DB43∕T 2139-2021 植物中氮、磷的测定 连续流动分析法(湖南省).pdf

植物中氮、磷的测定连续流动分析仪法Determination of nitrogen and phosphorus in plants Continous flow analyzer发 布湖南省市场监督管理局43DB43/T 21392021 湖南省地方标准ICSCCS 71.040.01G 042021-08发布-032021-10实施-03DB43/T 21392021 I 目 次 前言 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 方法原理 1 5 试剂 1 6 干扰消除 2 7 仪器和设备 2 8 样品 2 9 分析步骤 3 10 分析结果的表述 4 11 精密度 4 附录 A（资料性）连续流动分析仪测定植物中氮、磷含量试剂流路图 5 DB43/T 21392021 II DB43/T 21392021 III 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省市场监督管理局提出并归口。本文件起草单位：中国科学院亚热带农业生态研究所、湖南省计量检测研究院。本文件主要起草人：王久荣、张丽萍、袁红朝、贺珍、耿梅梅、刘楠、肖克、李娅、王理、邓顺乾。DB43/T 21392021 IV DB43/T 21392021 1 植物中氮、磷的测定 连续流动分析仪法 1 范围 本文件规定了植物样品经过硫酸-过氧化氢消解，连续流动分析仪法测定氮、磷的方法。本文件适用于植物样品中氮、磷的测定。本文件方法的线性范围为氮：040.0 mg/L，磷：04.00 mg/L。当称样量为 0.2 g，定容体积为100 mL 时，方法的检出限为氮：22.6 mg/kg，磷：20.4 mg/kg；测定下限为氮：90.4 mg/kg；磷：81.6 mg/kg。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 LY/T 1228 森林土壤氮的测定 LY/T 1232 森林土壤磷的测定 LY/T 1267 森林植物（包括森林枯枝落叶层）样品的采集与制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 方法原理 植物中氮、磷多以有机结合态存在，样品经硫酸-过氧化氢消解，有机物被氧化分解，使样品中的有机氮转化为无机铵盐，有机磷转化成无机磷酸盐，用同一份消解液同时测定氮（NH4+-N）、磷（PO43-P）的含量。氮（NH4+-N）的测定：在硝普钠作为催化剂条件下，消解液中无机铵盐在碱性环境下与水杨酸钠及次氯酸钠反应生成蓝色化合物，在 660 nm 波长下用比色法测定。磷（PO43-P）的测定：以酒石酸锑钾作为催化剂，消解液中磷酸盐在酸性环境下和钼酸铵及抗坏血酸反应生成磷钼蓝化合物，在 660 nm 或 880 nm 波长下用比色法测定。5 试剂 除非另有说明，所用水应符合 GB/T 6682 规定的二级水要求，所用试剂均为分析纯试剂。5.1 硫酸（H2SO4，=1.84 g/mL）。5.2 过氧化氢（H2O2，w=30）。5.3 月桂醇聚氧乙烯醚（Brij-35，w=22，润滑剂）。5.4 十二烷基磺酸钠（SDS，润滑剂）。DB43/T 21392021 2 5.5 缓冲溶液：分别称取 35.80 g 十二水合磷酸氢二钠（Na2HPO412H2O）、50.00 g 酒石酸钾钠（NaKC4H4O6）完全溶于约600 mL 水中，再加入29.30 g 氢氧化钠（NaOH）于溶液中，待完全溶解后，用水定容至 1000 mL，加 2 mL 月桂醇聚氧乙烯醚（5.3）混匀，常温保存，可稳定 2 周。5.6 水杨酸钠-硝普钠溶液：称取 4.00 g 水杨酸钠（C7H5O3Na）溶于约 60 mL 水中，再溶解 0.10 g 亚硝基铁氰化钠（Na2Fe(CN)5NO2H2O，别名硝普钠），用水定容至 100 mL，避光保存，可稳定 2 周。5.7 次氯酸钠溶液：取 4.0 mL 有效氯含量不低于 10 的次氯酸钠（NaClO）溶液，用水定容至 100 mL，现配现用。5.8 缓冲溶液 A：称取 5.00 g 氯化钠（NaCl）溶于约 600 mL 水中，缓慢加入 12.0 mL 硫酸（5.1），混匀冷却后，再加 2.00 g 十二烷基磺酸钠（5.4）于溶液中，完全溶解后，用水定容至 1000 mL，常温保存，可稳定 2 周。5.9 缓冲溶液 B：取 14.0 mL 硫酸（5.1）小心加入约 800 mL 水中，冷却至室温后，加 2.00 g 十二烷基磺酸钠（5.4）于溶液中，完全溶解后，用水定容至 1000 mL，常温保存，可稳定 2 周。5.10 钼酸铵-酒石酸锑钾溶液：称取 0.62 g 四水合钼酸铵（(NH4)6Mo7O244H2O）和 0.0170 g 半水合酒石酸锑钾（K(SbO)C4H4K2O61/2H2O）溶解于约 80 mL 水中，用水定容至 100 mL，避光保存，可稳定 2 个月。5.11 抗坏血酸溶液：称取1.50 g 抗坏血酸（C6H8O6）溶于水，用水定容至100 mL，避光保存，现配现用。5.12 吸样器冲洗液：量取 50.0 mL 硫酸（5.1）缓慢沿内壁加入盛有约 800 mL 水的烧杯中，搅匀冷却，转移至 1000 mL 容量瓶中，用水定容。5.13 氮（NH4+-N）标准储备液（1000 mg/L）：购买国家有证氨氮标准溶液或按照 LY/T 1228 规定的方法配制，室温可保存 18 个月。5.14 磷（PO43-P）标准储备液（1000 mg/L）：购买国家有证磷元素标准溶液或按照 LY/T 1232 规定的方法配制，室温可保存 24 个月。