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DB37∕T 4030—2020 苹果品种鉴定方法　微卫星方法(山东省).pdf

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DB37∕T 4030—2020 苹果品种鉴定方法　微卫星方法(山东省).pdf

1、TCS 07.080 B 30/39 DB37 山东省山巳ET且，万标准DB37/T 4030-2020 苹果品种鉴定方法微卫星方法Molecule identification method for apple strain 2020-07-09发布2020-08-09实施山东省市场监督管理局发布目IJ1=1 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由青岛海关提出、归口并组织实施。DB37/T 4030-2020 本标准起草单位:青岛海关技术中心、11向沂大学、中国农业科学院果树研究所、中国科学院海洋研究所。本标准主要起草人:高宏伟、刘云国、陈新疆、王强、王鸿霞、陈盛盛、孙雯

2、娴、孙敏、魏晓棠。本标准系首次发布。I DB37/T 4030-2020 苹果品种鉴定方法微卫星方法1 范围本标准规定了苹果品种的分子鉴定方法。本标准适用于由苹果的种苗、石占木、枝叶、果实等组织鉴定苹果品种。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 19557.1 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南总则NY/T 2424-2013 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南苹果3 术语和缩回各语3.1 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.

3、1 品种cultivar 在一定的生态和经济条件下，经自然或人工选择形成的功、植物群体。在植物学里，品种是在植物界的22个分类等级之下，具有相对的遗传稳定性和生物学及经济学上的一致性，并可以用普通的繁殖方法保持其恒久性。3.1.2 PCR多聚酶链式反应poly盯阳asechain reaction 以拟扩增的DNA分子为模板，以末端互补的寡核昔酸片段为号|物(primer)，在耐热DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA分子合成。重复这一过程，即可使目的DNA片段得以大量扩增。是常规分子生物学技术之一，用于扩增特定的DNA片段。3.1.3 基因座位(或位点)g

4、enetic locus 基因在染色体上占有的特定位置叫基因位点。3.1.4 微卫星序列microsate川ite又称为短串联重复序列(shorttandem repeats,STRs)或简单重复序列(simplesequence repeats),是均匀分布于真核生物基因组中的简单重复序列，由26个核昔酸的串联重复片段构成，由于重复单位DB37/T 4030-2020 的重复次数在个体问呈高度变异性并且数量丰富，因此微卫星标记的应用非常广泛。微卫星位点通常通过PCR扩增，扩增产物通过电泳分析井根据大小分离等位基因进行检测。3.1.5 等位基因a Ilele 指位于一对同源染色体相同位置上控制

5、同一性状不同形态的基因。3.2 缩略语下列缩回各i吾适用于本文件。bp:碱基对Cbasepair)CTAB:十六炕基三甲基澳化镇CHexadecyltrimethyl ammonium Bromide)DNA:脱氧核糖核酸Cdeoxyribonuleicacid)ED曰:乙二肢四乙酸CEthyleneDia mine Tetraacetic Acid)Tris:三琵甲基氨基甲:皖C2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1，3-propanediol)4 原理不同苹果品种问SSR基因座位的等位基因存在序列长度多态性，即苹果品种问微卫星序列CSSR)依苹果品种不同，等立变异的数量可能

6、不同。针对特定SSR两侧序列高度保守的核酸序列，设计序列特异性引物，利用PCR技术对重复序列进行扩增，并对PCR扩增引物进行硝酸银染色或者荧光染料标记定量区分片段大小Cbp)，根据该等位变异的扩增片段大小鉴定苹果品种，在苹果品种鉴定的数据库中进行比对，从而鉴定苹果品种。5 设备和材料5.1 设备5.1.1 天平:感量0.01go 5.1.2 均质器。5.1.3 水浴锅(0c 100 c，感量0.1C)。5.1.4 振荡器。5.1.5 研钵或其他粉碎装置。5.1.6 高速台式冷冻离心机。5.1.7 梯度PCR仪。5.1.8 微量可调移液器及配套吸头(.501.1 L、100L、200L)。5.1

