DB43_T+2708-2023鸭冷冻精液制作技术规程.pdf

DB43/T 27082023 43湖南省地方标准ICS CCS 65.020.30B 43发 布湖南省市场监督管理局鸭冷冻精液制作技术规程Code of practice for making frozen semen of drake2023-08发布-222023-11实施-22 目 次 前言 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语与定义 1 4 准备工作 1 5 精液采集 3 6 精液稀释 4 7 精液品质检测 4 8 细管冷冻精液制作 4 9 细管冷冻精液品质检测 5 10 细管冷冻精液存储和运输 6 11 数据记录 6 附录 A 鸭精液冷冻用液配制与保存 7 附录 B（资料性）鸭采精按摩训练记录表 8 附录 C（资料性）鸭冷冻精液制作记录表 10 附录 D（资料性）鸭种蛋孵化操作 11 附录 E 鸭冷冻精液输精种蛋孵化记录表 14 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南省畜牧兽医研究所、四川农业大学、全国畜牧总站、浏阳市农业发展事务中心、湖南光大牧业科技有限公司、三穗县农业农村局、浏阳市农业农村局、衡阳市农业科学院、湖南陶氏生态禽业科技发展有限公司。本文件主要起草人：刘伯承、王继文、伍国强、燕海峰、李安定、刘启红、胡继伟、孟飞、何珊珊、隋鹤鸣、朱芳贤、邱美珍、姚碧琼、马玉勇、李闯、邓萍、赵晓、江为民、史芳。鸭冷冻精液制作技术规程 1 范围 本文件规定了鸭冷冻精液制作的准备工作，精液采集，精液稀释，精液品质检测，细管冷冻精液制作，细管冷冻精液品质检测，细管冷冻精液存储和运输，数据记录。本文件适用于鸭细管冷冻精液的制作。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 30396 牛冷冻精液包装、标签、储存和运输 NY/T 823 家禽生产性能名词术语和度量计算方法 NY/T 1234 牛冷冻精液生产技术规程 NY/T 3458 种鸡人工授精技术规程 NY/T 4047 家禽精液品质检测方法 DB43/T 2412 鸡冷冻精液制作技术规程 3 术语和定义 GB/T 30396 界定的细管包装，NY/T 823、NY/T 3458 界定的人工授精与种蛋孵化，NY/T 4047 界定的精液品质检测等术语和定义适用于本文件。4 准备工作 4.1 种公鸭 4.1.1 雏鸭留种 按品种标准选留，来源不少于 30 个家系，或者留种数量不少于 100 只120 只（每个家系 3 只4 只）。公母比例：不低于 5：1。4.1.2 上笼前饲养 采用混群饲养，按照各品种种鸭饲养指南执行。4.1.3 上笼 选择发育良好、超过平均体重的个体上笼。日龄与笼具尺寸见表 1。表 1 公鸭上笼日龄与笼具尺寸 上笼日龄（d）笼具尺寸（宽 高 深，cm）120160 40 55 50 4.1.4 上笼后饲养 在上笼与采精等应激期间，拌喂电解多维。4.1.5 阴茎发育检查 公鸭性成熟为 160 日龄200 日龄，利用阶段为 16 月龄18 月龄。操作者呈半蹲状，单膝轻轻压住鸭的背部靠脖颈处，使鸭头向后趴伏。抓住鸭尾羽向上轻提，使肛门朝向操作者。左、右手的大拇指按住肛门两侧、食指和中指放在肛门下侧协同作用，向后下按压，使鸭的腹压增大，轻松翻开泄殖腔，检查阴茎发育情况，正常成年公鸭阴茎长 5 cm8 cm，粗约 1 cm，淘汰阴茎发育不良个体。4.1.6 公鸭采精训练 4.1.6.1 训练周期 先采用背腹式按摩训练 5 d7 d，后用产蛋母鸭诱情训练 5 d7 d。