5.15 磷（PO43-P）工作液（100 mg/L）：准确量取适量磷标准储备液（5.14），用吸样器冲洗液（5.12）稀释 10 倍制备，室温可保存 6 个月。6 干扰消除 6.1 标准系列溶液与样品待测溶液酸度应保持一致，以减少待测溶液酸度对测定结果产生的干扰。6.2 润滑剂（5.3、5.4）对测定结果稳定性有影响，应保证所配含有润滑剂的溶液（5.5、5.8、5.9）在使用期间为澄清透亮溶液。7 仪器和设备 7.1 样品粉碎设备。7.2 天平（感量 0.01 g）。7.3 天平（感量 0.0001 g）。7.4 高温消解仪（温度需达 400，可控温度在5）。7.5 连续流动分析仪，配置 660 nm 的滤光片（仅测磷可选配 880 nm 的滤光片）。8 样品 8.1 植物样品的采集与保存 DB43/T 21392021 3 植物样品的采集和保存应符合 LY/T 1267 的规定。8.2 植物样品的制备 植物样品的制备应符合 LY/T 1267 的规定。9 分析步骤 9.1 待测液的制备 称取均匀植物干样 0.1 g0.5 g（精确到 0.0001 g）于 50 mL 消煮管内，加 510 滴水润湿；或称取新鲜试样 1 g5 g（精确到 0.0001 g）于 50 mL 消煮管。在消煮管内加入 5.00 mL 硫酸（5.1），摇匀，加盖小漏斗，冷消化过夜后置于高温消解仪上，升温至 200 加热消解 20 min，再升温至 300 继续消解，消解期间适当摇动消煮管，硫酸回流至管口三分之一处，继续加热至固体物消失成为棕褐色溶液（无炭粒），取下消煮管冷却至室温；加入约 1 mL 过氧化氢（5.2），摇匀，110 加热 5 min，370 加热 10 min15 min，取下消煮管冷却至室温；再次加入 10 滴过氧化氢（5.2），摇匀，110 加热 5 min，370 加热 10 min15 min；如此反复（过氧化氢用量逐渐减少）至溶液呈无色或清亮后于 370 继续消解 20 min30 min，以除尽多余的过氧化氢。消解完毕，取下消煮管冷却，用水反复多次将消解液全部转移到 100 mL 容量瓶中，冷却至室温后定容摇匀，用无磷滤纸过滤或放置澄清即得待测液。待测液含硫酸的体积分数约为 5。9.2 待测空白液的制备 不加入植物试样，按照与待测液的制备（9.1）相同的步骤进行待测空白溶液的制备。9.3 仪器设置与调试 参照仪器使用说明书，按照植物氮、磷试剂流路图（见附录 A，图 A.1、图 A.2）连接样品和试剂流路，优化仪器操作条件，使待测指标的响应增益值达到分析要求，编辑测定方法、选择合适的测样速率、清洗比。9.4 标准曲线 混合标准溶液的配制：准确量取氮标准储备液（5.13）和磷标准工作液（5.15）0.000 mL、0.100 mL、0.500 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL 于 100 mL 容量瓶中，分别加入 50 mL 水后，再加入 5.00 mL 硫酸（5.1），摇匀冷却，用水定容至 100 mL，制备成含氮 0.000 mg/L、1.00 mg/L、5.00 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、30.0 mg/L、40.0 mg/L 和含磷 0.000 mg/L、0.100 mg/L、0.500 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L、3.00 mg/L、4.00 mg/L 的混合标准系列溶液。取适量上述标准系列，分别置于样品杯中，由连续流动分析仪按方法程序依次从高浓度到低浓度取样测定。以测定相应指标信号值为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。9.5 待测液的测定 9.5.1 取待测空白液（9.2）、待测液（9.1）适量（约 8 mL）按顺序放入样品盘中，按照 9.3 准备好的仪器条件，待基线稳定后依次测定标准系列溶液、空白液和待测液。超出测定范围的待测液，用吸样器冲洗液（5.12）稀释。9.5.2 每批样品应带一个中间校核点，中间校核点测定值与标准曲线相应点浓度的相对误差应不超10。DB43/T 21392021 4 9.5.3 仪器校正，每隔 10 个样次插入一个基线校正，每隔 20 个样次插入一个漂移校正，消除试剂与仪器的漂移误差。10 分析结果的表述 试样中待测指标X（氮或磷）的含量W（X），按式（1）计算：10000)()(0=mVtccXWi（1）式中：)(XW试样中待测指标X（氮或磷）含量，单位为克每一百克（g/100 g）；ic 试样溶液中待测指标质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；0c 空白溶液中待测指标质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；t 试样溶液稀释倍数；m 试样称取质量，单位为克（g）；V 试样消解液定容体积，单位为毫升（mL）；10000 待测指标含量单位由毫克每千克（mg/kg）转换为百分比（g/100 g）的转换系数。11 精密度 在重复性条件下两次独立测试结果的绝对差值应不超过这两次测定结果算术平均值的 7（氮）、8（磷）。DB43/T 21392021 5 附 录 A(资料性)连续流动分析仪测定植物中氮、磷含量试剂流路图 A.1 连续流动分析仪测定植物中氮含量试剂流路图：图 A.1 氮的测定 试剂流路图 A.2 连续流动分析仪测定植物中磷含量试剂流路图：图 A.2 磷的测定 试剂流路图