DB4112_T 317—2023TCS畜牧兽医技能竞赛++兽医化验员现场技能操作规范+.pdf

ICS 65.020.30 B41 DB4112 三门峡市地方标准 DB 4112/T 3172023 畜牧兽医技能竞赛 兽医化验员现场技能操作规范 2023-06-06 发布 2023-09-06 实施 三门峡市市场监督管理局 发 布 前 言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由三门峡市农业农村局提出并归口。本文件主要起草单位：三门峡市动物疫病预防控制中心、卢氏县农业农村局、渑池县动物疫病预防控制中心、河南牧业经济学院、卢氏县动物卫生监督所、三门峡市陕州区农业农村局、灵宝市家畜改良站、灵宝市乡镇畜牧兽医站、灵宝市动物疫病预防控制中心。本文件主要起草人：王建科、韩光晖、檀琳、陈益、张春花、亢展展、杨爱霞、张燕、麻文建、陈爱丽、韩新慧、薛亚南、刘锋、谢苏辉、贾明、贾文杰、姚丽丽、黄留柱、李冬歌、刘伟峰。畜牧兽医技能竞赛 兽医化验员现场技能操作规范 1 范围 本文件规定了畜牧兽医技能竞赛兽医防治员现场技能考核的术语和定义、竞赛规则、竞赛项目及要求。本文件适用于三门峡市畜牧兽医技能竞赛兽医防治员现场技能操作。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 18641 伪狂犬病诊断方法 GB/T 18936 高致病性禽流感诊断技术 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 畜牧兽医技能竞赛 畜牧兽医技能竞赛是依据国家农业职业技能标准，结合生产和经营工作实际开展的以突出操作技能和解决实际问题能力为重点的、有组织的竞赛活动。3.2 消毒 利用物理、化学或生物学方法杀灭或清除外界环境中的病原体，从而切断其传播途径、防止疫病的流行叫做消毒。4 竞赛内容 兽医化验员技能竞赛兽医化验员现场技能考核分为鸡翅静脉采血、鸡心脏采血、猪前腔静脉采血、血凝(HA)试验和酶联免疫吸附（ELISA）试验等 5 项。5 操作规范及评分细则 5.1 猪前腔静脉采血 本项目提供的器械物品：10mL 一次性采血器、采样单、记号笔、考试专用笔、碘伏棉球、干棉球、镊子、托盘、试管架、毛巾、卷纸、洗手液、垃圾桶、猪、保定器（可以自带）等。猪前腔静脉采血操作规范及评分表见附录 A。5.2 鸡翅静脉采血 本项目提供的器械物品：5mL 一次性采血器、采样单、记号笔、考试专用笔、碘伏棉球、干棉球、镊子、托盘、试管架、毛巾、卷纸、洗手液、垃圾桶、鸡等。鸡翅静脉采血操作规范及评分表见附录 B。5.3 鸡心脏采血 本项目提供的器械物品：5mL 一次性采血器、采样单、记号笔、考试专用笔、碘伏棉球、干棉球、镊子、托盘、试管架、毛巾、卷纸、洗手液、垃圾桶、鸡等。鸡心脏采血操作规范及评分表见附录 C。5.4 血凝试验 本项目提供的器械物品：一次性反应板、记号笔、标准抗原、移液槽 3 个、PBS 液、1%红细胞、废液缸等。血凝试验操作规范及评分表见附录 D。5.5 ELISA 试验 本项目提供的器械物品：移液槽 5 个、稀释板、酶标板、记号笔、待检样品 4 份、阴性血清、阳性血清、样品稀释液、酶结合物、底物、终止液、废液缸等。ELISA 试验操作规范及评分表见附录 E。A A 附 录 A（规范性）猪前腔静脉采血操作规范及评分表 A.1 猪前腔静脉采血操作规范及评分表 表 A.1 猪前腔静脉采血操作规范及评分表 操作规范 评判要点 完成情况 扣分值 实际 扣分 操作操作规范规范度（度（40分）分）按指令进行操作，得 3 分；在主持人下达指令之前进行 任何操作的或主持人宣布停止操作后继续操作的，均不得分，包括在宣布采血环节“预备开始”前，参赛选手提前越过红线进入场 地、提前拆开采血器包装袋、提前打开着器皿盖等准备工作。