SN∕T 5536-2022 较小根结线虫检疫鉴定方法[商检].pdf

I C S6 5. 0 2 0. 2 0C C SB1 6中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T5 5 3 62 0 2 2 较小根结线虫检疫鉴定方法D e t e c t i o n a n d i d e n t i f i c a t i o n o f M e l o i d o g y n e m i n o r K a r s s e n,B o l k,v . A e l s t,v . d . B e l d,K o x,K o r t h a l s,M o l e n d i j k,Z i j l s t r a,v . H o o f & C o o k,2 0 0 4 2 0 2 2 - 0 7 - 0 7发布2 0 2 3 - 0 2 - 0 1实施中华人民共和国海关总署发 布前 言 本文件按照G B/T 1. 12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分: 标准化文件的结构和起草规则 的规定起草。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位: 中华人民共和国拱北海关、 临沂科技职业学院、 中华人民共和国青岛海关。本文件主要起草人: 迟远丽、 林伟、 水克娟、 廖佳、 权永兵、 黄永辉、 廖力、 张卫东、 徐淼锋、 封立平。S N/T5 5 3 62 0 2 2较小根结线虫检疫鉴定方法1 范围本文件规定了出入境植物检疫中较小根结线虫的检疫鉴定方法。本文件适用于出入境植物及其繁殖材料、 土壤及栽培介质中较小根结线虫的检疫鉴定。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中, 注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件; 不注日期的引用文件, 其最新版本( 包括所有的修改单) 适用于本文件。S N/T 1 1 5 7 进出境植物苗木检疫规程 S N/T 1 1 5 8 进出境植物盆景检疫规程S N/T 2 1 1 72 0 0 8 伪哥伦比亚根结线虫检疫鉴定方法S N/T 4 6 4 3 线虫标本采集分离保存规范S N/T 4 7 2 32 0 1 6 根结线虫属( 非中国种) 检疫鉴定方法3 术语、 定义和缩略语3. 1 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。3. 2 缩略语下列缩略语适用于本文件。本文件没有需要界定的术语和定义。下列缩略语和符号仅适用于本文件。n测计的标本数;L体长;W虫体宽( 最大体宽) ;HH头区高度;HW头区宽度;S T口针长度;S T KH口针基部球高度;S T KW口针基部球宽度;D GO背食道腺开口到口针基部球的距离;T a i l尾长;H y a l i n e t a i l t e r m i n u s透明尾长;a体长/最大体宽;c体长/尾长。1S N/T5 5 3 62 0 2 24 基本信息中文名称: 较小根结线虫。学名:M e l o i d o g y n e m i n o r K a r s s e n,B o l k,v . A e l s t,v . d . B e l d,K o x,K o r t h a l s,M o l e n d i j k,Z i j l s t r a,v .H o o f & C o o k,2 0 0 4。分类地位: 线虫门(N e m a t o d a) , 色矛纲(C h r o m a d o r e a) , 小杆目(R h a b d i t i d a) , 垫刃亚目(T y l e n c h i -n a) , 垫刃总科(T y l e n c h o i d e a) , 根结科(M e l o i d o g y n i d a e) , 根结亚科(M e l o i d o g y n i n a e) , 根结属(M e l o i d -o g y n e) 。较小根结线虫是重要的植物根系内专性寄生线虫, 主要通过带根植物及其相关产品、 土壤及栽培介质传播扩散, 成熟雌、 雄虫、 二龄幼虫形态, 会阴花纹特征等是较小根结线虫检验鉴定的主要依据, 寄主范围、 地理分布等信息可供参考。