色谱峰拖尾或出现双峰的原因.ppt

一、色谱峰拖尾一、色谱峰拖尾原因及解决方法原因及解决方法l1、溶解样品的溶剂极性强于流动相；l2、样品量过载；l3、固定相中的硅醇基与胺类相互作用；l4、酸性化合物在硅胶上吸附；l5、色谱柱床的空隙；l6、色谱柱污染；l7、色谱柱填料表面的惰性不够好；l8、色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷；1、由于溶解样品的溶剂极性强于流动相而引起的拖尾。有几种线索可以帮助确定是由于此种原因引起的拖尾。第一种就是先流出的峰的拖尾较后流出的峰拖尾严重；另一种迹象就是进样量减少或者是样品经流动相稀释后进样峰拖尾减轻了。解决很简单：将样品溶解在流动相中，或者将样品经流动相稀释至进样后峰拖尾符合要求。2、由样品量过载引起的峰拖尾 当进样量超过柱子的容量，样品峰会呈现一个直角三角形。当更多的样品量注入时，峰的前端变得很尖而后端就拖尾更严重。解决方法：减少进样量。3、由固定相中的硅醇基与胺类相互作用引起的拖尾 具有显著的硅醇活性的固定相的色谱柱大部分都会发生此现象，而且中性pH（68）条件下比在酸性pH（3）更易发生。l解决方法：（1）确认流动相中有合适的缓冲盐，尽量在pH3的条件下操作（在pH3的条件下操作，可使硅胶固定相上的硅醇基质子化，减少了溶质与硅醇反应的几率），使用足够的缓冲液控制pH并减少离子交换效应。（2）在流动相中加入竞争性的胺类三乙胺（TEA），TEA可以与硅醇发生强的反应，并抑制样品中的胺类与硅醇反应。4、酸性化合物在硅胶上吸附引起的拖尾 解决方法：应提高流动相中盐的浓度来抑制二次反应，降低流动相的pH使硅醇和溶质质子化，必要时可以向流动相中加入竞争性的酸。加入的酸优先和硅胶固定相表面的酸性硅醇基反应，抑制了酸性化合物和硅醇基的反应，减低了拖尾。5、由于柱床空隙引起的拖尾 如果通常色谱柱具有良好的柱效，突然发现所有的峰均拖尾时，可能是柱子有空隙。先洗脱出的峰较后洗脱的峰更易受柱空隙的影响。虽然许多色谱分析者尝试用相同的固定相材料修补柱子的空隙，但就经验来讲，此法很少能达到预期的效果。由柱子空隙引起的拖尾最好的解决方法就是换掉它，这样可以节省时间，金钱，减少麻烦。6、色谱柱污染引起的拖尾 如果色谱柱开始使用时峰形正常，使用一段时间后逐渐出现峰拖尾，则色谱柱被污染的可能性很大。解决方法：需要对色谱柱加强冲洗，即使用比方法流动相更强的溶剂冲洗色谱柱。要做好样品前处理，但如果前处理后依然比较脏，建议配置保护柱，一旦峰形变差，柱效下降，应及时更换保护柱芯。7、色谱柱填料表面的惰性不够好引起的拖尾 键合硅胶型填料表面的残留硅羟基或金属杂质易与待测化合物发生二次作用而导致拖尾。解决方法：选用高纯硅胶合成填料的色谱柱以及进行了有效硅羟基封端填料色谱柱。8、色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷引起的拖尾 解决方法：如色谱柱塌陷，则填充色谱柱；如筛板阻塞则反向冲洗色谱柱或更换筛板。二、色谱峰出现双峰二、色谱峰出现双峰 色谱双峰指的是明明是同一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。原因及解决方法原因及解决方法l1、色谱柱阻塞；l2、溶剂极性及进样量；l3、样品的特性及pH值；l4、仪器参数；l5、保护柱或分析柱污染。1、色谱柱阻塞 如果你分析样品时发现每个色谱峰都是双峰出现尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题。色谱柱部分阻塞导致的峰裂分色谱图 如果是色谱柱阻塞，解决方法是将色谱柱反过来接，用流动相冲洗，将堵在色谱柱中的残留物冲掉，再反过来，就可以了。2、溶剂极性及进样量 样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解，最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。当用溶剂极性强度大的试剂溶解样品，而分析体系中以水为主，样品进样量大，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小且拖尾。将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。这是由于样品的溶剂极性与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。进样量不一定大，但绝对量很大，色谱图上的双峰紧靠在一起，基本上齐高，不拖尾。将样品稀释再进样就可以了，这是由于进样量过大，色谱柱过载造成的。3、样品的特性及pH值 有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，这种互变异构体无法分开，而是以一个动态平衡存在。色谱分析时，在一个特定的条件下，一种物质将出现双峰，一般双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾。当pH稍一变化，双峰现象将消失。4、仪器参数 如果记录间隔时间太短，一个峰将变为二个峰或更多，这时需要将间隔时间设置稍长。还有一种情况是，参比波长设置过小，本来一个峰会变成对称的二个峰，这时要将参比波长设置更大，或者取消。5、保护柱或分析柱污染 取下保护柱再进行分析，必要时更换保护柱。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施；如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。