JJG 964-2001 毛细管电泳仪检定规程.pdf

中华人民共和国国家计量检定规程J J G 9 6 4-2 0 0 1毛 细 管 电 泳 仪C a p i l l a r y E l e c t r o p h o r e s i s I n s t r u m e n t2 0 0 1 一0 7 一0 6 发布2 0 0 1 一1 0 一0 1 实施国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局发布J J G 9 6 4-2 0 01毛细管电泳仪检定规程 V e r i f i c a t i o n R e g u l a t i o n o fC a p i l l a r y E l e c t r o p h o r e s i s I n s t r u me n tJ J G 9 6 4-2 0 0 1 9峙尸.令.心-.心.心.勺.今.卜 本规程经国家质量监督检验检疫总局于2 0 0 1 年 0 7 月0 6日 批准，并自2 0 0 1 年 1 0月 0 1日起施行。归 口 单 位:全国物理化学计量技术委员会主要起草单位:河北省计量测试研究所参加起草单位:福建省计量科学技术研究所 保定高新区天惠分离科学研究所 北京市新技术应用研究所本规程委托全国物理化学计量技术委员会负责解释J J G 9 6 4-2 0 0 1本规程主要起草人:刘增明 方静 郑吉鹏 参加起草人:罗峰 丁天惠 王 雅芬(河北省计量测试研究所)(河北省计量测试研究所)(河北省计量测试研究所)(福建省计量科学技术研究所)(保定高新区天惠分离科学研究所)(北京市新技术应用研究所)J J G 9 6 4-2 0 0 1目录1 范围 (1)2 概述 。(1)3 计量性能要求 (1)4 通用技术要求 一(2)5 计量器具控制 (2)附录 A 标准溶液的配制 。(6)附录 B 检定证书(背面)格式 (7)附录C 检定记录格式 (8).I J G 9 6 4-2 0 0 1毛细管电泳仪检定规程范 围本规程适用于带有紫外检测器 的毛细管电泳仪的首次检定、后续检定和使用中检2概述 毛细管电泳仪(以下简称仪器)是根据在电解质溶液中，带电粒子在高压电场作用下，以不同的速度定向迁移的现象来达到组分分离的 目的。各组分分离后通过检测器进行检测，并根据各组分的迁移时间和响应值进行定性、定量分析。电泳的支持物是弹性石英毛细管。仪器主要由高压电源、进样器、毛细管柱、检测器、数据处理系统等几部分构成，工作 原理见 图 l a毛 细 俗检 测 器图 1毛细管电泳仪工作原理3 计量 性能要 求3.23.33.43.53.6中心波长误差:士 2 n m;滤光片半宽度:镇巧 n m(固定波长紫外检侧器)。波长示值误差:士 2 n m;波长重复性:镇1 n m(连续可调波长紫外检测器)。基线漂移:毛0.0 0 2 A U/h o基线噪声:镇0.0 0 0 5 A U a检测限:镇1 X 1 0 一 6 g/m l(维生素1 3 6)高压 电源J J G 9 6 4-2 0 0 13.6.1 电压范围:0-3 0 k V，示值误差为士2.0%03.6.2 电流范围:0-3 0 0 I A，示值误差为士 3.0%.3.6.3 稳定性 观察 3 mi n内电压稳定性镇1.5%03.7 定性、定量测量重复性3.7.1 定性测量重复 性误差(8 次 测量)S 定 性 51.5%03.7.2 定量测量重复性误差(8 次测量)S 定 值 53.0%0通 用技 术要求1 仪器外观1.1 仪 器 应 有下列 标志:名 称、型 号、制 造厂名、生产日 期、产品 编 号、返 j宝标、电源电压和频率、最大功率。1.2 仪器应能平稳置于工作台上，各紧固件均应紧固良好，各调节器、按键和开关44.4.志4.均能正常工作。4.14.2 电缆线的接插件均应紧密配合，接触良好。气路系统:气路处于正常工作条件下，将气路末端堵住，用皂膜液涂抹各接头，应无气泡产生。4.3 绝缘电阻:绝缘电阻应大于 1 0 MC I.5 计t器具控制 计量器具控制包括:首次检定、后续检定和使用中检验。