其他信息见附录A。5 方法原理将送检的样品进行线虫分离, 雌虫可从根结直接剥离获得, 雄虫和二龄幼虫可采用贝曼漏斗法或浅盘法从土壤或剪碎的植物根部分离得到。分离得到的成熟雌虫, 雄虫和二龄幼虫, 制成临时玻片或永久玻片, 在生物显微镜下观察线虫形态并进行测量和拍照等工作。根据形态特征和形态测计值进行线虫的检疫鉴定。6 仪器、 用具和试剂6. 1 仪器生物显微镜( 具测微尺和拍照功能) 、 体视显微镜( 具透射光源) 、 恒温培养箱、 冰箱、 离心机、P C R仪、 荧光P C R仪。6. 2 用具培养皿、 盖玻片、 载玻片、 挑针、 酒精灯、 线虫滤纸或纱布、 离心管、 贝曼漏斗分离器、 乳胶管、 止水夹、加热板、 水桶、 标准套筛(4 0目5 0 0目) 、 移液器、 干燥器、 记号笔。6. 3 试剂4%甲醛、 甘油、 指甲油、 石蜡、D E S S溶液( 配制方法见S N/T 4 6 4 3) 、P C R缓冲液、D NA聚合酶。7 现场检疫首先观察苗木的生长状况, 有无发育不良、 黄化、 萎蔫、 变色等症状, 然后对植物或种苗的根、 茎根、根状茎等地下部分进行检查, 重点选取根部组织皮层增厚、 肿大, 形成根结, 或块根、 块茎的皮层有很多小的褐色坏死组织的苗木及根际介质或土壤, 如无可疑症状则按要求随机取样。取样后立即置于密封塑料袋内, 标记后及时送实验室检验。 具体抽样比例按S N/T 1 1 5 7和 S N/T 1 1 5 8执行。2S N/T5 5 3 62 0 2 28 实验室鉴定8. 1 线虫分离在体视显微镜下能观察到有根结或是瘤状突起的植物组织, 可采用直接解剖法将线虫剥离到培养皿中; 土壤和其他介质中的二龄幼虫和雄虫采用贝曼漏斗法进行线虫分离( 具体操作见S N/T 2 1 1 72 0 0 8中7. 1) 。8. 2 显微镜镜检分离获得的线虫悬浮液在体视显微镜下进行初检, 初步观察线虫的形态结构, 挑取疑似较小根结线虫的二龄幼虫和雄虫直接做成临时玻片或永久玻片, 成熟雌虫需制作会阴花纹的临时玻片或永久玻片,在生物显微镜下进行形态观察、 测量和拍照。玻片制作参见 S N/T 2 1 1 72 0 0 8的附录C。8. 3 生物显微镜观察、 拍照和测量将制作的线虫玻片置于生物显微镜下, 观察线虫的形态特征, 并对会阴花纹形态、 头部及尾部形态等进行拍照, 测量各形态特征值。9 形态鉴定特征及形态测计值9. 1 根结属线虫(M e l o i d o g y n e G o e l d i,1 8 9 2) 的主要鉴别特征成熟雌虫虫体膨大呈梨形或球形, 具突出的颈, 头架弱, 口针细, 长度一般为1 0 m2 5 m, 排泄孔位于中食道球前水平处, 双卵巢, 阴门和肛门位于虫体末端的会阴区, 无尾。会阴区有指纹状花纹。雄虫蠕虫形, 体细长, 头架和口针强壮, 食道峡部粗短, 尾短, 无交合伞, 交合刺粗壮。二龄幼虫蠕虫形,头架和口针细弱, 具透明尾或不明显。9. 2 较小根结线虫(M.m i n o r) 形态特征9. 2. 1 成熟雌虫形态特征虫体相对较小, 白色, 呈圆形或长圆形; 体表环纹浅, 颈区明显, 通常弯曲; 头帽明显且形状多变, 唇盘高, 侧唇突出, 头架轻微硬化; 口针略向背侧弯曲, 基部球为横卵圆形, 向后倾斜; 排泄孔位于口针基部球附近; 会阴花纹小而圆, 线纹细, 背弓低且线纹粗糙, 有的会阴花纹有细弱的侧线; 侧尾腺小, 通常不明显, 位于肛门前面。成熟雌虫形态特征参见附录B图B. 1、 附录C图C. 1、 附录D图D. 1。9. 2. 2 成熟雄虫形态特征虫体蠕虫状, 具体环, 侧区有4条侧线; 头部不缢缩, 唇盘圆形, 突起, 并与锚状亚中唇融合; 亚中唇区靠近唇盘处有4个小的缝状头感器, 开口位于唇盘与侧唇之间; 头架高度硬化, 口针基部球横卵圆形,从针杆部向后倾斜。背食道腺开口位于口针基部球附近; 食道腺细长, 腹覆盖肠, 有两个食道腺核。中食道球椭圆形, 半月体长3. 5 m4. 5 m, 位于排泄孔前面; 尾部通常向腹面弯曲, 短小, 圆锥形, 末端钝圆; 交合刺和引带细长, 向腹面弯曲, 侧尾器小, 位于泄殖腔附近。 成熟雄虫形态特征参见附录B图B. 1、 附录C图C. 2、 附录D图D. 2。3S N/T5 5 3 62 0 2 29. 2. 3 二龄幼虫形态特征已知种群二龄幼虫的虫体较小, 体长3 1 0 m4 1 6 m, 蠕虫形, 具环纹; 侧线4条, 网状结构不明显。