7、.9 微量高，中管0.5mL和2mL)。5.1.10 毛细管电泳仪或者DNA分析仪。5.2.式开IJ5.2.1 CTAB提取缓冲液55mmol/L CTAB,1 400 mmol/L NaCl,20 mmol/L EDTA,100 mmol/L Tris,用10%盐酸调pH至8.0，121 c，高压灭菌20min，备用。5.2.2 CTAB沉淀液:称取1.00 g CTAB,0.50 g NaCl，用适量水溶解后，调节pH二8.0，定容至200此，高压灭菌。2 DB37/T 4030-2020 5.2.3 RANase RNA酶。5.2.4 TE缓冲液(pH8.0)。5.2.5 NaC11密;

8、夜，1.2 mollL。5.2.6 三氯甲院。5.2.7 异丙醇。5.2.8 70%乙醇。5.2.9 引物:根据附录A中表A.1的序列合成荧光引物，加超纯水配制成100pmollL储存液，用于PCR检测的工作液浓度为10pmollL。荧光基团可以为FAM、HEX中的一种。5.2.10 毛细管电泳专用分子量内标。5.2.11 去高于甲酌肢。5.2.12 除特别说明外，所用试剂均为分析纯。水为无离子水。5.2.13 蛋白酶K。5.2.14 苯酣。6 制中羊对于种苗、枝叶、果实样品，每个样品取两个平行样，各300mg。对于时木样品取韧皮部部分，每个样品取两个平行样，各300mg。7 检测方法7.1

9、样品DNA的提取7.1.1 称取300mg经的样品，液氮研磨后置于2mL离心管中，加入6001.1 L CTAB缓冲液和40L蛋白酶K，振荡泪匀，65 C温浴30mi口90min，期间每隔10min轻柔颠倒泪匀。7.1.2 2 000 g离心5min，取上洁于另一干净的2mL离心管中，加入等体积的盼、三氯甲:民和异戊醇的混合液(25:24:1)，震荡混匀。7.1.3 12 000 g离心10mi日，取上请至干净的2mL离心管中，加入等体积异丙醇，颠倒泪匀。7.1.4 12 000 g离心10min，弃去上洁液，用预热至65C的TE缓冲液溶解DNAo7.1.5 加入51.1 L RNA酶溶液，3

10、7 C 30 mi日。7.1.6 加入2001.IL三氯甲:皖:异戊醇(24:1)，强烈振荡。7.1.7 12 000 g离心10mi日，取上洁至干净的2mL离心管中，加入等体积异丙醇，颠倒泪匀。7.1.8 12 000 g离心10min，弃去上洁液，用4C预冷的70%乙醇500L，涡旋清洗沉淀。7.1.9 12 000 g离心10min，弃去上清液，倒置晾干后加100LTE缓冲液溶解沉淀，-20 C保存备用。也可以根据实际情况使用其他经过验证的试剂盒。7.2 DNA浓度与纯度测定采用紫外分光光度计法测定DNA浓度和纯度。紫外分光光度计检测的最佳范围是2pg/mL50 pg/mL.OD值应该在

11、O.051的区间内。将DNA液做适当的稀释，放入紫外分光光度计的批色皿中，于260m处测定其吸收峰，10D2bOlllll二50g/mL双链DNA或38，g/mL单链DNAoPCR级DNA溶液的ODLbOlllnl ODLO um tt 直为1.72.0。7.3 PCR定性检测3 DB37/T 4030-2020 7.3.1 PCR反应引物序列表针对种常见苹果品种鉴定用的PCR扩增引物，见附录A中表A.1o15对号|物分别进行PCR的扩增。7.3.2 PCR反应参数PCR扩增用号|物序列信息见附录A中表A.1o7.3.3 PCR反应体系PCR反应体系见附录A中表A.207.3.4 质控措施检测

12、过程中分别设阳性对照、阴性对照和空白对照。用己知品种的苹果做阳性对照，用己知不含苹果成分的模板作阴性对照，用等体积的水代替模板DNA作空白对照。7.4 毛细管电泳荧光检测7.4.1 样品上机按照毛细管电泳仪器使用要求更换缓冲液、j瞿胶和在程序中输入样品信息。将FAM荧光标记的PCR产物用超纯水稀释30倍，将HEX荧光标记的PCR产物用超纯水稀释15倍，将TAMRA荧光标i己的PCR产物用超纯水稀释10倍，将ROX荧光标记的PCR产物用超纯水稀释5音，混合均匀。从稀释液中取1L上样到毛细管电泳仪专用分析板的孔中。同时加入0.1L分子量内标和8.9L去高于甲自克服。将样品在PCR仪上95 C变性5

