学术讨论—交叉配血-酶法和聚凝胺法.ppt

交叉交叉(jioch)(jioch)配血配血酶法与聚凝胺酶法与聚凝胺法法 by by Cherish KimCherish Kim第一页，共十八页。酶介质酶介质(jizh)交叉配血法交叉配血法原理RBC表面具丰富表面具丰富唾液酸唾液酸，造成红细胞表面带有大量，造成红细胞表面带有大量负电荷负电荷，在电场力的，在电场力的作用下，红细胞在液体中相互作用下，红细胞在液体中相互排斥排斥，导致红细胞，导致红细胞不能凝集不能凝集。蛋白水解酶蛋白水解酶能能消化和破坏消化和破坏这种唾液酸减少红细胞表面的负电荷，导致红细胞这种唾液酸减少红细胞表面的负电荷，导致红细胞表面的表面的Zeta电势减小电势减小，红细胞间的，红细胞间的排斥力减弱排斥力减弱，细胞间的，细胞间的距离缩短距离缩短，IgG类类红细胞血型红细胞血型(xuxng)抗体分子的两个抗原结合位点可以分别结合具有相应抗抗体分子的两个抗原结合位点可以分别结合具有相应抗原的红细胞，导致红细胞发生凝集反应。原的红细胞，导致红细胞发生凝集反应。酶介质交叉配血试验可以检测出献血者或受血者血清中酶介质交叉配血试验可以检测出献血者或受血者血清中是否存在是否存在IgG类类红细胞血型抗体红细胞血型抗体，确保受血者和献血者血液相容，防止发生溶血性输血，确保受血者和献血者血液相容，防止发生溶血性输血不良反应。不良反应。第二页，共十八页。实验(shyn)仪器与试剂仪器：台式离心机仪器：台式离心机 37恒温水浴箱恒温水浴箱 显微镜显微镜试剂试剂：1%菠萝酶溶液菠萝酶溶液(rngy)、生理盐水、生理盐水标本标本：3mlABO同型全血标本同型全血标本2人份人份木瓜木瓜(m u)蛋白酶蛋白酶菠萝蛋白酶菠萝蛋白酶第三页，共十八页。实验(shyn)步骤1.抽取受血者静脉血抽取受血者静脉血34ml，待凝固后分离血清；以，待凝固后分离血清；以生生理盐水洗涤理盐水洗涤受血者红细胞受血者红细胞3次次配成配成3%红细胞悬液红细胞悬液2.将献血者血标本以同样方法分离血清；生理盐水洗涤将献血者血标本以同样方法分离血清；生理盐水洗涤献血者红细胞献血者红细胞3次，配成次，配成3%红细胞悬液红细胞悬液3.取洁净试管取洁净试管2支，分别支，分别(fnbi)标记主侧管和次侧管。标记主侧管和次侧管。主侧管主侧管：受血者受血者血清血清2滴滴和献血者和献血者红细胞悬液红细胞悬液1滴滴次侧管次侧管：献血者献血者血清血清2滴滴和受血者和受血者红细胞红细胞1滴滴两管分别加入两管分别加入1%菠萝酶溶液菠萝酶溶液各各1滴滴第四页，共十八页。实验(shyn)步骤 4.阳性对照管阳性对照管：3%RhD阳性阳性O型红细胞悬液型红细胞悬液和和人源性人源性IgG类抗类抗D血清血清各各1滴滴，1%菠萝酶溶液菠萝酶溶液1滴滴5.阴性阴性(ynxng)对照对照管管：3%RhD阳性阳性O型红细胞悬液和正常人型红细胞悬液和正常人AB型血清各型血清各1滴滴，1%菠萝酶溶液菠萝酶溶液1滴滴6.自身对照自身对照管管：受血者自身血清和受血者自身血清和3%红细胞悬液各红细胞悬液各1滴滴7.各试管经各试管经轻轻摇动轻轻摇动后，置后，置37水浴水浴30min8.取出试管，取出试管，轻轻摇动轻轻摇动 或经或经120g离心离心1min（或（或1300g离心离心30s），取出试管轻轻，取出试管轻轻摇动摇动9.观察试验结果并记录观察试验结果并记录第五页，共十八页。试验(shyn)结果1.受血者受血者自身对照管自身对照管内红细胞内红细胞不凝集不凝集，阳性阳性对照管红细对照管红细胞胞凝集凝集，阴性阴性对照管红细胞对照管红细胞不凝集不凝集，主、次主、次侧配血管内侧配血管内红细胞均红细胞均不凝集不凝集，表示，表示(biosh)受血者和献血者两血酶介受血者和献血者两血酶介质交叉配血质交叉配血相容相容，献血者血液，献血者血液可输注可输注2.