头部圆, 不缢缩, 头架较弱, 口针较小, 口针基部球横卵圆形, 略向后倾斜; 尾长4 9 m6 3 m, 渐变细, 有时向腹面弯曲, 透明尾相对较长1 2. 0 m2 2. 1 m, 尾端钝圆。二龄幼虫形态特征参见附录B图B. 1和附录C图C. 3。9. 3 形态测计值较小根结线虫形态测计值见表1。表 1 较小根结线虫形态测计值形态指标测计值n( 条)2 52 5二龄幼虫(2 5)L/m5 2 67 1 (4 1 6-6 0 8)1 0 4 55 4 (7 9 0-1 4 8 8)3 7 78 (3 1 0-4 1 6)W/m3 3 95 5 (2 4 0-4 6 4)2 6. 90. 4 (2 1. 5-3 1. 6)1 3. 31. 3 (1 2. 0-1 5. 8)HH/m3. 90. 7 (3. 2-4. 4)2. 00. 2 (1. 9-2. 5)HW/m9. 60. 9 (8. 9-1 0. 7)5. 20. 4 (5. 1-5. 7)a1. 60. 3 (1. 1-2. 3)3 9. 04. 2 (2 9. 8-4 8. 3)2 8. 42. 0 (2 3. 9-3 2. 4)c1 0 12 1. 3 (7 2. 4-1 4 0)7. 00. 3 (6. 2-7. 6)S T/m1 4. 21. 1 (1 2. 6-1 5. 2)1 7. 81. 0 (1 7. 1-1 9. 0)9. 20. 9 (7. 6-1 0. 1)S T KH/m1. 70. 5(1. 3-1. 9)2. 00. 3 (1. 9-2. 5)1. 30. 2 (1. 2-1. 4)S T KW/m3. 50. 5 (3. 2-3. 8)4. 20. 5 (3. 8-5. 1)1. 90. 3 (1. 8-2. 0)D G O/m4. 11. 2 (3. 2-6. 3)3. 80. 4 (3. 2-4. 4)3. 00. 5 (2. 5-3. 2)T a i l/m1 0. 5 2. 3(8. 2-1 2. 6)5 46. 2(4 9-6 3)H y a l i n e t a i l t e r m i n u s/m1 6. 13. 9(1 2. 0-2 2. 1) 以上形态测计值引自K a r s s e n G 等(2 0 0 4) , 表示空白。9. 4 较小根结线虫与近似种的区别较小根结线虫与奇氏根结线虫(M.c h i t w o o d i) 和小突根结线虫(M.m i c r o t y l a) 在形态上容易混淆, 主要区别见表2。表 2 较小根结线虫与奇氏根结线虫、 小突根结线虫的主要形态区别形态特征较小根结线虫奇氏根结线虫小突根结线虫雌虫口针基部球形状横卵圆形小, 圆形到不规则形明显的圆形基部球会阴花纹小而圆, 侧 线 明 显, 背 弓 通常低圆至卵圆形, 侧线不明显无侧线, 大多数背弓中等4S N/T5 5 3 62 0 2 2表 2 较小根结线虫与奇氏根结线虫、 小突根结线虫的主要形态区别 ( 续)形态特征较小根结线虫奇氏根结线虫小突根结线虫雄虫头部头 部 不 缢 缩,头 冠 非 常高、 圆 头部不 缢 缩, 头 帽 圆, 唇 盘不高头区与虫体分离, 头架明显二龄幼虫口针口针长7. 6 m1 0. 1 m,基部球大口针长9. 0 m1 0. 3 m口针纤细, 长1 1 m 1 2 m,有小的基部球二龄幼虫尾部尾长4 9 m6 3 m, 透明尾长1 2. 0 m2 2. 1 m,末端变窄, 尾尖细圆尾长3 3 m4 9 m, 透 明尾长9 m1 2 m, 前端有明显的界限, 尾端钝圆尾长4 0 m4 8 m, 透 明尾长9 m1 0 m, 末端圆 以上奇氏根结线虫数据引自G o l d e n等(1 9 8 0) , 小突根结线虫数据引自M u l v e y等(1 9 7 5) 。1 0 较小根结线虫分子鉴定方法如通过形态鉴定方法仍不确定是否为较小根结线虫时, 可采用D NA条形码鉴定方法和实时荧光P C R方法加以验证, 具体操作步骤参见附录E。1 1 结果判定主要以成熟雌虫、 雄虫和二龄幼虫的形态特征及形态测计值作为较小根结线虫鉴定的依据, 符合9. 2形态鉴定特征及9. 3形态测计值的线虫可判定为较小根结线虫。分子鉴定方法可作为形态鉴定方法的补充和验证,D NA条形码方法的序列比对结果与N C B I中登录的序列号K X 6 7 1 1 1 3. 