13、mi口，迅速取出置于冰上，冷却10min。离心把管内液体甩至管底后上毛细管电泳的仪器。启动运行程序，毛细管电泳仪自动收集点用数据。7.4.2 等位数据采集由毛细管电泳的分析软件，通过与标准分子量比对，读出每个扩增位点的样品等位基因扩增条带数目和条带大小的数据。若采集的等位基因扩增的数据为2个扩增条带，则该样品为二倍体苹果。若采集的等位基因扩增的数据为3个扩增条带，则该样品为三倍体苹果。若有4个扩增条带，则该样品为四倍体苹果。二倍体纯合位点的等位基因条带的大小数据记录为X/X，杂合位点等位变异大小数据记录为X/Y。其中X、Y分别为该位点上两个不同的等位变异，小片段数据在前，大片段数据在后，无效等

14、位变异的大小记录为0/0。三倍体和四倍条带大小记录方式类推。7.5 结果判定及表述7.5.1 将获得样品的等位基因变异数据与附录A.3数据库中品种比较:4 a)若为二倍体，品种相似度(S)按照下面的公式计算:2N;s=一一.TX 100.(1)Ni+Nj 式中:5一一相似度，单位为百分率(%);Nij 品种i和j之间共有的等位基因数目:此一一品种i中出现的等位基因数目:八;品种i中出现的的等位基因数目。b)若为二倍体，品种相似度(S)按照下面的公式计算:DB37/T 4030-2020 3N;s=一一TX 100.(2)Ni+Nj 式中:5 相似度，单位为百分率(%);Nij一一品种1和J之间

15、共有的等位基因数目;肌品种i中出现的等位基因数目;八5一一品种1中出现的的等位基因数目。推荐使用本标准附录B配用的苹果品种鉴定系统软件，该软件预装了附录A.3的标准样品数据库，并且按照以上公示设计计算程序，输入待测样品的微卫星数据，运行程序可以直接得到品种相似度最高的相似品种信息。该软件需要在Java运行条件下安装使用。7.5.2 结果要IJ定及表述判定方法如下:a)品种间相似度90%，判定为不同品种:b)品种间相似度90%S100%时，判定为近似品种:c)品种间相似度=100%，判定为疑似品种。对于b)和c)的情况，按照GB!T19557.1和NY!T2424-2013的规定进行田间鉴定。5

16、 DB37/T 4030-2020 附录A(规范性附录)PCR扩增用引物序列信息及参考数据库PCR扩增用号|物序列信息见表A.1o表A.1 PCR扩增用引物序列信息序名称引物序列町，-3)5端标记荧光基团扩增条件扩增大小文献来源号方向bp l CH01d08 F ctccgccgctataacacttc 238-290 R actctggagggtatgtcaaag 2 CH01e01 F ggttggagggaccaatcatt 106-120 R cccactctctgtgccagatc l、GeraldS.Dangl 3 CH02b03b F ataaggatacaaaaaccctaca

17、cag Judy Yang 77-109 R gacatgtttggttgaaaacttg Deborah A.Golino 4 CH02b07 F ccagacaagtcatcacaacactc Thomas Gradziel.A 180-202 R atgtcgatgtcgctctgttg practical method 5 CH02b10 F caaggaaatcatcaaagattcaag for almond cultivar 121-1,59 R Caagtggcttcggatagttg identificat ion 6 CH02b12 F ggcaggctttacgattat

18、gc and parental 101-143 R cccactaaaagttcacaggc 940C 2 mi口30analysis using 7 CH02d11 F agcgtccagagcaacagc simple sequence sec;118-148 R aacaaaagcagatccgttgc repeat markers 940C 30 sec,8 CH02f06 F ccctcttcagacctgcatatg 135-1,58 520C 30 sec,Euphytica(2009)R actgtttccaagcgatcagg 168:41-48 720C 30 sec,9

19、CH02g09 F tcagacagaagaggaactgtatttg 98-138 2、L40 cycle;R Caaacaaaccagtaccgcaa Gianfranceschi,N.720C,10 mino 10 CH02h11a F cgtggcatgcctatcatttg 104-132 Seglias,R archini,R ctgtttgaaccgcttcctc M.Komjanc,C 11 CH03d07 F caaatcaatgcaaaactgtca 186-226 Gessler.Simple R ggcttctggccatgatttta seque口cerepeats

