DB65∕T 4553-2022 新冠病毒病原学实验室生物安全风险监测程序规范(新疆维吾尔自治区).pdf

ICS 11.020CCS C 62B65新疆维吾尔自治区地方标准DB 65/T 45532022新冠病毒病原学实验室生物安全风险监测 程序规范Specification for biosafety risk monitoring procedures of SARS-CoV-2 etiology laboratories2022-10-10 发布2022-12-09 实施新疆维吾尔自治区市场监督管理局 发 布DB 65/T 45532022-XX-1刖 B本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起 草。本文件由新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心提出。本文件由新疆维吾尔自治区卫生健康委员会归口并组织实施。本文件起草单位：新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心。本文件主要起草人：朱芸、刘万里、赵俊、袁江玲、蒋健、王芬、徐艺玫、郭荣、张璇、唐海淑、陈媛、张玲、穆冰、艾依热提买买提、李丽、刘晓峰、魏强、张琼、徐浩宸。本文件实施应用中的疑问，请咨询新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心。对本文件的修改意见及建议，请反馈至新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心（乌鲁木齐市碱泉一街 380号）、新疆维吾尔自治区卫生健康委员会（乌鲁木齐市龙泉街191号）、新疆维吾尔自治区市场监督管 理局（乌鲁木齐市新华南路167号）。新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心 联系电话：[phone]；传真：[phone]；邮编830002 新疆维吾尔自治区卫生健康委员会联系电话：[phone]；传真：[phone]；邮编：830001 新疆维吾尔自治区市场监督管理局 联系电话：[phone]；传真：[phone]；邮编：830004IDB 65/T 45532022新冠病毒病原学实验室生物安全风险监测程序规范1范围本文件确立了新冠病毒病原学实验室生物安全风险监测的术语与定义、实验室生物安全要求、风险 监测内容、实验室监测方法、监测样本的处理、实验结果及相关处置的程序。本文件适用于新冠病毒生物因子操作的实验室主要包括血清学实验室、核酸检测实验室、病毒培养 实验室、动物感染实验室以及医疗废物暂存间、样本暂存间等相关场所进行风险监测的程序规范。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。GB 18466医疗机构水污染物排放标准WS/T 697新冠肺炎疫情期间特定人群个人防护指南WS/T 776农贸（集贸）市场新型冠状病毒环境监测技术规范新型冠状病毒肺炎防控方案（第八版）联防联控机制综发（2021）51号医疗废物管理条例中华人民共和国国务院令第380号医疗卫生机构医疗废物管理办法卫生部令第36号3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1气溶胶aerosols悬浮于气体介质中的粒径为0.001 100岬的固态或液态微小粒子形成的相对稳定的分散体系。3.2生物因子 biological agents微生物和生物活性物质。3.3风险risk危险发生的概率以及遭受损失伤害不利或毁灭的可能性。3.4风险监测 risk monitoring监测风险大小以及确定是否可接受的全过程。3.5实验室 laboratory涉及生物因子操作的实验室。