DB43∕T 2582-2023 多花黄精组织培养育苗技术规程(湖南省).pdf

ICS 11.120.01 CCS B38 43 湖南省地方标准 DB 43/T 25822023 多花黄精组织培养育苗技术规程 Code of practice for propogation via tissue culture of Polygonatum cyrtonema Hua 2023-04-10 发布 2023-07-10 实施 湖南省市场监督管理局 发 布 DB 43/T 25822023 I 目次 前言.III 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 组培室消毒处理.1 5 外植体采集.1 6 外植体处理.1 7 培养基制备.2 8 组织培养.2 9 移栽.2 10 出苗.3 11 包装、标志、运输.3 12 档案管理.4 附录 A（资料性）组织培养配方.5 附录 B（资料性）生产档案.6 DB 43/T 25822023 III 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南农业大学、湖南岳麓山中药材创新中心有限公司、湖南省农业环境生态研究所、湘西土家族苗族自治州农业科学研究院、湖南省棉花科学研究所、湖南省中药材产业协会、新化县中药材协会、湖南银鸿农业发展有限公司、新化县天龙山农林科技发展有限公司、湖南华夏湘众药业饮片有限公司、新化县颐朴源黄精科技有限公司、安化中源农业发展有限公司、株洲济世农业发展有限公司。本文件主要起草人：严蓓、曾建国、南小航、宋荣、雷艳、贺璐、李庠、熊绍军、孙梦珊、周利、朱校奇、杨子墨、蒋双辉、王秋娇、周伊昀、刘智、邹辉、蒋丰登、王伯求。DB 43/T 25822023 1 多花黄精组织培养育苗技术规程 1 范围 本文件规定了多花黄精组织培养育苗过程中组培室消毒处理、外植体采集、外植体处理、培养基制备、组织培养、炼苗与移栽、出苗、包装运输、档案管理等技术要求。本文件适用于湖南省多花黄精组织培养育苗。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 4285 农药安全使用标准 GB/T 8321 农药合理使用准则（所有部分）LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。多花黄精 Polygonatum cyrtonema Hua 百合科黄精属的多年生草本植物，中药材黄精基源植物之一。根状茎肥厚，少有近圆柱形，茎高可达100 cm，叶互生，椭圆形、卵状披针形至矩圆状披针形，伞形花序，花被黄绿色，浆果黑色，5月6月开花，8月10月结果。4 组培室消毒处理 组培室用1000 倍液 84消毒液或 75%乙醇喷洒地面，保持室内清洁。超净工作台用紫外灯照射 30 min，随后关闭紫外灯通风 20 min 以上，用湿拖把轻轻打扫超净工作台四周，降低尘埃，接着用 75乙醇擦拭台面操作区域。5 外植体采集 取种子萌发形成的幼芽，用解剖刀从芽的萌发的基部切下；取无病害，无腐烂，根系发达的多花黄精根状茎健壮芽头，在芽点以下 2 cm3 cm 处，用解剖刀切下。6 外植体处理 清洗 DB 43/T 25822023 2 放入器皿中用洗衣粉等清洁剂清洗后用自来水流水冲洗1 h2 h。消毒 清洗好的外植体转入超净工作台进行操作，将芽块放入灭菌后的烧杯内，用75%酒精清洗30 s，无菌水冲洗3次5次，5%次氯酸钠溶液浸泡12 min15 min，最后用无菌水冲洗5次6次。7 培养基制备 培养基配方 初代培养基、继代培养基、生根培养基的配方见附录A。培养基配置、灭菌与保存 参照LY/T 1882执行。8 组织培养 培养条件 培养室培养温度 252，光照时间 12 h/d，光照强度1500 lx2000 lx。初代培养 黄精芽块灭菌后在接种盘中切掉芽块下部，只留取0.5 cm1 cm大小的芽点，迅速接种到初代培养基中，培养30 d50 d，分化产生4个6 个丛生芽时，转入继代培养基中进行培养。继代培养 切取其丛生芽转入继代培养基中进行增殖培养，反复接种继代培养4次5次后，转入生根培养基中进行生根培养。继代培养的时间以30 d45 d为宜，增殖率为4倍7倍，继代次数不超过15次。