20、12 CH04d02 F cgtacgctgcttcttttgct 118-146 for the genetic R ctatccaccacccgtcaact an日lysisof apple.13 CH04d10 F gagggatctgtagctccgac 138-204 Theor Appl Gen巳tR tggtgagtatctgctcgctg(1998)14 CH05c07 F 111-149 96:1069-1076 tgatgcattagggcttgtactt R gggatgcattgctaaataggat 15 CH05g03 F gctttgaatggatacaggaac

21、c 135-192 R cctgtctcatggcattgttg 6 DB37/T 4030-2020 PCR反应体系见表A.20表A.2 PCR反应体系试剂名称工作液浓度25L反应体系加样体积/LdNTP 2.5 mmol/L 2L PCR缓冲液10X 2.5L Taq DNA聚合酶5 U/L O.3L 上游引物10 pmol/L O.3 下游引物10 pmol/L O.3 DNA模板100:1:50 ng 2 超纯水17.6 7 DB37/T 4030-2020 部分苹果品种SSR基因型数据见表A.30表A.3 部分丰果品种SSR基因型数据品种果实或者SSR位点SSR位点SSR位点SSR位

22、点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点茎枝CH02b 12 CHO 1eO 1 CH02b03b CH02b 10 CH02d11 CH02f06 CHO 1d08 CH02b07 CH02日09CH02h11a CH03d07 CH04d02 CH05c07 CH05g03 CH04d10 Akagi Akane Akibae Fruiting 128/144 114/116 79/95 Frui t ing 130/130 114/122 95/95 Fruiting 130/140 112/116 79/95 Ak

23、ita Gold Fruiting 144/144 112/116 79/79 129/137119/121148/162275/275110/132111/120124/134 185/199 138/152 153/153 166/170 168/191 129/141 121/133 148/162 244/297 130/132 111/138 107/124 183/203 126/152 117/153 166/174 168/209 125/129 119/133 148/162 244/244 110/112 107/120 132/134 185/199 126/152 11

24、7/153 166/170 154/191 125/135 119/133 142/148 244/254 112/132 107/120 132/134 203/223 126/126 117/143 166/170 164/191 Aodai3 Rootstock 146/148 110/122 91/101 118/149 127/133 144/162 244/260 110/112 138/152 107/132 160/223 126/144 117/127 140/166 166/176 Baskatong Others 134/134 126/138 91/10 1 121/1

25、39 123/125 152/152 242/299 104/110 103/138 140/146 181/181 126/134 143/151 162/166 150/152 Braeburn Fruiting 144/146 112/114 99/99 123/161 123/133 154/154 258/258 110/110 111/136 132/136 203/223 126/126 129/153 166/166 164/209 Chinatsu Frui ting 130/134 114/114 95/99 127/141 133/133 144/148 254/297

26、110/132 111/120 124/132 203/203 126/138 117/117 140/166 166/168 Cox日Orange Pippin Fruiting 132/144 110/114 75/97 Cripp s Fruiting 144/146 112/116 79/97 Pink Discovery Frui ting 130/142 114/114 95/97 123/135121/133154/158244/258110/12497/111 107/132215/215126/126129/129168/199154/209 125/129 119/149

27、148/148 254/258 118/124 120/120 132/132 185/223 126/126 145/153 170/174 164/191 133/133 121/133 148/162 244/297 118/130 107/111 128/132 183/203 126/152 117/143 140/166 164/164 Fiesta Fruiting 130/132110/11475/95 123/129121/133154/162258/275112/12497/111 107/132203/215124/126129/145168/189154/166 Fuj

28、 i Frui ting 144/144 112/116 79/108 135/137 133/133 142/162 244/258 112/112 107/111 132/132 223/223 124/126 117/139 140/166 164/209 G.65 Rootstock 113/142 112/148 75/91 125/149 123/149 150/154 258/258 104/112 111/138 112/124/183/223 138/138 133/153 140/176 164/164 132 Gala Fruiting 132/144 114/116 7

29、5/79 129/135 119/121 142/162 244/275 110/118 111/120 134/136 185/215 126/138 117/143 170/199 154/191 Geneva Frui t ing 134/140 120/124 95/101 133/139 121/125 150/162 242/244 108/118 10 1/138 107/140 181/185 126/134 143/153 140/166 150/168 8 DB37/T 4030-2020 表A.3 部分苹果品种SSR基因型数据(续)品种果实或者SSR位点SSR位点SSR位

