DB34_T 3715-2020白鹤芋组培快繁技术规程(高清正版）.pdf

ICS 65.020.20 CCS B 05 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 37152020 白鹤芋组培快繁技术规程 Technical regulations for tissue culture and rapid propagation of Spathiphyllum kochii 文稿版次选择 2020-11-27 发布 2020-12-27 实施安徽省市场监督管理局 发 布 DB34/T 37152020 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由阜阳师范大学提出。本文件由安徽省林业局归口。本文件起草单位：阜阳师范大学、安徽大汇生态科技发展有限公司、亳州市花易捷花卉经营管理有限公司、安徽农之源生态农业有限公司、安徽省农业科学院、太和县淼林现代农业发展有限公司。本文件主要起草人：兰伟、凌飞东、郑萍、任杰、尚冰冰、刘晓艳、谢欣雨、张源、胡新、王静宇、王显梅、刘峰、王先亮、侯林威。DB34/T 37152020 1 白鹤芋组培快繁技术规程 1 范围 本文件规定了白鹤芋（Spathiphyllum kochii）组培快繁的组培设施、培养基配制、愈伤组织诱导培养、继代增殖培养、生根培养、炼苗、组培苗分级、档案管理。本文件适用于白鹤芋组培育苗生产。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。LY/T 2289 林木种苗生产经营档案 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 组培设施 按照 NY/T 2306 的规定执行。5 培养基配制 5.1 培养基类型的选择 选择 MS 培养基为基本培养基。5.2 MS 培养基配制 按照 NY/T 2306 的规定执行。5.3 培养基配方 5.3.1 腋芽诱导培养基 MS6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖 30 g/L+卡拉胶 5.5 g/L。5.3.2 继代增殖培养基 DB34/T 37152020 2 MS6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L KT（6-糠基氨基嘌呤）0.1 mg/L+白砂糖 30 g/L+卡拉胶5.5 g/L。5.3.3 生根培养基 1/2 MS NAA 0.5 mg/LAC（活性炭）0.3 g/L+白砂糖 20 g/L+卡拉胶 5.5 g/L。5.4 培养基 pH 值 用 pH 计或 pH 试纸测培养基 pH 值，用 1mol/L HCL 或 1 mol/L NaOH 调节培养基 pH 值至 5.8。5.5 培养基分装 利用自动灌装机分装，每升分装 2530 瓶。分装时培养基不得沾在培养瓶口周围。5.6 培养基灭菌 在 1.1 kgcm-21.2 kgcm-2、121下，培养基灭菌 15 min20 min，并尽快取出存放固定位置，不得与未灭菌物品混放。配制的培养基应 12 h 内进行灭菌。6 愈伤组织诱导培养 6.1 外植体选取 在生长健壮、无病虫害的白鹤芋植株上，选取幼嫩的侧芽为外植体备用。6.2 外植体清洗 将选取的外植体在自来水下流水冲洗 15 min20 min。6.3 外植体消毒 在超净工作台上，用无菌滤纸吸干外植体表面水分，浸入 70乙醇中消毒 20 s30 s后，将 70乙醇倒去，用无菌水冲洗 3 次，再浸入 2.0次氯酸钠溶液消毒 15 min20 min，倒出次氯酸钠溶液，用无菌水冲洗 45 次，置于无菌滤纸上晾干备用。6.4 外植体接种 6.4.1 接种工具消毒 将剪刀、镊子等接种工具在高压灭菌锅中灭菌后，放置在超净工作台上。接种时，接种工具用电热灭菌器灭菌，然后在无菌工具放置架上冷却至室温备用。6.4.2 接种 将已消毒的外植体去除外层苞叶和下端切口，留取 1.5 cm2.0 cm 长顶芽，接种在 4.3.1 腋芽诱导培养基上。每瓶培养基接种 2 个3 个顶芽。6.4.3 标记 接种后，每批用记号笔将品种代号、培养基编号、工作人员编号及接种日期等信息标示在培养瓶上；记录本人的接种数量，包括母瓶数和接种瓶数。DB34/T 37152020 3 6.5 培养条件 培养温度为 2426，光照强度 2000 lx3000 Lx，连续定时光照时间 12 h/d。6.6 培养时间 外植体接种后，连续培养 20 d 左右，外植体逐渐膨大，叶腋处萌发许多不定芽。继续培养 45 d50 d 后，不定芽长成芽丛。7 继代增殖培养 7.1 转接 将芽丛分成大小相对一致的两半，转接到 4.3.2 继代增殖培养基上培养。如此反复，通过以芽丛倍增的方式，实现幼苗大量增殖。7.2 培养条件 培养温度为 2426，光照强度 2000 lx3000 Lx，连续定时光照时间 12 h/d。7.3 培养时间 一般为 45 d 左右。7.4 培养代数 继代增殖次数控制在 10 代以内。8 生根培养 8.1 转接 将苗高 3.0 cm 以上，生长健壮、长势一致的无根组培苗，转接到生根培养基中。8.2 培养条件 培养温度为 2426，光照强度 2000 lx3000 Lx，连续定时光照时间 12 h/d。8.3 培养时间 一般为 30 d 左右。9 炼苗 9.1 炼苗标准 培养瓶内生长的根、茎、叶俱全的完整植株，基部长出 35 条不定根，株高 4.0 cm6.0 cm，34 片叶时，便可炼苗。9.2 炼苗条件 DB34/T 37152020 4 将培养瓶放置在遮阳度为 5070，温度为 2426的温室中，把培养瓶盖全部打开或半打开炼苗。9.3 炼苗时间 一般炼苗时间为 3 d5 d，然后再移栽。10 组培苗分级 根据植株长势，叶片色泽，结合苗高，可将白鹤芋组培苗分为一级苗、二级苗、三级苗和不合格苗。通常一级苗苗高 6.0 cm（含 6.0 cm）以上，二级苗苗高 5.0 cm6.0 cm（含 5.0 cm），三级苗苗高4.0 cm5.0 cm（含 4.0 cm），苗高 4.0 cm 以下为不合格苗。11 档案管理 按照 LY/T 2289 的规定执行。_