4.1.6.1 背腹式按摩 4.1.6.1.1 按摩要求 每天早上 7：00 左右开始训练，禁止带手套训练，按摩频率与力度适度，按附录 B 记录训练次数、反应级别等数据。第一天每只按摩 1 min，按摩频率为 100 次/min120 次/min。第二天开始继续以 100 次/min120次/min 频率按摩至尾根明显上翘、泄殖腔膨大为止，最多训练 150 s/d（强度过大易使公鸭反射麻木，外翻阴茎也看不到精液现象）。至第 4 d8 d 时，模拟本交爬跨姿势，将公鸭放在母鸭背上，按摩频次约为 30 次40 次，到尾根上翘、阴茎膨大停止。在此阶段，泄殖腔明显膨大个体占 85以上，或者按摩训练至公鸭反应强烈，即按摩时公鸭配合且尾根迅速上翘、阴茎迅速勃起时，即可进入诱情训练阶段。4.1.6.1.2 按摩手法 由一人抓公鸭，放在采精台上，并用右手固定公鸭翅膀基部的胸段，使公鸭呈蹲伏式，让公鸭的后腹部悬于采精台的后面（也可采用单人按摩法，从笼中轻拿出公鸭，右手固定双脚，利用大腿与腰部联合固定公鸭的上半部，左手掌心紧贴公鸭髋关节）。采精员用右（左）手，掌心向下，大拇指和其余四指分开稍弯曲，手掌面紧贴公鸭背部（虎口朝尾部，便于感受阴茎是否膨大），从翅膀的基部向尾部方向有节奏地进行按摩，按摩时右（左）手挤压公鸭尾根部。4.1.6.2.1 诱情方法 抓一只母鸭在公鸭笼外游走，观察公鸭是否兴奋、啄头。将母鸭双脚捆住，左手托住母鸭至兴奋公鸭笼内。等待公鸭衔头爬跨，出现交配表现时即移走母鸭。每只公鸭诱情时间最长为 120 s。至 5 d7 d 时，如将母鸭放入笼中后，公鸭能迅速对母鸭进行衔头和爬跨，表现出强烈的交配欲望，比例达 90以上时即可进入采精阶段。4.1.6.2.2 诱情反应处理 刚开始诱情期间，部分公鸭反应强烈，但是大部分公鸭反应较弱或无反应，此时应根据个体差异区别对待，对于表现强的个体立即停止按摩，采用诱情采精。对于反应较弱的个体，即只表现出对母鸭感兴趣但不能完成射精，则将母鸭不保定放入笼中诱情，密切观察，不能让其完成自然交配。对于无反应个体应加强训练，同时结合诱情以促进其反应，即固定好母鸭位置，将公鸭抱至母鸭背上立稳，然后对公鸭进行背部按摩，以增加其反应，但每次按摩时间不能过长，按摩至阴茎勃起即可。4.1.6.3 淘汰 淘汰训练后不能自主完成衔头、爬跨的个体。4.1.7 剪毛与断料 训练成功，正式采精前应剪掉公鸭泄殖腔周围 5 cm7 cm 区域的羽毛，并断水断料 3 h 4 h。4.2 器具与耗材 容积 5 mL 或 10 mL 铝制冰盒 2 个，其他器具与耗材准备按 DB43/T 2412 规定执行；接触精液器皿使用前用生理盐水冲洗 1 次2 次。4.3 用液准备 按照附录 A 配制稀释液和冷冻保护液，用液保存按 DB43/T 2412 规定执行 5 精液采集 5.1 消毒 用消毒酒精棉擦拭泄殖腔周围区域。5.2 采精正常公鸭 参照 4.1.6.2 的操作，待公鸭啄住母鸭颈部羽毛并站立在母鸭背上，泄殖腔膨大明显，尾根频频摆动时，采精人员一只手拿采精杯抵住母鸭泄殖腔，杯口还需尽量贴近公鸭泄殖腔，另一只手轻轻挤压公鸭泄殖腔，公鸭阴茎弹至集精杯内，迅速收集精液（一只诱情母鸭一般单次诱情 3 只4只公鸭）。5.3 采精困难公鸭 针对可能出现部分公鸭诱情采精效果不稳定现象，应采取人工辅助采精方式进行，即在公鸭爬跨但久不射精时，应将公鸭保定，并将集精杯至于公鸭泄殖腔处，将公鸭尾根提起，并挤压泄殖腔两侧至公鸭阴茎弹出，在公鸭阴茎弹出时将伴随射精。若未出现公鸭向母鸭衔头交配现象，则将公鸭抱至母鸭背上，继续按摩训练至能自行完成衔头、爬跨、交配，并进入诱情采精阶段。5.4 采精间隔 每 2 d3 d 采精一次。5.5 精液外观 呈乳白色，无粪便、血液等污染，体积 0.2 mL/羽以上。