3.6实验室生物安全laboratory biosafety实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不 可接受的损害，符合相关法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。4实验室生物安全要求4.1 参照新型冠状病毒肺炎防控方案（第八版）中实验室活动生物安全要求。1DB 65/T 455320224.2 未经培养的感染性材料的操作应在生物安全二级及以上实验室进行，同时采用不低于生物安全三 级实验室的个人防护。4.3 灭活材料的操作应在生物安全二级及以上实验室进行。4.4 不涉及感染性材料的操作，可在生物安全一级实验室进行。5风险监测内容5.1 物体表面监测在开展实验活动期间对涉及新冠病毒生物因子操作的实验室及相关场所，可能出现气溶胶、溢洒、泄露等环节或是人员频繁接触的物体表面和实验台面及仪器设备内舱采样后进行新冠病毒核酸检测，采 样方法见附录A。5.2 空气监测在开展实验活动期间对涉及新冠病毒生物因子操作的实验室及相关场所，可能出现的环境污染的 空气采样后进行新冠病毒核酸检测,采样方法见附录A。5.3 废液监测在开展实验活动期间对实验室产生的普通污水和感染性废液采样后进行新冠病毒核酸检测，采样方 法见附录A。污水消毒处理效果评价按GB 18466的规定执行。5.4 人员监测在开展实验活动期间对相关工作人员双手、脸部裸露皮肤、咽拭子采样后进行新冠病毒核酸检测以 及健康状况监测，实验室人员健康监测表参见附录B。6实验室检测方法按照新型冠状病毒肺炎防控方案（第八版）的要求采用实时荧光RT-PCR方法对监测样本进行新 冠病毒核酸检测。7监测样本的处理7.1所有监测样本当天采集后需要进行检测的，应尽快进行。4 保存不超过24 h,超过24 h不应 进行核酸检测的样本于-70 保存（如无-70 保存条件，则于-20 C冰箱暂存）。应设立专库或专柜 单独保存标本，避免反复冻融。实验室环境监测标本采集后室温25 放置不宜超过4 h。7.2所有监测样本进行高压灭菌后，按照医疗废物处置。医疗废物的处置应按照医疗废物管理条例 和医疗卫生机构医疗废物管理办法的要求，规范使用双层黄色医疗废物收集袋封装后按照常规流程 进行处置。8实验结果及相关处置8.1 灭活材料检测的实验室及相关场所8.1.1 室内质控正常，阴、阳性对照成立的情况下，监测样本核酸检测结果全部为阴性时，提示人员 操作规范，监测样本所在场所核酸污染的可能性低，生物安全风险低。8.1.2 室内质控正常，阴、阳性对照成立的情况下，监测样本核酸检测结果为阳性时，对于疑似阳性 结果需用另一种检测体系进行复核，复核结果为阴性，提示检测实验室存在阳性对照品的核酸片段污染，应对实验室核酸污染原因进行排查；复核结果仍为阳性时，可判断监测样本结果为阳性，提示监测样本 所在场所存在污染，应对该场所进行污染来源的排查。2DB 65/T 455320228.2 病毒培养、动物感染实验、未经培养的感染材料操作的实验室及相关场所8.2.1室内质控正常，阴、阳性对照成立的情况下，监测样本核酸检测结果全部为阴性时，提示人员 操作规范，监测样本所在场所污染的可能性低，生物安全风险低。8.2.2室内质控正常，阴、阳性对照成立的情况下，监测样本核酸检测为阳性时，对于疑似阳性结果 需用另一种检测体系进行复核，复核结果为阴性，提示检测实验室存在阳性对照品的核酸片段污染，应 对实验室核酸污染原因进行排查；复核结果仍为阳性时,可判断监测样本结果为阳性，提示该阶段监测 样本所在地实验活动风险高，可能有病原泄露的风险且对环境和人有危害，应停止实验活动，采取的措 施为关停操作该项实验活动的实验室，责令实验室针对风险点进行系统梳理和分析整改，整改后再次检 测进行风险评估，直至风险较小、风险可控时才能再次开展新冠实验活动，监测流程图见附录C。8.2.3在对实验室关停进行风险排查时，应先对实验室设计进行风险排查，即每处风险点采集时应设 置对照，通过实验设计排查到风险点。