DB65∕T 4260-2019 薰衣草优质种苗组培快繁生产技术规程(新疆维吾尔自治区).pdf

ICS 65. 020. 20 861 DB65 新疆维吾尔自治区地方标准DB 65/T 4260-2019 慧衣草优质种苗组培快繁生产技术规程Technical regulations for rapid propagation of quality lavender seedlings by tissue culture 2019 -09 -01发布2019-10-01实施新疆维吾尔自治区市场监督管理局发布n 4 DB65/T 4260-2019 目IJ吕本标准依据GB/T1. 1-2009 标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写的要求编写。本标准由新疆农业科学院园艺作物研究所提出。本标准由新疆维吾尔自治区农业农村厅归口并组织实施。本标准主要起草单位:新疆农业科学院园艺作物研究所、新疆伊犁霍城县农业技术推广站。本标准主要起草人:廖晴、韩宏伟、龚松旺、玛尔哈巴吾斯满、周斌、刘巧玲、柳建文。对本标准实施应用中的疑问，请咨询新疆农业科学院园艺作物研究所、新疆伊犁霍城县农业技术推广站。对本标准的修改意见建议，请反馈至新疆维吾尔自治区市场监督管理局(乌鲁木齐市新华南路167号)、新疆维吾尔自治区农业农村厅、新疆农业科学院园艺作物研究所、新疆伊犁霍城县农业技术推广站。新疆维吾尔自治区市场监督管理局联系电话:[phone];传真:[phone];邮编:830004 新疆维吾尔自治区农业农村厅联系电话[phone];传真[phone];邮编830049新疆农业科学院园艺作物研究所联系电话[phone];传真[phone];邮编830091I :1 DB65/T 4260-2019 慧衣草优质种苗组培快繁生产技术规程1 范围本标准规定了德国莺尾优质种茵组织培养的术语和定义、生产及技术流程、抑制驯化及种苗采收分级要求。本标准适用于熏衣草试管苗及优质种苗工厂化生产。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 19489实验室生物安全通用要求GB/T 603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 22278良好实验室规范原则NY/T 2306-2013花卉种苗组培快繁技术规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1 慧衣草lavender又名香水植物，灵香草，香草，黄香草，拉文德。唇形科、熏衣草属小灌木，茎直立，叶形花色优美典雅，蓝紫色花序顾长秀丽，是庭院中一种新的多年生耐寒花卉，适宜花径丛植或条植，也可盆栽观赏。3. 2 外植体explant植物组织培养所用植物组织的材料。3. 3 增殖培养multiplicationculture 把外植体初次培养获得的无茵茵转移到新的培养基中，反复多次进行培养，从而使培养植株得以成倍增殖的过程。3.4 DB65/T 4260-2019 诱导培养inducedculture 是一种生物工程培养方法，用不同的诱导培养基培养出想要得到的目标生物，培养基中可用特定的激素，抗体等方法特异性的得到目标生物。3.5 继代培养subculture继代培养是指对来自于外植体所增殖的培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代的培养。3.6 生根培养rootingculture 指组织培养过程中，当愈伤材料增殖到一定数量后，将部分培养物转移到生根培养基上，诱导无根苗生根的过程。3. 7 褐化browning褐化是由于组织中的多盼氧化酶在氧气的参与下，使盼类物质被氧化后产生褐色酿类物质，逐渐扩散至培养基中，抑制其他酶的活性，毒害培养的外植体材料。3.8 玻璃化vitrification玻璃化是一种生理病害，植株会出现茎叶半透明，水浸状的现象，细胞由于丧失持水能力，细胞内水分大量外渗，增加了植株水分的散失和蒸腾，易引起植株死亡。4 慧衣草组织培养的生产及技术流程4. 1 实验室要求实验室包括:药品室、洗涤室、准备室、接种室、培养室、档案室，同时配备完善的水、电、暖供应系统。实验室应符合GB19489和GB/T22278要求。4. 2 培养基及其配制4.2.1 母液的配制和保存将常用药品配制成比所需浓度高50倍-100倍的母液，药品配制严格按照GB/T603规定方法配制。所用水执行分析实验室用水规格和试验方法标准(GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法标准)。德国莺尾组织培养以MS培养基为基本培养基，配制好的母液分别贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期。母液贮存在2oC-4 oC的冰箱中。贮藏时间在3个月之内如有霉菌和沉淀产生，则不得使用。4.2.2 不溶于水药品溶解方法基本培养基由药品、白砂糖、琼脂、水组成。按照流程图(罔1.)自己制培养基，所需白砂糖的浓度2 P 什是20g/L，琼脂粉的浓度是5g/L。4. 2. 3 培养基配制DB65/T 4260-2019 基本培养基由药品、白砂糖、琼脂、水组成。按照流程图1配制培养基，所需白砂糖的浓度是20g/L, 琼脂粉的浓度是5g/L。| 接神| 图1.培养基配制流程图4.2.3.1 诱导培养基配制配方为MS+6-BA(1.0 mg/L) ，按照培养基配制程序配制。