精液应避免阳光直射。6 精液稀释 将置于室温的稀释液加入到精液中，轻轻摇匀，原精液与稀释液比例为 1：（23），置于 25冷藏箱中存放，并在 30 min 之内带到实验室。7 精液品质检测 7.1 检测 精子密度与活力检测方法按 DB43/T 2412 规定执行。7.2 品质要求 密度为 15 亿个/mL20 亿个/mL 以上，活力为 65以上。8 细管冷冻精液制作 8.1 冷冻装置准备 按 DB43/T 2412 规定执行。8.2 保护剂添加 向合格精液中加入冷冻保护液，冷冻保护剂（DMF）在精液中占 6。8.3 精液灌装 按 DB43/T 2412 规定执行。8.4 精液冷冻 8.4.1 液氮熏蒸法 细管距离液氮面 0.5 cm2.5 cm。熏蒸 1 min2 min，随后浸入液氮中。操作按 DB43/T 2412 规定执行。8.4.2 程序冷冻仪法 按仪器操作说明，将细管架置于冷冻室，以-40/min 至-80/min 速率从 5 下降到-140，随后浸入液氮中。9 细管冷冻精液品质检测 9.1 解冻 将细管从液氮中取出，在空气中停留 2 s5 s，再迅速浸入 24冰水浴中 30 s60 s。9.2 活力检测 按照 DB43/T 2412 规定执行。精子活力不低于 40为合格。9.3 输精效果检测 9.3.1 输精时间 上午 8：0011：00。9.3.2 输精量 每只母鸡输精 0.2 mL（有效精子数不少于 0.4 亿个），输精深度为 3 cm4 cm。9.3.3 输精间隔 首次输精间隔 24 h 后重复输精 1 次，第 3、4 次间隔 96 h。9.3.4 输精方法 9.3.4.1 翻肛 翻肛人员轻轻打开母鸭笼门，左（右）手快速抓住母鸭翅膀，将母鸭抓出笼外，然后右（左）手抓住母鸭双腿基部，将母鸭的胸部贴于笼子或者食槽上，然后右（左）顺势用力向上抵压母鸭泄殖腔右侧腹部，使腹部内容物往上冒。左手的大拇指与紧贴的其余四指形成虎口，罩入母鸭泄殖腔，并稍用力下压，紧抓母鸭双腿的右手大拇指继续用力抵押泄殖腔右侧，同时左手食指、拇指，一上一下，分别上翻与下压泄殖腔左侧，使泄殖腔翻开，露出输卵管口（左侧口）。9.3.4.2 输精 输精员左手拿集精杯，右手以执笔式持拿消毒后的胶头滴管吸取精液，快速注入左侧输卵管口。推注精液时，翻肛人员松手以降低腹压，防止精液倒流，并使泄殖腔缩回。输精人员抽出胶头滴管，然后用生理盐水或含抗生素浸润的棉纱等擦拭输精管。9.3.5 种蛋收集 第 2 次输精 24 h 后开始，第 4 次输精 4 d 后停止。9.3.6 种蛋孵化 按附录 D 规定执行。9.3.7 结果统计 受精率、受精蛋孵化率按 NY/T 823 执行。将结果与冷冻精液活力、密度进行相关性分析，并确定输精效果检测频次。10 细管冷冻精液存储和运输 10.1 包装材料选择 根据家系冷冻精液数量，搭配容量为 8 根或 4 根拇指管（容量为 25 支细管）的布袋，按照一个布袋一个家系、一根拇指管一个个体或者家系的原则进行。10.2 标识 10.2.1 细管 棉塞封口端 封口端 图 1 冷冻精液细管标记示例 HNXMS 为生产单位湖南省畜牧兽医研究所的代码，YXMY 为攸县麻鸭的品种代码，11-03 为该公鸭家系与个体号，230602 为生产日期 2023 年 6 月 2 日。10.2.2 拇指管 标记品种名称、家系或者个体号、生产日期及冷冻精液数量（仅没有达到最大容量时标注）。10.2.3 布袋 标注品种名称、家系或者个体号、拇指管数量，同一家系有多个布袋的标“N-1”、“N-2”，“N”表示家系或者个体号。10.2.4 外标签 A 面：品种名称、细管数量、布袋数、拇指管数、包装日期。B 面：生产机构、联系电话、解冻方法。10.3 其它 按照 GB/T 30396 的规定执行。