8.2.4对新冠核酸监测结果为阳性的实验室及相关场所,其负责人应组织实验室检测人员及相关人员，开展风险排查和风险点培训教育。学习生物安全防护、院感防控、检测技术等相关内容，尤其是既往实 验室类似典型案例。对照实验室存在问题，梳理和完善检测流程、生物安全防护、感染防控、废弃物处 置、交接班、内务管理和监督等相关制度，管理部门跟踪和落实整改情况并向机构分管生物安全领导汇 报。3DB 65/T 45532022附录A（规范性）采样方法A.1采样人员防护与实验室人员健康监测A.1.1监测样本采集时的个人防护应符合WS/T 697的要求。A.1.2采样结束后，按照生物安全要求脱去防护服等个人防护装备，废弃物高压灭菌后按照医疗废物 处置。A.1.3实验室应建立实验室人员健康档案，保留本底血样。定期体检，对实验室人员体温和疾病情况、考勤等情况进行记录。实验室工作人员应进行每周不少于2次的咽拭子样本采集和检测，可根据实际情 况增加频次。A.2监测时间A.2.1在新冠实验活动中发生溢洒、泄露等意外事件处理过程前、中、后各阶段。A.2.2实验室未被检测出阳性样本时仅需在开展实验活动期间对实验室核心间物表及环境进行新冠病 毒核酸监测。A.2.3当实验室出现阳性样本时，在实验活动期间应对实验室物表、空气、废水、及人员开展新冠病 毒核酸监测。A.2.4实验活动开始前对进入实验室工作人员进行新冠病毒核酸健康监测。A.2.5当新冠实验室出现包括化学、物理、辐射、电气、水灾、火灾、自然灾害等，即有病毒外溢的 风险时进行新冠病毒核酸监测。A.3采样方法A.3.1物体表面采样A.3.1.1应符合WS/T 776的要求，采样拭子充分浸润病毒保存液后在表面重复涂抹，将拭子放回采样 管浸润，取出后再次涂抹采样，重复3次以上。对表面较大的物体进行多点分布式采样。A.3.1.2被采样面积100 cm?,采全部表面；被采样面积2100 cm2,用规格板采100 cm2oA.3.1.3规则物体表面。采样涂布法，将5 cmX5 cm灭菌规格板放在物体表面,将棉拭子沾取病毒保 存液在规格板内横竖往返各涂抹5次,并随之转动棉拭子,连续采4个规格板面积（100 cm9。A.3.1.4不规则小型物体表面。如门把手等,采用棉拭子直接涂抹采样。剪去棉拭子手接触部分，放入 病毒保存液中。A.3.2空气采样A.3.2.1将盛有无RNA水的平皿开盖置于实验室等有可能产生气溶胶的物体表面静置过夜，次日进行 检测。A.3.2.2空气采样布点要求：室内面积不足50/的设置3个采样点，大于50 inz的设置5个采样点；采样点按均匀布点原则布置,室内3个采样点的设置在室内对角线四等分的3个等分点上，5 个采样点的按梅花布点；一一采样点距离地面高度1.2 m1.5 m,距离墙壁不小于1 m；采样点应避开通风口、通风道等。A.3.2.3空气采样环境条件。采样时关闭门窗15 min30 min,记录室内人员数量、温湿度与天气状 况等。A.3.3废液采样应符合WS/T 776的要求，采集污水的拭子样本时，用拭子浸入吸附污水，将拭子放回采样管浸润，取出后再次浸入污水，重复3次以上，对每个污水采样位置应进行多点分布式采样。采集污水的水体样 4DB 65/T 45532022本时，用聚乙烯塑料瓶收集1 L1.5 L体积的污水；大于1.5 L体积的污水采集，可以使用聚乙烯塑料 桶或现场水样专用富集设备。污水水体样本采集前，先充分混合均匀后取样；如果污水难以充分混合,出现分层现象时，可按各层水量的比例分层取样。A.3.4实验室人员双手、脸部裸露皮肤、咽拭子采样A.3.4.1双手采样。被检人五指并拢，将浸有病毒保存液的拭子在双手指曲面从指根到指端往返均匀 涂擦各2次（一只手涂擦约30 cm，并随之转动拭子，剪去手接触部位，将棉拭子装入病毒采样管送检。A.3.4.2脸部裸露皮肤采样。