按指令进行操作 是 否 0 4 独立完成操作，得 3 分；除保定外，有队友语言提示、动作暗示或协助操作等违规行为的，均不得分，违规者该项也不得分。独立完成操作 是 否 0 4 用镊子夹取碘伏棉球对采血部位由里向外做点状螺旋式消毒，得 2 分；否则不得分。用镊子夹取碘伏棉球对采血部位由里向外做点状螺旋式消毒 是 否 0 2 采血，1 次进针完成的，得 15 分；2 次进针完成的，得 10 分；3 次及以上进针完成的，得 5 分；血管外采血不得分。采血 1 次进针 2 次进针 3 次及以上进针 血管外采血 0 5 10 15 退针时用灭菌棉球按压采血部位，得 2 分，否则不得分；徒手取棉球的或针头插入猪体后，再取灭菌棉球的也不得分。退针后用干棉球按压采血部位 是 否 针头插在猪体上,双手离开 0 2 2 采血后，将采血器活塞外拉预留血清析出空间，得 2 分；否则不得分。采血后，采血器活塞外拉预留血清析出空间 是 否 0 2 用采血器针头挑起护针帽，使护针帽套在针头上，去除推杆，得 4 分；否则不得分。采血器套上护针帽，去除推杆 是 否 0 2 在采血器上标明样品编号（编号自拟），得 2 分；否则不得分。采血器上标样品编号 有 无 0 2 将采血器插入试管架，得2 分；否则不得分。采血器插入试管架 是 否 0 2 规范填写采样单，得 4 分；动物种类一栏选“猪”、健康状况一栏任选一种、样品类型选“血”、样品数量填“1”、样品编号与采血器上编号一致、采样人签名、填写采样日期等 7 项，漏填或错误选填 1 规范填写采样单 完整 漏填或错填 1 项 漏填或错填 2 项及以上 0 2 4 项，得 2 分，漏填或错误选填 2 项及以上者，不得分。规范处置废弃物，得 1 分；使用过的棉球、采血器推杆、采血器包装等废弃物未放入垃圾桶，均不得分。规范处置废弃物 是 否 0 1 操作操作规速规速度（度（40分）分）采血时间 采血过程中猪死亡 采血量5mL 操作时间15 秒 15 秒操作时间20 秒 20 秒操作时间25 秒 25 秒操作时间30 秒 30 秒操作时间35 秒 35 秒操作时间40 秒 40 秒操作时间45 秒 45 秒操作时间50 秒 50 秒操作时间55 秒 55 秒操作时间1 分钟 操作时间1 分钟 40 40 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 实际采血时间：分 秒 总扣分总扣分 得分（满分得分（满分 80 分）分）裁判签字：参赛选手签字：备注：该项操作限 3 分钟内完成。采样单上填写字迹不清楚或潦草视为未填。B B 附 录 B（规范性）鸡翅静脉采血操作规范及评分表 B.1 鸡翅静脉采血操作规范及评分表 表 B.1 鸡翅静脉采血操作规范及评分表 操作规范 评判要点 完成情况 扣分值 实际 扣分 操作操作规范规范度（度（40分）分）按指令进行操作，得分；在主持人下达指令之前进行任何操作的或主持人宣布停止操作后继续操作的，均不得分，包括在宣布采血环节“预备开始”前，参赛选手提前越过红线进入场地、提前拆开采血器包装袋、提前打开着器皿盖等准备工作。按指令进行操作 是 否 0 4 独立完成操作，得分；除保定外，有队友语言提示、动作暗示或协助操作等违规行为的，均不得分，违规者该项也不得分。独立完成操作 是 否 0 4 用镊子夹取碘伏棉球对采血部位由里向外做点状螺旋式 消毒，得 2 分；否则不得分。用镊子夹取碘伏棉球对采血部位由里向外做点状螺旋式消毒 是 否 0 2 采血，1 次进针完成的，得 15 分；2 次进针完成的，得 10 分；3 次及以上进针完成的，得 5 分；血管外采血不得分。采血 1 次进针 2 次进针 3 次及以上进针 血管外采血 0 5 10 15 退针时用灭菌棉球按压采血部位，得 2 分，否则不得分；徒手取棉球的或针头插入鸡体后，再取灭菌棉球的也不得分。