30、点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR立点茎枝CH02b12 CHOleOl CH02b03b CH02bl0 CH02dll CH02f06 CHOld08 CH02b07 CH02g09 CH02hlla CH03d07 CH04d02 CH05c07 CH05g03 CH04dl0 Golden Fruiting 144/144 112/116 79/99 125/129 119/133 148/162 254/275 110/118 120/138 132/134 185/203 126/138 143/1

31、53 140/170 191/191 Delicious Granny Frui ting 144/150 114/116 81/103 125/129 133/149 150/162 258/258 110/114 120/138 132/132 189/223 124/126 143/145 174/189 166/209 Smith Gunmameiget Fruiting 128/144 112/116 79/79 135/137 119/133 142/148 258/275 112/132 111/120 132/134 185/223 124/152 117/153 140/17

32、0 164/191 su Hacnine Haruka Hatsuaki Frui ting 144/144/112/116 79/108 129/135/133/133/142/162 244/258/112/132 107/111 126/132 185/223 124/126/117/139/140/166/164/191/144 Fruiting 144/144 Fruiting 128/144 112/116 79/99 112/116 79/97 137 129/135 129/129 133 119/133 133/133 275 142/148 254/258 154/162

33、275/275 110/112 110/112 111/120 120/136 134/136 203/203 107/134 185/199 138 126/138 126/126 153 117/143 143/153 197 166/170 170/197 209 191/209 191/209 Himekami Frui ting 130/144 112/114 79/95 135/137 121/133 162/162 244/275 112/112 107/111 107/132 203/223 124/126 139/153 166/197 164/168 Hokuto Frui

34、 ting 144/144/112/114/79/108 135/137/133/149 142/162 244/258 110/112 107/111/132/132/185/223 124/126/117/139/140/166/164/166/144 116 132 209 Honey Qu日enFrui t ing 130/146 114/116 91/108 161 125/161 121/133 148/162 258/275 112/112 120 107/120 107/134 203/203 152 126/126 153 153/153 170 166/197 191/20

35、9 Idar巳dIndo Iwakami Fruiting 130/144 114/116 95/97 129/161 121/133 154/162 275/297 112/112 111/136 107/126 199/203 124/152 145/145 166/189 166/209 Fruiting 140/144 114/116 79/97 137/147 133/149 142/148 258/258 110/118 111/167 132/132 215/223 124/152 117/153 166/166 154/209 Fruiting 128/144 114/116

36、97/108 129/135 121/133 142/154 244/244 112/112 107/136 107/132 203/223 124/126 117/153 140/166 164/168 Ml Rootstock 132/146 110/118 101/106 118/149 133/143 144/154 244/250 110/110 99/152 128/132 213/223 126/144 117/127 164/166 152/166 M2 Rootstock 144/148 110/118 91/101 118/149 127/131 144/154 250/2

37、93 110/110 136/138 128/130 160/223 126/126 131/153 140/166 152/164 M5 Rootstock 146/148 110/118 101/106 118/149 131/143 144/154 250/293 110/110 99/152 107/132 160/223 138/144 127/131 140/166 166/176 M7 Rootstock 146/148 110/118 91/101 137/149 131/143 152/154 244/250 110/110 99/136 128/132 213/223 13

38、8/144 131/153 140/174 152/166 M8 Rootstock 144/148 110/122 101/106 118/129 127/131 144/162 260/293 110/110 99/152 128/132 160/223 126/144 117/127 164/166 152/166 9 DB37/T 4030-2020 表A.3 部分苹果品种SSR基因型数据(续)品种果实或者SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点茎枝CH02b12 CHOleO

39、l CH02b03b CH02bl0 CH02dll CH02f06 CHOld08 CH02b07 CH02g09 CH02hlla CH03d07 CH04d02 CH05c07 CH05g03 CH04dl0 J onagold Fruiting 128/144 112/114/79/95/99 125/129/119/133 148/154/244/254/110/112/111/120/124/132/185/199/126/138 143/145/140/170/191/209 Jonathan Kanki Kins日1Kiou Kitakarni Kitaro Kizashi F

