分枝杆菌液体培养与微孔板法分枝杆菌药敏试验对结核感染的检测效果分析.pdf

论著 检验医学与临床JOURNAL OF CHINESE AND FOREIGN MEDICINE AND PHARMACY RESEARCH中外医药研究2023年第2卷第17期中外医药研究2023年第2卷第17期结核感染是一种由分枝杆菌引起的慢性传染病，在全球范围内造成严重的健康问题。结核病的早期诊断和个性化治疗对于预防疾病扩散和有效控制病情具有重要意义。目前，液体培养和微孔板法是常用的用于检测结核感染的分枝杆菌菌株的方法，可评估其对抗结核药物的敏感性。液体培养方法可以提供足够的菌株量，便于后续的分类鉴定和药物敏感性测试；微孔板法是一种快速、经济、可高通量检测方法，用于测试多个药物在不同浓度下对分枝杆菌的抑制效果1-3。然而，目前尚缺乏全面研究以评估分枝杆菌液体培养和微孔板法在结核感染检测方面的性能和准确性。因此，本研究旨在探索这两种方法在结核感染检测和药物敏感性分析方面的应用效果，现报告如下。资料与方法选取2022年5月2023年5月贵阳市公共卫生救治中心收治的结核感染患者痰标本52例为观察对象，其中男28例，女24例；年龄2178岁，平均(49.59.5)岁；体重指数1928 kg/m2，平均(23.51.5)kg/m2。患者及家属签署知情同意书，自愿参与研究。纳入标准：年龄2080岁；临床资料完整且真实；痰液标本均采自肺结核感染住院患者。排除标准：存在认知或精神障碍；无法有效配合治疗；中途退出研究。方法：标本处理与检测：采集患者早晨、晚上及即刻痰标本，分别涂片染色，并将不同黏稠程度的痰标本加以区分，分别加入不同剂量的N-乙酰-L-半胱氨酸-氢氧化钠2%消化液，浓痰需要加入3倍消化分枝杆菌液体培养与微孔板法分枝杆菌药敏试验对结核感染的检测效果分析唐华刚550001贵阳市公共卫生救治中心，贵州 贵阳摘要目的：分枝杆菌液体培养与微孔板法分枝杆菌药敏试验对结核感染的检测效果。方法：选取2022年5月2023年5月贵阳市公共卫生救治中心收治的结核感染患者痰标本52例为观察对象，对所有标本均采取分枝杆菌液体培养与传统固体罗氏培养法，采用微孔板法完成分枝杆菌药敏试验，分析微孔板法药敏结果检测效能。结果：微孔板法药敏法对乙胺丁醇特异性高于传统比例法药敏法，差异有统计学意义(P=0.022)；两种药敏试验方法对利福平、异烟肼及链霉素的敏感性、特异性、准确性，对乙胺丁醇的敏感性、准确性比较，差异无统计学意义(P0.05)。结论：微孔板法分枝杆菌药敏试验可为多种药物进行药敏试验，为临床药物疗效提供重要参考依据，有助于结核病防控。关键词分枝杆菌；微孔板法；药敏试验；结核感染Analysis of the Effectiveness of Mycobacterial Liquid Culture and Microplate Method in Detecting TuberculosisInfection by Mycobacterial Drug Susceptibility TestingTang HuagangGuiyang Public Health Treatment Center,Guiyang 550001,Guizhou Province,ChinaAbstractObjective:To detect tuberculosis infection using mycobacterial liquid culture and microplate method mycobacterialdrug susceptibility testing.Methods:Fifty-two sputum samples from patients with tuberculosis infection admitted to GuiyangPublic Health Treatment Center from May 2022 to May 2023 were selected as the observation objects.Mycobacterial liquidculture and traditional solid Roche culture methods were used for all specimens,and the microplate method was used to completethe mycobacterial drug susceptibility test,and the detection efficiency of the microplate method drug susceptibility results wasanalyzed.Results:The specificity of the microplate method for ethambutol was higher than that of the traditional proportionalmethod,and the difference was statistically significant(P=0.022);There was no statistically significant difference in