退针后用干棉球按压采血部位 是 否 针头插在鸡体上,双手离开 0 2 2 采血后，将采血器活塞外拉预留采血后，采血器 是 0 血清析出空间，得 2 分；否则不得分。活塞外拉预留血清析出空间 否 2 用采血器针头挑起护针帽，使护针帽套在针头上，去除推杆，得分；否则不得分。采血器套上护针帽，去除推杆 是 否 0 2 在采血器上标明样品编号（编号自拟），得 2 分；否则不得分。采血器上标样品编号 有 无 0 2 将采血器插入试管架，得 2 分；否则不得分。采血器插入试管架 是 否 0 2 规范填写采样单，得 4 分；动物种类一栏选“鸡”、健康状况一栏任选一种、样品类型选“血”、样品数量填“1”、样品编号与采血器上编号一致、采样人签名、填写采样日期等 7 项，漏填或错误选填 1 项，得 2 分，漏填或错误选填 2 项及以上者，不得分。规范填写采样单 完整 漏填或错填 1 项 漏填或错填 2 项及以上 0 2 4 规范处置废弃物，得 1 分；使用过的棉球、采血器推杆、采血器包装等废弃物未放入垃圾桶，均不得分。规范处置废弃物 是 否 0 1 操作操作规规速速度（度（40分）分）采血时间 采血过程中鸡死亡 采血量2mL 操作时间20 秒 20 秒操作时间25 秒 25 秒操作时间30 秒 30 秒操作时间35 秒 35 秒操作时间40 40 0 5 10 15 40 秒 40 秒操作时间45 秒 45 秒操作时间50 秒 50秒操作时间1分钟 操作时间1 分钟 20 25 30 35 40 实际采血时间：分 秒 总扣分总扣分 得得分（满分分（满分 80 分）分）裁判签字：参赛选手签字：备注：该项操作限 3 分钟内完成。采样单上填写字迹不清楚或潦草视为未填。C C 附 录 C（规范性）鸡心脏采血操作规范及评分表 C.1 鸡心脏采血操作规范及评分表 表 C.1 鸡心脏采血操作规范及评分表 操作规范 评判要点 完成情况 扣分值 实际 扣分 操作操作规范规范度（度（40分）分）按指令进行操作，得 3 分；在主持人下达指令之前进行任何操作的或主持人宣布停止操作后继续操作的，均不得分，包括在宣布采血环节“预备开始”前，参赛选手提前越过红线进入场 地、提前拆开采血器包装袋、提前打开着器皿盖等准备工作。按指令进行操作 是 否 0 4 独立完成操作，得 3 分；除保定外，有队友语言提示、动作暗示或协助操作等违规行为的，均不得分，违规者该项也不得分。独立完成操作 是 否 0 4 用镊子夹取碘伏棉球对采血部位由里向外做点状螺旋式消毒，得 2 分；否则不得分。用镊子夹取碘伏棉球对采血部位由里向外做点状螺旋式消毒 是 否 0 2 采血，1 次进针完成的，得 15 分；2 次进针完成的，得 10 分；3 次及以上进针完成的，不得分。采血 1 次进针 2 次进针 3 次及以上进针 血管外采血 0 5 10 15 退针时用灭菌棉球按压采血部位，得 2 分，否则不得分；针头插入鸡体后，再取灭菌棉球的也不得分。退针后用干棉球按压采血部位 是 否 针头插在鸡体0 2 2 上,双手离开 采血后，将采血器活塞外拉预留血清析出空间，得 2 分；否则不得分。采血后，采血器活塞外拉预留血清析出空间 是 否 0 2 用采血器针头挑起护针帽，使护针帽套在针头上，去除推杆，得分；否则不得分。采血器套上护针帽，去除推杆 是 否 0 2 在采血器上标明样品编号（编号自拟），得 2 分；否则不得分。采血器上标样品编号 有 无 0 2 将采血器插入试管架，得 2 分；否则不得分。采血器插入试管架 是 否 0 2 规范填写采样单，得 4 分；动物种类一栏选“鸡”、健 康状况一栏任选一种、样品类型选“血”、样品数量填“1”、样品编号与采血器上编号一致、采样人签名、填写采样日期等 7 项，漏填或错误选填 1 项，得 2 分，漏填或错误选填 2 项及以上者，不得分。规范填写采样单 完整 漏填或错填 1项 漏填或错填 2项及以上 0 2 4 规范处置废弃物，得 1 分；使用过的棉球、采血器推 杆、采血器包装等废弃物未放入垃圾桶，均不得分。