4.2.3.2 增殖培养基配制配方为MS+6-BA(1.0 mg/L) +IBA (0.3 mg/L) ，按照培养基配制程序配制。4.2.3.3 生根培养基配制配方为1/2MS+NAA(0.5 mg/L) ，按照培养基配制程序配制。4.2.4 PH值的调整熏衣草培养基最佳PH值为5.8。用酸度计测定调整，也可使用精密PH值试纸测定调整(应在干燥器中保存，以免吸湿而失效)。常用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl来调节。4.2.5 培养基的分装和贝茵配制好的培养基趁热分装，分装量以占培养容器的1/41/3为宜。勿将培养基沽到瓶口和外壁上，以免杂菌污染。分装后立即加盖，不同的处理做好标记，分装后进行灭菌，在压力表读数为1.1 kg/cm - 1. 3 kg/ cm 2、1210C状态下保持20miD25 miD。4. 3 消毒与灾菌4.3.1 无菌工作条件保持组培室清洁卫生。必要时用75%乙醇喷雾使空气的灰尘沉降。接种室与培养室每隔3个月密闭门窗，用高锚酸甲:甲四至3:5的药进行熏蒸10h-12 h，然后打开门窗通风换气。4. 3. 2 无菌操作要求3 DB65/T 4260-2019 工作台面用75%乙醇擦拭。并用紫外线照射20min。工作人员用肥皂水洗手，上工作台后用75%乙醇擦拭双手和培养容器外表面。接种时禁止谈话并戴上口罩。整个接种工作在近火焰处进行。接种完后，立刻盖好瓶口。4. 3. 3 接种工具的消毒接种工具用纸或白布包裹在高压锅中灭菌，接种时上超净台取出。超净台上的消毒酒精要经常更换。4.3.4 外植体的消毒将清洗干净的熏衣草优良品种优选优株枝条，用自来水流水冲洗60min后，在超净工作台上用75%乙醇浸泡10s-20 s，以无菌水冲洗2次，再用0.1%升末消毒5min8 min，再用无菌水冲洗5-6次后即可接种。4.4 慧衣草组织培养技术流程图按照组织培养流程图2，诱导熏衣草外植体产生愈伤组织，并进行继代、生根培养，最后移栽驯化，获得优质种苗。图2.熏衣草组织培养技术流程图4.5 培养材料及接种4.5.1 培养材料的选择外植体选择无病虫伤害、健壮的熏衣草优良品种优选优株枝条。4.5.2 接种将消毒好的熏衣草优良品种优选优株枝条切成带2个3个茎节的茎段，接种到MS培养基上，芽尖朝上插子培养基中固定。接种后做好标记，写明材料名称、接种日期。4.6 试管苗初代培养4.6.1 培养环境保证外植体和培养基的无菌状态及培养室良好清洁环境条件。4.6.2 培养温度与光照熏衣草最适宜的培养温度250C1: 20C ，光照强度为1500Lx2000 Lx，光照时间为12h/d。4 DB65/T 4260-2019 4.6.3 诱导培养当接种的熏衣草侧芽长到2cm-3 cm，切下茎段，接种到诱导培养基培养。将接种好的培养瓶放置在条件适宜的培养架上，培养30d左右，形成丛生芽和愈伤组织。4. 7 试管苗的增殖培养熏衣草增殖培养适宜温度250CI20C，光照强度为1500Lx2000 Lx，光照时间为12h/d。当初代培养形成的丛生芽长到培养瓶的2/3时，转接至增殖培养基上。培养周期25d30 d。然后不断的重复继代，继代次数最好不要超过15代。4. 8 试管苗的生根培养生根培养适宜温度250CI20C，光照强度为3000Lx5000 Lx，光照时间为14h/d。将增殖培养出的丛生芽，分成3校5枝为一丛，接种在生根培养基上。20d25 d就可生根。5 移栽驯化5. 1 清洗选择生长健壮的试管生根丛苗，打开瓶盖，清洗干净植株根部附着的培养基。5.2 移栽驯化春季将植株定植于草炭土:珍珠岩=2:1，厚15cm的温室苗床上，定植完成后浇透水，喷施50%多菌灵可湿性粉剂1000倍;夜进行消毒后，搭建小拱棚，覆上薄膜，用75%的遮阳网遮阳，保持温度250C左右，相对湿度85%，每天通风1次2次，通风时间由10min逐渐增加至全天，一般揭膜前不用再浇水，只是在通风时稍喷一些清水在叶面上，20 d-25 d后撤去薄膜，进行种苗正常管理。5. 3 苗期管理53. 1 肥水管理根据天气情况及时浇水，保持基质内含水量50%-60%，每隔7d，用与MS浓度相当的大量元素配制营养液稀释10倍进行喷施，保证供给植株营养，整个生长期间保持温度250C左右，遮阳率75%左右，使组培苗健康生长。5.3.2 病虫害防治q 坚持预防为主，综合防治的植保方针，主要病害为根腐病，可选用乙蒜素或木霉菌等高效低毒的生物源药剂防治;主要害虫为跳甲，可通过围设防虫网、悬挂黄板或白板等物理防治措施防止害虫侵入，诱杀害虫，或选用苏云金杆菌500倍1000倍液，或40%菊马乳油2000倍3000倍液等高效低毒药剂喷雾防治，喷雾式时间应选在成虫活动盛期，采用围歼法，从田块的四周向中心喷雾，可防治成虫跳至相邻田块，以提高防效。6 种苗采收和质量标准6. 1 采收组培苗生长120d后，85%的植株丛生，株高30cm时，即可采收出售。5 ,1 D865/丁4260-20196.2 质量标准熏衣草优质种茵的质量标准应符合NY/T2306-2013的要求:6.2.1 株形:苗健壮、挺拔，株形丰满、完整，叶片大小协调，叶色具有母本特性、有光泽。6.2.2 根系:应具有完整而发达的根系，不倒伏。6.2.3 苗高:种苗矮壮敦实，一般25cffi-35 Cffio 6.2.4 叶片数:具有较多的叶片数，一般5片以上。6.2.5 整齐度:同一批次95%以上的种苗高度一致。6.2.6 纯度:同一批次种苗变异率低于5%。6.2.7 病虫害状况:种苗上无检疫性病虫害发生，无其他侵染性和非侵染性病害及虫害的危害症状。6