生根培养 将诱导形成的大小相近的继代苗，在超净工作台上切割为单株，接种到生根培养基中培养，培养 25 d30 d，当根系铺满培养瓶底部即可进行炼苗移栽。炼苗 8.5.1 炼苗标准 当试管苗拥有1个以上的健壮根状茎，生长4条5条根时，可进行炼苗处理。8.5.2 驯化 将装试管苗的培养瓶从培养架上取下，转移到2025温室中，自然散射光下炼苗，封口炼苗3 d5 d，开瓶炼苗1 d2 d后即可移栽。9 移栽 DB 43/T 25822023 3 容器 选用穴盘或底部有孔的育苗盘。基质 将珍珠岩:蛭石:泥炭土按照体积比为1:2:3进行配置。方法 取出生根苗，自来水冲洗干净根部培养基，用1000 倍甲基托布津或多菌灵溶液浸泡根部 5 min 8 min，放置于通风阴凉处晾干水分至根系发白变软，再移栽入已准备好的基质中。移栽前将基质浇透水，移栽完成后浇定根水。苗期管理 9.4.1 大棚环境 将移栽的组培苗置于有自动喷雾设备和遮阳网的大棚中。移栽初期温度保持在 1825，湿度 8090，基质含水量 7080，适当遮荫，2 周后转入正常管理。正常管理时自然温度，高温不超过30，光照自然光，空气湿度在 75%85%之间，定期浇水，保持基质湿度为30%50%。9.4.2 追肥 长出2片3片新叶后，每隔15 d20 d用氮磷钾（N20-P20-K20）或（N25-P10-K20）水溶性肥600倍800倍溶液浇苗1次。9.4.3 病害管理 苗期病害以预防为主，综合防治。施用农药应符合GB 4285和GB/T 8321（所有部分）的规定。10 出苗 当组培苗根状茎长3 cm以上，重5 g以上时可以出苗。11 包装、标志、运输 包装 采用干燥、清洁、无异味、的材料，外包装应用纸箱。标志 每箱应贴上标签，注明品种、数量、产地、出苗日期等。运输 运输过程应避免日晒、雨淋，温度控制在5 25，防倒置。DB 43/T 25822023 4 12 档案管理 内容 多花黄精组织培养育苗培育过程中外植体采集、外植体处理、培养基制备、组织培养、炼苗与移栽、出苗、包装等内容，应逐项如实记载，记载表格见附录B。保存 档案采用纸质档案和电子档案2种方式保存，保存时间3年。DB 43/T 25822023 5 A A 附录A （资料性）组织培养配方 表A.1 多花黄精组织培养育苗培养基配方 培养基成分类别 培养基成分 初代培养基 mg/L 继代培养基 mg/L 生根培养基 mg/L 大量元素 NH4N03 1650 1650 825 KNO3 1900 1900 950 MgS04 7H20 370 370 185 KH2PO4 170 170 85 CaCl2 2H2 0 440 440 220 铁盐 FeS03 7H2 0 27.8 27.8 27.8 Na2-EDTA 37.3 37.3 37.3 微量元素 MnS04 4H20 22.3 22.3 22.3 ZnS04 7H20 8.6 8.6 8.6 CuS04 5H20 0.025 0.025 0.025 Na2Mo04 2H20 0.25 0.25 0.25 CoC12 6H20 0.025 0.025 0.025 KI 0.83 0.83 0.83 H3BO3 6.2 6.2 6.2 有机营养成分 烟酸 0.5 0.5 0.5 盐酸硫胺素 0.1 0.1 0.1 盐酸吡哆醇 0.5 0.5 0.5 甘氨酸 2.0 2.0 2.0 肌醇 100 100 100 防褐变剂 抗坏血酸 10 10 10 植物生长调节剂 6-苄氨基嘌呤（6-BA）2.0 4.0/2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）/0.2/吲哚丁酸(IBA)/0.8 萘乙酸（NAA）0.5 0.5 0.5 糖 蔗糖 30 000 30 000 30 000 凝固剂 琼脂 5 000 5 000 5 000 pH值 5.8 5.8 5.8 DB 43/T 25822023 6 B B 附录B （资料性）生产档案 表B.1 多花黄精组织培养育苗生产档案记载 编号：记录人：日期：序号 初代培养接种时期 继代培养接种时期 生根培养接种时期 炼苗时期 移栽时期 追肥记录 农药使用 记录 出苗时间 包装 1 2 3 4 5 .