如果受血者如果受血者自身对照管自身对照管内红细胞内红细胞不凝集不凝集，阳性阳性对照管红对照管红细胞细胞凝集凝集，阴性阴性对照管红细胞对照管红细胞不凝集不凝集，主主侧或（和）侧或（和）次次侧侧管内红细胞管内红细胞凝集凝集，则表明两血，则表明两血不相容不相容，献血者血液，献血者血液不可不可输注输注。第六页，共十八页。注意事项注意事项1.酶处理可酶处理可增强增强一些抗原抗体系统的反应一些抗原抗体系统的反应活性活性，例如，例如Rh和和Kidd系统。酶处理后也会系统。酶处理后也会破坏破坏一些一些抗原的结构抗原的结构，例如，例如M、N、Fya、Fyb抗原抗原，导致这些抗原抗体的反应性减弱。，导致这些抗原抗体的反应性减弱。（可用抗球（可用抗球蛋白试验）蛋白试验）2.应应平行进行盐水介质交叉配血试验平行进行盐水介质交叉配血试验3.红细胞经蛋白酶修饰后可以改变红细胞悬液的物理性质，在红细胞经蛋白酶修饰后可以改变红细胞悬液的物理性质，在交叉配血试验中可以出现交叉配血试验中可以出现非特异性自身凝聚非特异性自身凝聚，因此必须使用，因此必须使用标标准对照准对照(duzho)试验试验，才能得出正确的试验结果，才能得出正确的试验结果 第七页，共十八页。方法学评价方法学评价(pngji)优点：优点：操作操作简单、快捷简单、快捷，曾广泛，曾广泛使用使用(shyng)，适，适用于急诊抢救患者的交叉配血用于急诊抢救患者的交叉配血 缺点缺点：可能使可能使M、N、Fya、Fyb等抗原的抗等抗原的抗体体漏检漏检，存在输血安全隐患，存在输血安全隐患因此目前临床基本已经不再使用酶介质进行因此目前临床基本已经不再使用酶介质进行交叉配血试验交叉配血试验第八页，共十八页。低离子低离子(lz)聚凝胺介质交叉配血试验聚凝胺介质交叉配血试验原理：l聚凝胺（聚凝胺（polybrene）是一种高价阳性季胺盐多聚物，溶解）是一种高价阳性季胺盐多聚物，溶解后可以产生较多的后可以产生较多的正电荷正电荷，可以大量，可以大量中和中和红细胞膜表面的红细胞膜表面的负负电荷电荷，减弱减弱红细胞之间的红细胞之间的排斥力排斥力，使红细胞彼此间的，使红细胞彼此间的距离缩距离缩短短，在离心力的作用下，可以引起正常红细胞，在离心力的作用下，可以引起正常红细胞可逆性可逆性的的非特异性凝集非特异性凝集。l由于降低介质的离子强度，可以增加由于降低介质的离子强度，可以增加(zngji)抗原抗体间的引力抗原抗体间的引力（或降低红细胞膜的（或降低红细胞膜的Zeta点位），可以增强血型抗体凝集红点位），可以增强血型抗体凝集红细胞的能力。细胞的能力。第九页，共十八页。l将红细胞和血清放置在低离子介质中孵育将红细胞和血清放置在低离子介质中孵育(f y)，如果，如果血清中存在不完全性红细胞血型抗体（血清中存在不完全性红细胞血型抗体（IgG类），可类），可以促进抗体和红细胞膜血型抗原结合，加入聚凝胺促进以促进抗体和红细胞膜血型抗原结合，加入聚凝胺促进红细胞凝集。红细胞凝集。l离心后，加入离心后，加入重悬浮液重悬浮液，中和中和聚凝胺的凝集作用，使正常聚凝胺的凝集作用，使正常红细胞的红细胞的凝集解散凝集解散，而，而抗原抗体结合抗原抗体结合引起的红细胞凝集引起的红细胞凝集不不会散开会散开。第十页，共十八页。第十一页，共十八页。实验实验(shyn)仪器与试剂仪器与试剂仪器仪器：台式离心机、显微镜台式离心机、显微镜试剂试剂：生理盐水生理盐水 低离子介质低离子介质(jizh)（LIM）聚凝胺试剂聚凝胺试剂 重悬浮液重悬浮液标本标本：3mlABO同型全血标本同型全血标本2人份人份第十二页，共十八页。实验实验(shyn)步骤步骤1.抽取受血者静脉血抽取受血者静脉血34ml，待凝固后，待凝固后分离血清分离血清；以生理盐水洗涤受血者红；以生理盐水洗涤受血者红细胞细胞3次次，配成，配成3%红细胞悬液红细胞悬液2.将献血者血标本以同样方法分离血清；以生理盐水洗涤献血者红细将献血者血标本以同样方法分离血清；以生理盐水洗涤献血者红细胞胞3次，配成次，配成3%红细胞悬液红细胞悬液3.主侧管主侧管：加受血者血清加受血者血清2滴，献血者红细胞悬液滴，献血者红细胞悬液1滴；滴；次侧次侧管管：加献血者血清加献血者血清2滴，受血者红细胞悬液滴，受血者红细胞悬液1滴滴4.