thesensitivity,specificity,and accuracy of the two drug susceptibility testing methods to rifampicin,isoniazid,and streptomycin,aswell as the sensitivity and accuracy to ethambutol(P0.05).Conclusion:The microplate method of mycobacterial drugsusceptibility testing can be used for drug susceptibility testing of a variety of drugs,provides an important reference for clinicaldrug efficacy,and is helpful for the prevention and control of tuberculosis.Key wordsMycobacteria;Microplate method;Drug susceptibility test;Tuberculosis infection145论著 检验医学与临床JOURNAL OF CHINESE AND FOREIGN MEDICINE AND PHARMACY RESEARCH中外医药研究2023年第2卷第17期中外医药研究2023年第2卷第17期液，稀薄痰液则需要加入等量的消化液。将容器盖拧紧，连接电源，将处理管放置在振荡器上完成50 s震荡，直到标本完全液化。在试管架内放上前处理管，并在室温条件下静置15 min，用手偶尔进行轻摇，加入缓释液，保持总刻度为40 mL。完成制冷温度的设置，并完成15 min离心处理(3 000 r/min)，取上层清液于带有消毒剂容器中，用注射器向每个试管中加入1.0磷酸缓释液。传统固体罗氏培养：对标本混悬液进行吸取处理，在固体培养基斜面中部将第一滴液体接种，在培养基上部完成第二滴接种，保持每个培养基接种剂量为2滴，保持缓慢转动，放低培养管底部，均匀铺放菌液，有效调节恒温培养箱内温度，温度控制在36左右。每个标本均同时完成2支接种，在接种后的第3天和第7天，观察菌落生长情况。若有菌落生长，需要在抗酸染色的应用下加以证实，报告是否为生长分枝杆菌阳性。每 7天观察菌落的情况，记录菌落的生长、污染及变化，如果出现阳性生长物，需要经过抗酸染色证实后再形成报告。观察时间共8周，如期间菌落未出现任何生长迹象，则可报告培养阴性。分枝杆菌液体培养：通过全自动仪器法，在分枝杆菌液体培养专用管中加入0.5 mL消化，并离心后的沉淀物，加入杂菌抑菌剂0.8 mL，再次应用全自动培养仪完成荧光值的判定及读取。如果仪器显示的结果为阳性，需要应用手工抗酸染色涂片，显微镜下仔细观察，充分检查，通常抗酸杆菌的颜色为红色，背景则显示为蓝色状态。微孔板法液体培养：a.菌株准备：液体培养阳性物，在37 的环境下，完成17 d的增菌培养，如果菌量足够，可以即刻检测，如果7 d后菌量仍不足，需要再次在新的液体培养管中完成接种。b.接种液的制备：通过一次性无菌滴漏，在底部吸取菌液0.5 mL，置入1.5 mL无菌生理盐水管中，同拧紧将螺口，使用玻璃珠针对磨菌进行充分涡旋震荡，使其变成西沙状态，保持均匀。c.接种：吸取菌悬液100 L放入药敏接种培养液中，完成30 s涡旋震荡操作，使其充分混合均匀。得到接种液后，通过合适的多通道移液器，保持每个孔中有100 L接种液，需要在30 min内完成96孔接种液的接种操作。d.药物浓度准备：调配4种药敏的浓度，分别配置成为不同浓度状态，呈现梯度稀释，在最后一排第12孔中只需加入菌悬液，其主要作用为对照孔。1株菌被分成4种药物8个不同浓度，通过透明胶带或者密封膜完成孔板覆盖，避免出现歪斜或者褶皱情况，确保密封性良好，使用刮板完成密封膜操作，避免出现蒸发或渗漏，防止出现实验室污染或者实验失败。e.孵育：将药敏板放置在有氧环境下，将温度控制在3537，孵育10 d，并在710 d观察对照孔的生长情况，如果在经过10 d后没有出现良好生长，需要将其放进孵箱中，再次孵育 11 d。f.生长表现：如果U型孔中有菌落沉积、混浊，操作人员可在肉眼的作用下完成检测结果的读取。观察对照孔是否存在菌落生长，如果没有，说明结果失败、无效。当阳性生长对照孔菌落生长情况比较良好时，可读取每种药物的最低抑菌浓度(MIC)值，MIC值为生长明显抑制的最低抗生素浓度。当MIC值高于临界值，表示耐药，如果MIC低于临界值，可判定菌株对药物存在敏感情况。观察指标：分析不同药敏法对结核结核药品耐药性检测情况，敏感性=真阳性例数/(真阳性例数+假阴性例数)100%；特异性=真阴性例数/(真阴性例数+假阳性例数)100%；准确性=(真阳性例数+真阴性例数)/(真阳性例数+真阴性例数+假阳性例数+假阴性例数)100%；以MGIT960法为“金标准”。统计学方法：数据均用 SPSS 26.0 统计学软件予以处理；计数资料以n(%)表示，比较采用2检验；P0.05为差异有统计学意义。结果微孔板法药敏法与传统比例法药敏法对结核药品耐药性检测效能比较：微孔板法药敏法对乙胺丁醇特异性高于传统比例法药敏法，差异有统计学意义(P=0.022)；两种药敏试验方法对利福平、异烟肼及链霉素的敏感性、特异性、准确性，对乙胺丁醇的敏感性、准确性比较，差异无统计学意义(P0.05)。