1 的较小根结线虫同源性高于9 9%, 且幼虫的特异性实时荧光P C R结果与较小根结线虫吻合, 则判定为较小根结线虫。1 2 样品保存若鉴定为较小根结线虫, 则将剩余的线虫杀死、 固定制成永久玻片保存; 也可以用4%甲醛固定后长期保存或线虫D E S S溶液长期保存, 具体保存方法参照S N/T 4 6 4 3。应保存的记录信息包括样品编号、 为害症状( 包括相关照片) 、 被感染材料的状态和来源、 经鉴定的有害生物的学名、 测计数据、 显微照片、 标本鉴定人、 鉴定时间、 制作人、 制作时间等信息。对含有线虫的剩余样品材料, 经记录后妥善保存。保存期至少为6个月。期满后视情况作销毁处理。5S N/T5 5 3 62 0 2 2附 录 A( 资料性)较小根结线虫基本信息A. 1 寄主范围自然寄主: 匍匐剪股颖(A g r o s t i s s t o l o n i f e r a) 、 琉璃繁缕(A n a g a l l i s a r v e n s i s) 、 羊茅属(F e s t u c a s p .) 、 黑莱苜蓿(M e d i c a g o l u p u l i n a) 、 梯牧草(P h l e u m p r a t e n s e) 、 莓系属牧草(P o a s p .) 、 马铃薯(S o -l a n u m t u b e r o s u m) 、 三叶草属(T r i f o l i u m s p .) 、 红三叶草(T.p r e t e n s e) 、 白三叶草(T.r e p e n s) 。实验寄主: 燕麦(A v e n a s a t i v a) 、 胡萝卜(D a u c u s c a r o t a) 、 大麦(H o r d e u m v u l g a r e) 、 莴苣(L a c t u c a s a t i v a) 、 黑麦草属(L o l i u m s p .) 、 多花黑麦草(L.m u l t i f l o r u m) 、 黑麦草(L.p e r e n n e) 、 西红柿(L y c o p e r -s i c o n e s c u l e n t u m) 、 苜蓿(M e d i c a g o s a t i v a) 、 法色草(P h a c e l i a t a n a c e t i f o l i a) 、 小麦(T r i t i c u m s a t i v u m) 、窄叶野豌豆(V i c i a s a t i v a) 。A. 2 地理分布欧洲: 荷兰、 比利时、 爱尔兰、 葡萄牙和英国;大洋洲: 新西兰;北美洲: 美国;南美洲: 智利。A. 3 危害症状较小根结线虫的危害主要以二龄幼虫侵入寄主植物根部、 块茎等地下部位, 使受害部位皮层增厚、肿大, 形成根结, 同时受害块茎的皮层产生很多小的褐色坏死组织。地上部分危害严重时表现出发育不良、 黄化、 萎蔫、 变色等症状, 这也是该线虫侵染草坪草1年2年后地上部表现的典型症状。A. 4 传播途径较小根结线虫最可能的传播途径是随商品马铃薯、 种薯的贸易运输, 草皮移植, 高尔夫相关设备的调运, 球场、 运动场等草坪保养工具的交叉使用等方式进行远距离传播。A. 5 生物学特性较小根结线虫属于兼性减数孤雌生殖, 染色体数n=1 7, 卵的最佳孵化温度为2 0 2 5 , 低于1 0 一般不孵化。每年的5月和9月是较小根结线虫的繁殖高峰期, 完成一个生活周期从卵到成熟雌虫或雄虫约1 2周。该线虫在草坪草等寄主植物上1年可以繁殖3代。6S N/T5 5 3 62 0 2 2附 录 B( 规范性)较小根结线虫形态墨线图说明:A 二龄幼虫;B 二龄幼虫食道区;CE 二龄幼虫尾部;F 雄虫头部;G 雄虫交合刺;H 雌虫头部;I 雌虫口针;J M 雌虫形状。图 B. 1 较小根结线虫墨线图( 引自K a r s s e n G 等,2 0 0 4)7S N/T5 5 3 62 0 2 2附 录 C( 规范性)较小根结线虫形态显微图说明:A 前体部;B 口针;C 中食道球;DF 会阴花纹;标尺 AF=1 0 m。图 C. 1 较小根结线虫雌虫显微图( 引自K a r s s e n G 等,2 0 0 4)8S N/T5 5 3 62 0 2 2说明:AC 雄虫头部;D 雄虫尾部;标尺 AD=1 0 m。