每管各加每管各加LIM溶液溶液0.6ml，混匀，混匀，室温孵育室温孵育1min5.每管各加每管各加2滴聚凝胺溶液滴聚凝胺溶液，混合后，混合后静置静置15s6.1300g离心离心15s，弃弃上清上清7.轻轻摇动试管轻轻摇动试管，目测细胞有无凝集，目测细胞有无凝集，如无凝集，必须重做如无凝集，必须重做8.加入加入2滴重悬浮液滴重悬浮液，并，并轻轻混合轻轻混合，肉眼，肉眼(ruyn)观察结果观察结果9.取载破片一张，用滴管分别从主侧管和次侧管内吸取红细胞悬液各取载破片一张，用滴管分别从主侧管和次侧管内吸取红细胞悬液各1滴，滴，均匀滴放在载玻片上，用显微镜观察结果并记录均匀滴放在载玻片上，用显微镜观察结果并记录第十三页，共十八页。实验实验(shyn)结果结果1.将如果将如果主侧管主侧管和和次侧管次侧管内红细胞内红细胞凝集散开凝集散开，则为聚凝胺，则为聚凝胺引起的引起的非特异性凝集非特异性凝集，表示受血者和献血者两血聚凝胺介，表示受血者和献血者两血聚凝胺介质配血质配血相容相容，献血者血液，献血者血液可以输注可以输注2.如果主侧管或（和）次侧管内红细胞凝集如果主侧管或（和）次侧管内红细胞凝集不散开不散开，则表，则表明明抗原抗原(kngyun)抗体结合的特异性反应抗体结合的特异性反应，两血，两血不相容不相容，献血者，献血者血液血液不可输注不可输注（用户可使用（用户可使用IgG抗抗D抗体（效价抗体（效价64）与）与RhD阳性红细胞反阳性红细胞反应做阳性对照实验，测试本试剂的有效性。）应做阳性对照实验，测试本试剂的有效性。）第十四页，共十八页。注意事项注意事项1.聚凝胺介质交叉配血试验对聚凝胺介质交叉配血试验对Kell血型系统的抗体不能有效血型系统的抗体不能有效检出检出（阴性结果（阴性结果加做抗球蛋白试验加做抗球蛋白试验），但汉族，但汉族kk型几乎型几乎100%。2.临床输血进行交叉配血试验时，应当临床输血进行交叉配血试验时，应当首先首先进行进行盐水介质盐水介质的的交叉配血试验，交叉配血试验，排除完全性（排除完全性（IgM类）红细胞抗体类）红细胞抗体的存在后，的存在后，再进行聚凝胺介质交叉配血试验再进行聚凝胺介质交叉配血试验3.溶血标本不得用于交叉配血试验溶血标本不得用于交叉配血试验4.当重悬浮液加入后，应当重悬浮液加入后，应尽快观察结果尽快观察结果（不可超过（不可超过3min），），以免反应减弱或消失以免反应减弱或消失5.聚凝胺溶液聚凝胺溶液(rngy)放置在玻璃瓶中过久可以导致红细胞凝集过放置在玻璃瓶中过久可以导致红细胞凝集过弱，因此必须弱，因此必须保存在深色塑料瓶中保存在深色塑料瓶中6.聚凝胺是一种聚凝胺是一种抗肝素试剂抗肝素试剂，所以如果使用含肝素的血标本，所以如果使用含肝素的血标本，要加较多的聚凝胺来中和肝素要加较多的聚凝胺来中和肝素第十五页，共十八页。方法学评价方法学评价(pngji)优点：优点：安全、敏感、快速安全、敏感、快速、操作简单操作简单，结果，结果易判定易判定，能为临床安全快速的输血提供有力，能为临床安全快速的输血提供有力保证。保证。聚凝胺介质聚凝胺介质(jizh)配血法反应较盐水法灵敏度配血法反应较盐水法灵敏度高，能检出几乎所有规则抗体及不规则血型高，能检出几乎所有规则抗体及不规则血型抗体，抗体，适用于各类输血患者的配血适用于各类输血患者的配血缺点：缺点：漏检漏检Kell系统系统（见注意事项）（见注意事项）第十六页，共十八页。谢谢！第十七页，共十八页。内容(nirng)总结交叉配血酶法与聚凝胺法。1.酶处理可增强一些抗原抗体系统的反应活性，例如(lr)Rh和Kidd系统。优点：操作简单、快捷，曾广泛使用，适用于急诊抢救患者的交叉配血。8.加入2滴重悬浮液，并轻轻混合，肉眼观察结果。2.如果主侧管或（和）次侧管内红细胞凝集不散开，则表明抗原抗体结合的特异性反应，两血不相容，献血者血液不可输注。4.当重悬浮液加入后，应尽快观察结果（不可超过3min），以免反应减弱或消失。谢第十八页，共十八页。