规范处置废弃物 是 否 0 1 操作操作规速规速度（度（40分）分）采血时间 采血过程中鸡死亡 采血量2mL 操作时间15秒 15 秒操作时间20 秒 20 秒操作时间25 秒 25 秒操作时40 40 0 5 10 间30 秒 30 秒操作时间35 秒 35 秒操作时间40 秒 40 秒操作时间50 秒 50 秒操作时间1 分钟 操作时间1 分钟 15 20 25 30 35 40 实际采血时间：分 秒 总扣分总扣分 得分（满分得分（满分 80 分）分）裁判签字：参赛选手签字：备注：该项操作限 3 分钟内完成。采样单上填写字迹不清楚或潦草视为未填。D D 附 录 D（规范性）血凝试验操作规范及评分表 D.1 血凝试验操作规范及评分表 表 D.1 血凝试验操作规范及评分表 操作规范 评判要点 完成情况 扣分值 实际 扣分 操作操作规范规范度（度（20分）分）移液器的量程调至试验规定要求，得 1 分；否则不得分。移液器的量程调至试验规定要求 是 否 0 1 移液器安装 Tip 头轻轻旋转或下压安装，不少于 4次（加稀释液、加抗原、补加稀释液、加红血球）均按要求完成者，得 2 分；少一次扣 0.5 分，实验中Tip 头脱落的，本次不得分。移液器安装Tip头轻轻旋转或下压安装，不少于 4 次，实验中Tip 头脱落 是 否，安装 3 次 否，安装 2 次 否，安装 1 次 否，安装 0 次 实验中 Tip 头脱落 0 0.5 1 1.5 2 2 加不同液体时换 Tip 头，需换 3 次（加抗原、补加稀释液、加红血球），3 次均按要求完成者，得 9 分；少换一次扣 3 分。加不同液体时换 Tip 头，需换3 次 是 否，换 2 次 否，换 1 次 否，换 0 次 0 3 6 9 在添加抗原、红细胞、补加 PBS 时需悬空，符合要求者，得 3 分；否则，少一次扣 1 分。在添加抗原、红细胞、补加 PBS时需悬空 是 否，悬空 2 次 否，悬空 1 次 否，悬空 0 次 0 1 2 3 1%鸡红细胞悬液摇匀后再加，符合要求者，得 2分；否则不得分。1%鸡红细胞悬液摇匀后再加 是 否 0 2 加 1%鸡红细胞震荡，符合要求者，得 1 分；否则不得分。加 1%鸡红细胞震荡 是 否 0 1 实验结束后，将所用移液器调至最大量程，得 1 分；否则不得分。实验结束后，将所用移液器调至最大量程 是 否 0 1 液体、固体废弃物妥善处置，符合要求者，得 1 分；否则不得分。液体、固体废弃物妥善处置 有 否 0 1 操作操作准确准确度（度（60分）分）对照孔（第 10 孔）红细胞呈明显的纽扣状沉到孔底（即 不凝集）则试验成立；如果 64 单位抗原配制正确并且血凝试验操作正确，那么应该在每排的前 6 孔（64=26）出现完全凝集而 第 7、8、9 孔则不出现凝集。7 排以上（含 7 排）正确为合格。全部合格 向前或向后错一孔 向前或向后错两孔 向前或向后错两孔 以上者不得分。出现跳孔、违规、失败或在规定时间内未完成 0 10 20 60 60 实际用时：分 秒 总扣分总扣分 得分（满分得分（满分 80 分）分）裁判签字：参赛选手签字：备注：该项操作限 5 分钟内完成，提前或延后均按违规处理。每名选手做 8 排，每排做 10 孔（其中第 10 孔为 空白对照），加样完毕振荡后算结束。采样单上填写字迹不清楚或潦草视为未填。E E F 附 录 E（规范性）ELISA 试验操作规范及评分表 E.1 试验操作规范及评分表 表 E.1 ELISA 试验操作规范及评分表 操作规范 评判要点 完成情况 扣分值 实际 扣分 操作操作规范规范度（度（20分）分）每一步骤移液器的量程调至试验规定要求，需调 3次（稀释样品、转移样品、加终止液），3 次均按要求完成者，得 9 分；少一次扣 3 分。