5.1 检定条件5.1.1 检定环境条件5.1.1.1 环境温度:(2 0 士5)5.1.1.2 环境湿度:相对温度镇8 5%R H5.1.2 供电电源:(2 2 0 士 2 2)V,(5 0 士 5)H z,5.1.3 检定用设备5.1.3.1 秒表:分度值 0.1 s o5.1.3.2 分析天平:最大称量2 0 0 g，最小分度为0.1 m g o5.1.3.3 电流表:0 一 5 0 0 fL A,1.。级。5.1.3.4 静电电压表:0-3 0 k V,0.5 级。5.1.3.5 绝缘电阻表:5 0 0 V,0-5 0 0 MS 2,1.0级。5.1.3.6 电阻:2 2 Ma,1.0级。5.1.4 标准物质和试剂5.1.4.1 维生素氏(分析纯)。5.1.4.2 磷酸氢二钠(分析纯)。5.1.4.3 紫外吸收标准溶液 G B W(E)1 3 0 0 6 6 0.I.I G 9 6 4-2 0 0 15.2 检定项目和检定方法5.2.1 外观检查 按 4.1-4.2条说明进行外观及初步检查。5.2.2 高压电源的检定5.2.2.1 电压示值误差的检定 将静电电压表接人高压电源的输出端，在全量程范围内均匀选取 6 个点(其中包括最大标称输出电压)，测量各点输出电压，按公式(1)计算各点的示值误差，取其最大值作为电压示值误差。S V示 二V 标一V V;x 1 0 09 6(1)式中:s V 示 电 压示值误差，(%);V;各点测量电压值，k V:V 标 各点标称电压值，k V o5.2.2.2 电流示值误差的检定 将2 2 MO电阻和电流表 串人高压电源的输出端，调整仪器到最大标称输出电流，读取电流表的显示值，按公式(2)计算输出电流的示值误差。a I ,-,I 标一I Ix 1 0 09 6(2)式中:8 1 示 电 流示值误差，(%);I 测量电流 值，f A;1 标 仪器最大 标称输出电流 值，拌 A o5.2.2.3 电源稳定性 仪器预热 3 0 m i n后，设定输出电压为 2 0 k V，接静电电压表于高压电源电压输出端，连续观察 3 m i n，记录电压表显示的最大值和最小值。最大值与最小值的差与设定输出电压值之比为电源的稳定性。5.2.3 紫外检测器性能的检定5.2.3.1 波长示值误差及重复性的检定5.2.3.1.1 固定波长紫外检测器的中心波长及半宽度检定 将仪器配置的滤光片取出，按照J J G 8 1 2-1 9 9 3 干涉滤光片检定规程检定中心波长(峰值波长)及半宽度，其误差及半宽度应符合 9.1 条的要求。5.2.3.1.2 连续可调波长紫外检测器的波长示值误差及重复性检定 采用紫外吸收标准溶液分别在2 3 5,2 5 7,3 1 3 n m和3 5 0 n m 4 点检定波长示值误差。将检测器波长设在比校准波长低 5 n m处(如检定 2 5 7 n m时，检测器波长先调到2 5 2 n m)，以1 n m的间隔改变波长，得到波长特征曲线，曲线波峰、波谷处对应的波长为该点测量波长，重复测量3 次，取其平均值。测量波长平均值与 标准波长之差 为波 .I J G 9 6 4-2 0 0 1长示值误差。用同样的方法检定其它 3 点，其最大值与最小值之差为波长的重复性。5.2.4 静态基线漂移和基线噪声的检定 将仪器各部分连接好，选择如下条件进行:波长 2 5 4 n m、毛细管柱为空管，开机稳定 3 0 m i n 后，记录 1 h的基线，计算基线漂移和基线噪声。5.2.5 检测限 仪 器处于正常工作状态下，将检测器波长调到2 5 4 nn，用7 5 L m x 4 0 c m的毛细管柱，柱 温2 5(;，电泳电 压为1 5 k V。选择气压8 k P a，进样时间3 s(气压进 样);高差2 0 c m，时间 1 8 0、(位差进样)。待基线稳定后，用 2 0 mm o l/L的磷酸氢二钠作为缓冲溶 液，取质 量浓度为2 X 1 0-6 g/m l 的维生素B 6 溶液，连续进样3 次，计算其峰高的算术平均值。检测限定义为等于或大于两倍基线噪声峰高所代表的样品的质量浓度，按式(3)计算检测限。