图 C. 2 较小根结线虫雄虫显微图( 引自K a r s s e n G 等,2 0 0 4)说明:A 前体部;B 体中部;C,D 尾部;标尺 AD=1 0 m。图 C. 3 较小根结线虫二龄幼虫显微图( 引自K a r s s e n G 等,2 0 0 4)9S N/T5 5 3 62 0 2 2附 录 D( 规范性)较小根结线虫电镜图说明: A 颈区;B 颈区侧面;C 体前端和排泄孔;D 体前端;E 头部正面观;F 会阴花纹。标尺 A. C. F=1 0 m,B. D. E=1 m。图 D. 1 较小根结线虫雌虫电镜图( 引自K a r s s e n G 等,2 0 0 4)01S N/T5 5 3 62 0 2 2说明:A 体前端;B 排泄孔;CD 侧区;E 近排泄孔位置的腹面观;F 尾部;标尺 AD,F=1 m,E=1 0 m。图 D. 2 较小根结线虫雄虫电镜图( 引自K a r s s e n G 等,2 0 0 4)11S N/T5 5 3 62 0 2 2附 录 E( 资料性)较小根结线虫分子检测方法E. 1 D N A条形码检测方法E. 1. 1 通用引物序列核糖体2 8 S基因D 2 D 3区引物序列( 参考D e L e y 等,1 9 9 9) :上游引物D 2 A:A C AAG T A C C G T GAG G GAAAG T T G,下游引物D 3 B:T C G GAAG GAA C C AG C T A C T A。E. 1. 2 单条线虫D N A提取操作方法见S N/T 4 7 2 32 0 1 6中附录F。E. 1. 3 D N A条形码扩增、 电泳及测序操作方法见S N/T 4 7 2 32 0 1 6中附录I。E. 1. 4 D N A条形码序列分析E. 1. 4. 1 序列拼接使用C h o r m a s软件或其他序列分析软件, 对核糖体2 8 S基因测序得到的双向峰图文件进行拼接,去除引物区, 获得相应的D NA序列, 序列方向应与P C R扩增正向引物方向一致。E. 1. 4. 2 B L A S T比对结果分析登陆N C B I网站中的B L A S T(b a s i c l o c a l a l i g n m e n t s e a r c h t o o l) 页面(h t t p s: / /b l a s t . n c b i . n l m.n i h. g o v/B l a s t . c g i) , 将测序拼接得到的D NA序列与N C B I中登录的较小根结线虫序列进行比对, 与登录号为K X 6 7 1 1 1 3. 1 的较小根结线虫序列同源性高于9 9%, 则该线虫可判定为较小根结线虫。E. 2 实时荧光P C R检测方法注: 实时荧光P C R方法引自W e e r d t等,2 0 1 1, 该方法仅对较小根结线虫的幼虫具有特异性。E. 2. 1 特异性引物和探针序列引物序列:Mm i n o r_f 2 9 9 :5- C C G T GA C T GAAT AT GAG G T GA - 3 ;Mm i n o r_r 3 6 2 :5- GAG G C T C AT T AAG T C T T A C GAT T AT - 3 ;探针序列:P_Mm_MG B 3 2 1 :5- F AM - AT G T T AG GAT T AT C G - MG B N F Q - 3 。E. 2. 2 单条线虫D N A提取操作方法见S N/T 4 7 2 32 0 1 6中附录F。E. 2. 3 实时荧光P C R反应体系(3 0 L)P C R预混液: 含 d NT P(d UT P) 2 0 0 m,5 mM M g C l2;1X P C R缓冲液: 含R O X荧光染料;D NA聚合酶:0. 7 5 U; 探针:0. 3 mm; 上下游引物各0. 3 mm; 模板D NA:2 L(1 n g/L) ;H2O补21S N/T5 5 3 62 0 2 2足至3 0 L。E. 2. 4 实时荧光P C R反应条件5 0 ,2 m i n降解D NA,9 5 ,1 0 m i n灭活; 然后9 5 变性1 5 s,5 8 退火1 m i n;4 0个循环。E. 2. 5 实时荧光P C R结果分析通过特异性扩增,C t值小于3 0, 扩增片段长度为6 4 b p, 可判定为较小根结线虫。31S N/T5 5 3 62 0 2 2参 考 文 献 1 谢辉.植物线虫分类学( 第二版) M.