将浸有病毒保存液的拭子在脸部裸露部位往返均匀涂擦2次，并随之转 动棉拭子,剪去手接触部位,将拭子装人病毒采样管。A.3.4.3咽拭子采样。用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头 浸入病毒保存液中,尾部弃去,旋紧管盖,并做好标记。A.3.5过程注意事项应避免人为因素造成的样本污染。采样人员应保持手部清洁，拭子样本采样过程中，采样拭子只能 接触当前采集的物体，避免触碰到其他物体。手指及手指接触的拭子部分不应触碰采集管管口及内壁。采样过程中随时对采样人员的手、装病毒采样管的自封袋和转运桶进行消毒。A.3.6记录样本信息应包括样本采集的时间、地点、数量、实验室名称、设备编号、采样类型、样本编号以及 采样人员等信息确保可追溯。5DB 65/T 45532022附录B（资料性）实验室人员健康监测表实验室人员健康监测见表B.1。表B.1实验室人员健康监测表姓名：实验活动内容：序号监测内容一、进入实验室前1体温：2是否有以下症状？口是否具体症状：_ _发热寒战咳痰咳嗽鼻塞流涕咽痛头痛乏力肌肉酸痛关节酸痛。气促呼 吸困难胸闷结膜充血恶心呕吐腹泻腹痛开放性损伤其他3是否接触非灭活材料？口是口否4是否正在使用免疫抑制剂或免疫耐受？是口否5是否在妊娠期？口是口否6是否在14天内有高中风险地区旅居史？口是口否7是否在14天内与高中风险地区旅居史的人员接触？是 口否8最近一次新冠核酸检测日期：_.、实验结束后1实验操作过程中是否落实标准防护？口是口否2实验操作过程中，是否有意外事故发生？是口否3实验区是否进行清场和消毒？口是口否4实验过程中是否出现结果异常？口是 口否5是否按照操作规程正确脱防护服，并互相进行消毒处理？口是 口否日期；6附录c（规范性）新冠病毒病原学实验室生物安全风险监测流程图C.1规定了新冠病毒病原学实验室生物安全风险监测流程新冠病毒病原学实验室生物安全风险监测流程1物表设备设施室内空气实验台面室内质控正常、阴阳对照 成立，监测样本核酸检测 结果阴性（一），监测样 本所在场所核酸污染可能 性低、生物安全风险低。灭活材料检测的实验室及相关场所室内质控正常、阴阳对 照成立监测样本核酸检测结果阳性（+）另一种检测体系复核监测样本核酸检测结 果阴性（一），提示检 测实验室存在阳性对 照品的核酸片段污染应排查原因监测样本核酸检测结果 阳性（+）,提示监测样 本所在地存在污染，应 排查污染来源。人员废液健康监测感染性液普通污水手、皮肤、咽拭子病毒培养、动物感染实验、未经培养感染材料操作的实验室及相关场所室内质控正常、阴阳对照 成立，监测样本核酸检测 结果阴性（-）,监测样 本所在场所污染可能性 低、生物安全风险低。室内质控正常、阴阳对照 成立，监测样本核酸检测 结果阳性（+）另一种检测体系复核监测样本核酸检测结 果阴性（一），提示检 测实验室存在阳性对 照品的核酸片段污染 应排查原因。监测样本核酸检测结 果阳性（+）可能有病 原泄露风险，关停操 作该项实验活动的实 验室。DB 65/T图C.1新冠病毒病原学实验室生物安全风险监测流程图7DB 65/T 455320221 4 5 6 7 9参考文献GB 19489实验室生物安全通用要求GB/T 18204.3公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物WS 233病原微生物实验室生物安全通用准则RB/T 040病原微生物实验室生物安全风险管理指南DB32/T 3762.7DB32/T 3762.8DB32/T 3762.9 消毒技术规范新型冠状病毒检测技术规范第7部分：空气样本检测与评估新型冠状病毒检测技术规范第8部分：物体表面检测与评估新型冠状病毒检测技术规范第9部分：医务人员职业暴露检测与评估卫生部关于印发医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行第二版）的通知（联防联控机制医疗发（2020）313号）8