40、ruiting 128/130 Fruiting 140/144 Fruiting 144/146 Frui t ing 144/144 Frui t ing 144/144 Frui t ing 144/144 116 112/114 95/97 112/116 79/79 114/116 79/108 116/116 79/97 112/116 93/108 112/116 79/79 Fruiting 132/132 114/116 75/79 137 129/137 125/129 125/135 125/129 129/149 129/135 121/133 133/133 119/

41、133 133/149 133/133 133/133 162 275 154/162 244/275 142/162 244/244 148/154 254/258 148/162 244/254 150/154 275/297 142/162 244/275 118 112/132 110/112 110/112 110/112 112/114 112/112 138 111/136 107/120 111/120 120/120 107/120 107/120 134 107/124 134/134 132/134 132/132 107/136 107/132 203 199/203

42、185/223 185/203 185/223 185/223 185/223 126/152 152/152 126/138 138/152 126/138 126/126 153 145/153 117/153 153/153 153/153 143/153 117/143 197 166/197 166/170 166/170 140/166 170/174 140/170 168/209 164/168 191/209 154/154 168/191 191/209 127/135 119/133 142/154 244/244 110/118 120/120 132/134 203/

43、215 124/138 117/131 140/199 166/191 Kotaro Fruiting 144/144 112/116 97/108 129/137 133/133 154/162 244/275 112/112 111/120 132/134 199/223 124/126 139/153 166/170 164/191 M.26 Rootstock 130/144 110/114 99/101 129/149 133/149 150/154 244/258 110/132 136/152 107/132 189/223 126/138 127/143 164/174 164

44、/168 M.27 Rootstock 113/146 112/116 91/97 135/149 133/149 154/154 258/293 112/124 111/136 128/132 213/223 126/138 143/153 140/140 164/166 M.9 Rootstock 144/146 110/116 91/101 129/149 131/133 154/162 244/293 110/112 136/152 107/128 223/223 126/138 127/153 140/164 164/166 Malus Others 134/134 120/126

45、101/101 139/139 123/125 152/162 242/299 110/118 134/138 132/140 181/203 126/134 143/151 160/166 150/152 niedzwetzky ana McIntosh Fruiting 144/146 112/114 93/99 Megumi Fruit ing 130/144 114/114 91/97 Miki-life Fruiting 130/144 112/116 79/95 133/149 121/133 150/162 258/275 114/132 107/138 126/132 187/

46、223 126/126 143/145 164/166 154/164 129/161 121/121 154/162 275/275 112/112 107/111 107/126 203/223 126/126 145/153 166/197 166/209 125/129119/133148/154244/244110/112111/120132/134 185/185152/152117/153140/170164/168 MM.106 Rootstock 132/144 112/116 97/97 123/137 123/133 150/162 277/293 110/110 136

47、/138 132/132 203/223 124/126 117/145 140/189 154/225 Mo84日Rootstock 132/148 118/122 91/106 118/137 127/143 144/152 250/260 110/110 99/140 130/132 160/211 126/144 117/131 166/172 152/180 10 DB37/T 4030-2020 表A.3 部分苹果品种SSR基因型数据(续)品种果实或者SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点SSR位点S

48、SR位点SSR位点茎枝CH02b12 CHOleOl CH02b03b CH02bl0 CH02dll CH02f06 CHOld08 CH02b07 CH02g09 CH02hlla CH03d07 CH04d02 CH05c07 CH05g03 CH04dl0 Mogamiakani Others 144/144 116/124 95/101 135/139 135/149 156/162 258/258 112/130 101/138 109/126 183/223 124/124 139/143 164/189 191/191 ku Morinokagay Fruiting 132/1

49、44 114/116 79/79 aki Morioka#46 Fruiting 144/144 114/116 75/79 Morioka#47 Fruiting 130/132 116/122 75/95 Morioka#48 Frui t ing 134/144 Morioka Rootstock 132/148 Maruba 112/116 75/108 118/122 91/106 129/135119/121142/154244/275112/118111/120107/136 185/215126/126117/153166/170154/168 129/137121/13314

50、2/154244/244110/118111/120132/134 215/223126/138143/153166/170154/154 135/141 121/121 142/148 244/275 110/130 111/138 124/136 183/185 126/138 117/117 170/174 168/191 129/147 118/137 133/133 127/139 144/154 254/297 144/152 250/260 114/114 107/120 107/132 203/223 110/110 99/142 130/132 160/219 126/138

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