11 数据记录 采精按摩训练记录表见附录 B.1，诱情采精记录表见附录 B.2，冷冻精液制作记录表见附录 C，冷冻精液输精孵化记录表见附录 E。HNXMS YXMY 11-03 230602 附 录 A（资料性）鸭精液冷冻用液配制与保存 A.1 稀释液的配制与保存 A.1.1 稀释液配方 精液稀释液配方见表 A.1。表 A.1 精液稀释液配方 中文试剂名 试剂英文名称 每100 mL稀释液 用量 葡萄糖（g）Glucose 0.70 D-果糖（g）D-Fructose 0.20 柠檬酸钾（g）Potassium citrate 0.14 谷氨酸钠（g）Sodium glutamate 1.40 磷酸氢二钠（g）Disodium hydrogen phosphate 0.98 磷酸二氢钠（g）Sodium dihydrogen phosphate 0.21 肌醇（g）Inose 0.70 聚乙烯吡咯烷酮（PVP）（g）Polyvinylpyrrolidone 0.10 硫酸鱼精蛋白（g）Protamine sulfate 0.02 A.1.2 配制方法 A.1.2.1 配制稀释液 称取表 A.1 中试剂定容到 100 mL，稀释液 pH 为 7.3，渗透压为 380400 mOsm/kg。A.1.2.2 配制冷冻保护液 取稀释液加入 DMF（N,N-二甲基甲酰胺）,配置成含 18的冷冻保护液，磁力搅拌 30 min 以上。A.1.2.3 保存方法 25 或-20以下保存。25 条件下保存不应超过 48 h，冷冻保存的用液解冻后不应二次冷冻。附 录 B（资料性）鸭采精训练记录表 B.1 鸭采精按摩训练记录表见表 B.1。表 B.1 鸭采精按摩训练记录表 品种：训练员：训练天数：日期：公鸭编号 按摩 次数 按摩 时长 尾根部是否上翘 尾根部上翘（按摩次数）泄殖腔 否膨大 泄殖腔膨大（按摩次数）硬度 A、B、C 外生殖腔是否自然外翻 自然外翻 精液有无 备注 注：A 为按摩时间短，泄殖腔膨大明显；B 为按摩时间长，泄殖腔膨大明显；C 为按摩时间长，泄殖腔不膨大或不明显。DB43/T 27082023 8 表 B.2 公鸭诱情采精记录表 品种：训练第几天：训练员：日期：公鸭编号 笼外衔头 笼内衔头 爬跨 射精时间 射精现象 备注 注：笼外衔头指母鸭靠近公鸭即表现出衔头等现象；笼内衔头指母鸭放入笼内后公鸭表现出衔头等行为；爬跨指母鸭放入公鸭笼后公鸭表现出衔头、爬跨等交配行为；射精时间指公鸭完成爬跨与射精所需时间；射精现象指公鸭自行射精（标注 A），人工辅助挤压射精（标注 B）。DB43/T 27082023 9 附 录 C（资料性）鸭冷冻精液制作记录表 鸭冷冻精液制作记录表见表 C.1。表 C.1 鸭冷冻精液制作记录表 品种：地点：日期：稀释液配制日期：冷冻保护液配制日期与浓度：公鸭编号 家系 原精量（mL）精子密度（级）稀释后 活力（）冻后 活力（）制作数（支）检测数（支）保存数（支）合格率（）合计（平均）备注：细管标识由棉塞端开始，制作单位+品种+家系-公禽个体+制作日期（例如攸县麻鸭的细管标识为，HNXMS YXMA 01-05 230522）DB43/T 27082023 10 附 录 D（资料性）鸭种蛋孵化操作程序 D.1 种蛋消毒 D.1.1 次数 分 2 次进行，一次是在种蛋收集后及时消毒；二次是在入孵前。D.1.2 方法 D.1.2.1 福尔马林熏蒸消毒 入孵前的种蛋，每立方米空间用高锰酸钾 15 g，福尔马林 30 mL，温度不低于 25、湿度不低于75，密闭熏蒸至少 20 min。D.1.2.2 新洁尔灭浸泡消毒 用 0.1的新洁尔灭溶液（温度 30 32）浸泡种蛋 5 min 后，取出晾干，入孵或送入蛋库。