D一2 HN p/H (3)式中:D 检测限(最小检测质量浓度)，g/ml;H N噪声峰高，m m;p 样 品 的 质 量 浓 度，g/m l;H样品峰高，m m.5.2.6 定性定量测量重复性的检定 将仪器连接好，使 之处于正 常工作状态，按 5.2.5的条件，注人质量 浓度为1 X 1 0-4 g/m l 的维生素B 6 溶液，记录迁移时间和峰面积(峰高)，连续测量8 次，按式(4)计算 相对标准偏差S 定 性 c 2)o8 性(定，)一 丫 拿 喂 是 刃 三 争10 096(4)式中:S 定 性 淀量)定性(定量)重复性;X;第 i 次测得的迁移时间或峰面积(峰高);X-n次测量结果的算术平均值;i 测量序号;n-钡 d 量次数。5.2.7 绝缘电阻的检定 电源插头不接人电网，用绝缘电阻表在电源进线与仪器外壳之间施加5 0 0 V直流电压，稳定 5 s 后，测量绝缘电阻应大于 1 0 ma.5.2.8 首次检定的仪器需按照本检定规程的要求全面进行检定，后续检定和使用中检验可不进行 4.3 和 3.6 条的检定。5.3 检定结果的处理 经检定符合本规程要求的仪器发给检定证书;不符合的发给检定结果通知书，并注J J G 9 6 4-2 0 0 1明不合格项 目。5.4 检定周期 毛细管电泳仪检定周期一般不超过 2 年。J J G 9 6 4-2 0 0 1附级 A标准溶液的配制A.1 试剂试 剂 名 称分子式级别水H2 O二次蒸馏水维生素 B 6几H 0 3 N H C 1分 析 纯磷酸氢二钠N a 2 H P 0 4.1 2 玫O分 析 纯A.2 仪器和玻璃f器名称规 格一一名称规格/m l分析天平200。，、，。，m、一无分度吸管1容量瓶1 0 0,2 5 0 n i l无分度吸管2称量瓶2 0 ml 一一烧杯5 0A.3 2.O x 1 0-6 g/m l 维生素B 6 溶液的配制 在分析天平上，准确称取1 0.0 m g 的维生素氏 固体，放人5 0 m l 的 烧杯中，加人2 0 m m o l/L的磷酸氢二钠缓冲溶液使之完全溶解，将此溶液小心移人 1 0 0 ml 容量瓶中，并用2 0 m m o l/L的磷酸氢二钠缓冲溶液稀释至刻度，摇匀。该溶液的质量浓度为1.0 x 1 0 一 4 g/m l，然后用缓冲溶液逐级稀释配制成2.0 x 1 0-6 g/m l 的 维生素氏溶液。A.4 2 0 m m o l/L 的磷酸氢二钠缓冲溶液的配制 在分析天平上称取 1.7 9克磷酸氢二钠固体，放人 5 0 m l 烧杯中，用蒸馏水稀释，并移人 2 5 0 m l 的容量瓶中，用少量蒸馏水冲洗烧杯 3次，冲洗液并人容量瓶中，然后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀后倒人磨口瓶中备用。J J G 9 6 4-2 0 0 1附录 B检定证书(背面)格式检定结果1 外观2 气路系统3 电压示值误差4 电流示值误差5 稳定性6 中心波长误差7 滤光片半宽度8 波长示值误差9 波长重复性1 0 基线漂移n基线噪声1 2 检测 限1 3 定性测量重复性1 4 定量测量重复性巧绝缘电阻备注:J J G 9 6 4-2 0 0 1附录 C检 定 记 录 格 式证 书编号受检单位温(湿)度仪器型号仪器编号检 定 员制 造 厂检定 日期核 验 员夕 卜 观检查2 高压电源2.1 电压范围及示值误差电压示值/k V51 01 52 02 53 0(m a x)输出电压/k V示值误差/(%)2.2 电流示值误差最大输出电流介 e A电流表测量值乍A示值误差/(%)2.3 电源稳定性电源稳定性 3 mi n电压最大值电压最小值稳定性/(%)3 波长示值误差及重复性3.1 固定波长紫外检测器中心波长误差及半宽度中 心波长(l o)标准波长(人 )中心波长误差半宽度J J G 9 6 4-2 0 0 13.2 连续可调波长紫外检测器的波长示值误差及重复性标准波长/n m测 量 波 长/n m又八im氏/n m石义 2A 3A2 3 52 5 73 1 33 5 04 静态基线漂移及噪声基线漂移/(A U/h)基线噪声/A U5 仪器检出限H/mmHr r/mmD/(g/ml)s 定性定A重复性钡组 量 次数12345678平均S迁移 时间峰 面 积峰高7绝缘性能