北京: 高等教育出版社,2 0 0 5.2 简恒.植物线虫学M.北京: 中国农业出版社,2 0 1 1.3 A n d r e a S k a n t a r,Z a f a r A H a n d o o,M a r i a N H u l t . O c c u r r e n c e o f M e l o i d o g y n e f a l l a x i n N o r t h Am e r i c a,a n d M o l e c u l a r C h a r a c t e r i z a t i o n o f M. f a l l a x a n d M. m i n o r f r o m U. S. G o l f C o u r s e G r e e n s . P l a n t D i s e a s e,2 0 1 3,9 7 (1 1) :1 4 2 4 - 1 4 3 0.4 H o l o v a c h o v O,V a n M e g e n H,B o n g e r s T,e t a l . A p h y l o g e n e t i c t r e e o f n e m a t o d e s b a s e d o n a b o u t 1 2 0 0 f u l l - l e n g t h s m a l l s u b u n i t r i b o s o m a l D NA s e q u e n c e s . N e m a t o l o g y,2 0 0 9,1 1(6) :9 2 7 - 9 5 0.5 G o l d e n A M,OB a n n o n J H,S a n t o G S,e t a l . D e s c r i p t i o n a n d S EM O b s e r v a t i o n s o f M e l o i -d o g y n e c h i t w o o d i n . s p .(M e l o i d o g y n i d a e) ,a R o o t - k n o t N e m a t o d e o n P o t a t o i n t h e P a c i f i c N o r t h w e s t .J o u r n a l o f n e m a t o l o g y,1 9 8 0,1 2(4) :3 1 9 - 3 2 7.6 K a r s s e n G,B o l k R J,v a n A e l s t A C,e t a l . D e s c r i p t i o n o f M e l o i d o g y n e m i n o r n . s p (N e m a -t o d a:M e l o i d o g y n i d a e) ,a r o o t - k n o t n e m a t o d e a s s o c i a t e d w i t h y e l l o w p a t c h d i s e a s e i n g o l f c o u r s e s . N e m -a t o l o g y,2 0 0 4,6 (1) :5 9 - 7 2.7 M c C l u r e,M A,N i s c h w i t z C,S k a n t a r A M,e t a l . R o o t - k n o t n e m a t o d e s i n g o l f c o u r s e g r e e n s o f t h e w e s t e r n U n i t e d S t a t e s . P l a n t D i s e a s e,2 0 1 2,9 6:6 3 5 - 6 4 7.8 M o r r i s K S,H o r g a n F G,D o w n e s M J,e t a l . T h e e f f e c t o f t e m p e r a t u r e o n h a t c h a n d a c t i v i t y o f s e c o n d - s t a g e j u v e n i l e s o f t h e r o o t - k n o t n e m a t o d e,M e l o i d