D.1.2.3 高锰酸钾溶液浸泡 浓度为 0.030.05，水温为温度 35 40，喷洒于蛋的表面或者浸泡 3 min。D.2 种蛋储存 D.2.1 温度 7 d 之内温度为 14 18，超过 7 d 为 10 13，并应缓慢降温。D.2.2 湿度 相对湿度为 7080。D.2.3 空气 空气要新鲜，每日中午须将蛋库风扇打开 30 min60 min。D.2.4 翻蛋 种蛋存放宜在 3 d5 d 入孵，如果超出则应进行翻蛋，早中晚各翻蛋 1 次。D.3 洗蛋 D.3.1 次氯酸钠洗蛋液 次氯酸钠溶液需放在 20-25 的环境存放，存放日期不宜超过一周。使用前参照附件次氯酸钠溶液中有效氯含量的测定 检测次氯酸钠原液浓度，按需求配制合适浓度的洗蛋液药水。D.3.2 水温控制在 30 38。D.3.3 洗蛋液有效氯浓度为 0.250.30。产蛋前期和产蛋后期种蛋可同期混合洗蛋，洗蛋液浓度设置为 0.24；产蛋中期种蛋单独洗蛋，洗蛋浓度设置为 0.16。D.3.4 洗蛋时间为 20 min30 min，洗蛋后需用清水（30 35）淋浴一次。D.3.5 适用性 一般巷道与大箱体孵化机采用这种方式。D.4 孵化 D.4.1 码盘 将种蛋大头向上、朝向一致。入孵前，先使孵化室内的温度、湿度分别达到 24 28 和 5565，然后再把种蛋放在孵化室内存放 6 h10 h 进行预温。宜在下午 4：006：00 入孵，使雏鸭出壳时间集中在第 28 天白天。D.4.2 温度 D.4.2.1 恒温孵化 若种蛋数量有限，需将种蛋分 3 批4 批次（每隔 4 d6 d 一批）装入同一孵化器 孵化。孵化器内的温度设定为 37.8。种蛋入机时，将新、老蛋交错放置。D.4.2.2 变温孵化 若种蛋来源充足，一次性即可将孵化器装满，针对不同胚龄的种蛋设定不同的孵化温度。1 胚龄4 胚龄 38.2 38，5 胚龄10 胚龄 37.9，11 胚龄14 胚龄 37.8，15 胚龄21 胚龄37.7，以 2 d3 d 为单位逐渐降温至 37.2，21 胚龄25 胚龄 37 37.2，出雏机温度37.236.9。夏季比冬季温度适当降低 0.2。D.4.3 湿度 总的原则是“两头高，中间低”。前期为 6570、中期为 6055、后期为 6575，根据失水情况调整湿度。若采用恒温化法，相对湿度可设定为 6570。D.4.4 翻蛋 孵化过程中应保持每 1 h 翻蛋 1 次，翻蛋角度为 90100。D.4.5 照蛋 在 10 胚龄13 胚龄照蛋。D.4.6 凉蛋 D.4.6.1 方法 夏季凉蛋，在孵化第 9 d 时开始直至落盘凉蛋，每天早晚凉蛋各 1 次，可将 25 30 的清水喷在胚蛋上降温。整批入孵时，可采用机内凉蛋法，即关闭供温电路，打开机门，让风机继续运行，每次降温至 32 35 时停止（一般用眼皮或手掌背侧试温的办法，以感觉蛋的小头达到微温的程度为止）；分批入孵时，可采用机外凉蛋法，即将胚蛋从孵化器中取出，在室温下凉蛋。随着胚龄的增长，可以适当增加喷水凉蛋的次数和时间。D.4.6.2 适用性 一般是小箱体孵化采用此方式。室温在 16 以下，不需凉蛋。D.4.7 落盘 至 25 d26 d 后的胎蛋移到出雏盘里孵至出雏。在此之前，应将出雏器内的温度、湿度分别调整到相应的温度和湿度。D.4.8 出雏 胚胎在 27 d 开始出雏，在 28 d 左右结束。此时应关闭器内照明灯，雏鸭出壳毛干后，及时捡出雏鸭与蛋壳。附 录 E（资料性）鸭冷冻精液输精种蛋孵化记录表 鸭冷冻精液输精孵化记录表见表 E.1。表 E.1 鸭冷冻精液输精孵化记录表 公鸭品种：母鸭品种：母鸭月龄：操作/记录人：冻精批次 解冻活力 输精日期 入孵 日期 入孵数 无精蛋数 死胚数 出雏数 健雏数 备注