零四页。3.质控标本检测质控标本检测：通常在检测受检者血标：通常在检测受检者血标本前检测。本前检测。4.血标本测定血标本测定(cdng)：按仪器操作说明进行。：按仪器操作说明进行。5.结果分析与判断结果分析与判断第一百零二页，共一百零四页。谢谢 谢谢第一百零三页，共一百零四页。内容(nirng)总结第三章 血液分析仪检查。高角度散射光（侧向(c xin)散射光）：反映细胞的内部颗粒、细胞核等复杂性。WBC分类通道：双鞘流系统中，用流式细胞光吸收、电阻抗和细胞化学染色液联合检测除B以外的WBC。低角度(23)：测量红细胞体积。高角度(515)：测定红细胞血红蛋白浓度。检测速度为60个/h,仪器为双通道，容易操作。测量结果超过正常界限和直方图不正常，可出现警示符号提示。5.结果分析与判断第一百零四页，共一百零四页。