移液器的量程调至试验规定要求，需调 3次 是 否，调 2 次 否，调 1 次 否，调 0 次 0 3 6 9 移液器装 Tip 头轻轻旋转装或下压安装，需 13 次（步骤 7 次，样品 4 次，阴性对照 1 次，阳性对照1 次），13 次均按要求完成者，得 13 分；少 1 次扣 1分，实验中 Tip 头脱落的，本次不得分。移液器安装Tip头轻轻旋转或下压安装，不少于 4 次，实验中Tip 头脱落 是 否，安装 12 次 否，安装 11 次 否，安装 10 次 否，安装 9 次 否，安装 8 次 否，安装 7 次 否，安装 6 次 否，安装 5 次 否，安装 4 次 否，安装 3 次 否，安装 2 次 否，安装 1 次 否，安装 0 次 实验中 Tip 头脱落 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 13 转移样品至反应板前将样品混匀，得 3 分；否则不转移样品至反 是 0 得分。应板前将样品混匀 否 3 加不同液体时换 Tip 头，需换 13 次（加稀释液、稀释样品、转移样品、加洗液、加酶标二抗、加洗液、加底物、加终止液），13次均按要求完成者，得 26分；少换一次扣 2 分。加不同液体时换 Tip 头，需换13 次 是 否，换 Tip 头 12 次 否，换 Tip 头 11 次 否，换 Tip 头 10 次 否，换 Tip 头 9 次 否，换 Tip 头 8 次 否，换 Tip 头 7 次 否，换 Tip 头 6 次 否，换 Tip 头 5 次 否，换 Tip 头 4 次 否，换 Tip 头 3 次 否，换 Tip 头 2 次 否，换 Tip 头 1 次 否，换 Tip 头 0 次 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 ELISA 反应板每次加液体时（转移样品、加洗液、加酶标二抗、加洗液、加底物、加终止液）需悬空，6 次均按要求完成者，得12 分；加到孔外或不悬空者，1 次扣 2 分。ELISA 反应板每次加液体时需悬空 是 否，悬空 5 次 否，悬空 4 次 否，悬空 3 次 否，悬空 2 次 否，悬空 1 次 否，悬空 0 次 0 2 4 6 8 10 12 洗涤 2 次，每次至少 3 遍，每遍每孔加洗液 300L，少 1 遍扣 2 分；按要求完成者，得 12 分。洗涤 2 次，每次至少 3 遍，每遍每 孔 加 洗 液300L 是 否，洗涤 5 遍 否，洗涤 4 遍 否，洗涤 3 遍 否，洗涤 2 遍 0 2 4 6 8 否，洗涤 1 遍 否，洗涤 0 遍 10 12 最后 1 次洗涤后需拍干，共 2 次，2 次均按要求完成者，得 2 分；少 1 次扣1 分。最后 1 次洗涤后需拍干，共 2次 是 否，拍干 1 次 否，拍干 0 次 0 1 2 实验结束后，将所用移液器调至最大量程，得 2 分；否则不得分。实验结束后，将所用移液器调至最大量程 有 否 0 2 液体、固体废弃物妥善处置，得 1 分；否则不得分。液体、固体废弃物妥善处置 有 否 0 1 违规、试验操作步骤错误或在规定时间内未完成者不得分。违规、试验操作步骤错误或在规定时间内未完成 有 否 0 80 实际用时：分 秒 总扣分总扣分 得分（满分得分（满分 80 分）分）裁判签字：参赛选手签字：备注：该项该项操作限 5 分钟内完成，提前或延后均按违规处理。采样单上填写字迹不清楚或潦草视为未填。F G 附 录 F（资料性）采样单 F.1 采样单 F.1 采样单 户 主：XXX 地 址：XXX 省 XXX 市 XXX 区 XXX 街道 动 物 种 类：猪 牛 羊 鸡 鸭 鹅 存 栏 数：1 头/只/羽 健 康 状 况：健康 患病 样 品 类 型：血 肝 脾 肾 肺 喉头气管 脑 心 样 品 数 量：样 品 编 号：无需填入编号 采 样 人：采 样 日 期：被采样单位签字：张 三 _