见表1。讨论肺结核作为临床常见传染性疾病，有较高发病率及死亡率，结核感染常见致病菌为结核分枝杆菌，对患者身体健康产生严重威胁。目前，疾病预防及控制措施均存在局限性，患者感染结核分枝杆菌后，患者自身抵抗力及结核分枝杆菌数量对患者发病起到很大作用。因此，尽早诊断及隔离处理，是防控结核的有效方法。液体培养和微孔板法是检测分枝杆菌液体培养和药物敏感性的常用方法。在本研究中，通过对结核感染患者痰样本进行液体培养后，成功分离出了分枝杆菌菌株，使用微孔板法评估了其对多种抗结核药物的146论著 检验医学与临床JOURNAL OF CHINESE AND FOREIGN MEDICINE AND PHARMACY RESEARCH中外医药研究2023年第2卷第17期中外医药研究2023年第2卷第17期敏感性。通过液体培养，得以获得分枝杆菌的足够量，以进行后续的药物敏感性测试。在菌落计数和分离过程中，可以进一步了解感染严重程度和不同临床样本中分枝杆菌株的多样性。对于设计个体化治疗方案和评估抗菌药物的有效性至关重要。微孔板法作为一种常用的药物敏感性测试方法，在结核感染的检测和治疗选择中具有诸多优势。首先，微孔板法是一种高通量的方法，可以同时测试多个药物对分枝杆菌的敏感性。传统的药敏试验通常需要单独进行，耗时、耗力。微孔板法则能够将多个药物同时测试，提高了检测效率，节省时间和资源。其次，微孔板法对药物浓度的变化非常敏感，通过在不同浓度的药物孔中培养分枝杆菌可以精确地测定MIC，有助于确定药物的有效浓度范围，为个体化治疗提供重要参考4-5。再次，微孔板法操作简便，不需要复杂的设备和技术，适用于临床实验室。相比于其他药敏试验方法，如测定菌落直径的方法，微孔板法在操作上更为简便、快速。最后，微孔板法还具有较强的客观性和综合性，结果可以通过比色法、荧光染色法或读板机等设备进行定量测定，避免主观判断的偏差，提高结果的准确性和可重复性6-8。然而，微孔板法仍然存在局限性。一是可能会忽略到其他对抗结核药物的敏感性，因为仅选择了一些常用药物进行测试。二是微孔板法只能提供细菌对药物的定性信息，无法评估细菌在不同药物浓度下的生长抑制率。因此，在微孔板法的基础上，结合其他药物敏感性测试方法可以提供更全面的药物敏感性信息。本研究表明，分枝杆菌液体培养与微孔板法均能够对于结核感染的早期诊断发挥重要作用，分枝杆菌液体培养阳性检出率高，微孔板法能够提高特异度及灵敏度。然而，对于不同的临床样本和药物，仍需进一步研究和验证，以提高检测准确性和临床可应用性。综上所述，分枝杆菌液体培养与微孔板法结合均可用于检测结核感染并评估分枝杆菌的药物敏感性，临床检验中对于不同样本还需要采取不同方法，有助于指导结核感染的早期诊断和个性化治疗的选择。参考文献1岳永宁,范大鹏,商学钗,等.BS-400全自动分枝杆菌液体培养系统对分枝杆菌培养的效果评价J.中国防痨杂志,2023,45(5):483-486.2田鹏,邓云峰,王俊玲,等.超声分散技术在分枝杆菌液体培养污染再处理中的应用效果分析J.中国防痨杂志,2022,44(11):1162-1166.3邱勇,李蒙,屈榕,等.县级实验室应用结核分枝杆菌手工液体培养技术检测结果分析J.结核与肺部疾病杂志,2022,3(2):173-176.4刘王亭,罗倩,陈娟,等.GeneXpert MTB/RIF、MGIT960液体培养法在胸腔积液结核分枝杆菌检测中的应用J.国际检验医学杂志,2022,43(4):385-387.5徐银娟,赵国连,崔晓利,等.新型国产改良Middlebrook液体培养试剂对结核分枝杆菌培养效果的评价J.中国防痨杂志,2022,44(1):60-63.6黄振超.Genexpert试验、液体培养法在结核分枝杆菌耐药性监测中的效能分析J.质量安全与检验检测,2021,31(5):97-99.7杜岩青,秦中华,张丽霞.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对分枝杆菌液体培养系统菌种鉴定的临床研究J.中国人兽共患病学报,2021,37(10):871-877.8周艳艳.利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术法 液体培养法和涂片抗酸染色法在结核分枝杆菌检测中的应用J.实用医技杂志,2021,28(7):903-905.表1微孔板法药敏法与传统比例法药敏法对结核药品耐药性检测效能比较(%)药敏试验方法微孔板法药敏法传统比例法药敏法2P利福平敏感性88.7866.562.5620.117特异性85.6288.210.1160.735准确性86.5681.560.5520.442异烟肼敏感性82.2470.480.6430.421特异性88.2693.120.5420.447准确性86.5686.560.0001.000乙胺丁醇敏感性7.037.030.0001.000特异性100.0086.856.3280.022准确性78.2268.221.5230.226链霉素敏感性18.079.180.3750.523特异性95.8195.810.0001.000准确性81.5680.000.0430.828147