o g y n e m i n o r,a n d e m e r g i n g p e s t i n n o r t h -w e s t E u r o p e . N e m a t o l o g y,2 0 1 1,1 3 (8) :9 8 5 - 9 9 3.9 M o r r i s K S,H o r g a n F G,G r i f f i n C T. S p a t i a l a n d t e m p o r a l d y n a m i c s o f M e l o i d o g y n e m i n o r o n c r e e p i n g b e n t g r a s s i n g o l f g r e e n s . P l a n t P a t h o l o g y,2 0 1 2,6 2 (5) :1 1 6 6 - 1 1 7 2.1 0 M u l v e y R H,T o w n s h e n d J L,P o t t e r J W.M e l o i d o g y n e m i c r o t y l a s p . n o v . f r o m s o u t h -w e s t e r n O n t a r i o,C a n a d a . C a n a d i a n J o u r n a l o f Z o o l o g y,1 9 7 5,1 1(5 3) :1 5 2 8 - 1 5 3 6.1 1 T h o d e n T C,K o r t h a l s G W,V i s s e r J,e t a l . A f i e l d s t u d y o n t h e h o s t s t a t u s o f d i f f e r e n t c r o p s f o r M e l o i d o g y n e m i n o r a n d i t s d a m a g e p o t e n t i a l o n p o t a t o e s . N e m a t o l o g y,2 0 1 2,1 4:2 7 7 - 8 4.1 2 T u r n e r S J,F l e m i n g C.M e l o i d o g y n e m i n o r:A t h r e a t t o t e m p e r a t e c r o p s . C o mm u n i c a t i o n s i n A g r i c u l t u r a l a n d A p p l i e d B i o l o g i c a l S c i e n c e s,2 0 0 5,7 0 (4) :8 8 5 - 8 8 7.1 3 Z h a o Z Q,H o W,G r i f f i n R,e t a l . F i r s t r e c o r d o f t h e r o o t k n o t n e m a t o d e,M e l o i d o g y n e m i -n o r i n N e w Z e a l a n d w i t h d e s c r i p t i o n,s e q u e n c i n g i n f o r m a t i o n a n d k e y t o k n o w n s p e c i e s o f M e l o i d o g y n e i n N e w Z e a l a n d . Z o o t a x a,2 0 1 7,4 2 3 1(2) :z o o t a x a . 4 2 3 1. 2. 4 - z o o t a x a . 4 2 3 1. 2. 4.1 4 M e a r j a n n e d e W e e r d t,L i n d a K o x,L i e v e n W a e y e n b e r g e,e t a l . A R e a l - t i m e P C R A s s a y t o I d e n t i f y M e l o i d o g y n e m i n o r . J P h y t o p a t h o l,2 0 1 1,1 5 9:8 0 - 8 4.41S N/T5 5 3 62 0 2 2