GB 1903.69-2024 食品安全国家标准 食品营养强化剂 5'-单磷酸尿苷.pdf

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B1 9 0 3.6 92 0 2 4食品安全国家标准食品营养强化剂 5 -单磷酸尿苷 2 0 2 4-0 2-0 8发布2 0 2 4-0 8-0 8实施中华人民共和国国家卫生健康委员会国 家 市 场 监 督 管 理 总 局发 布食品安全国家标准食品营养强化剂 5 -单磷酸尿苷1 范围本标准适用于以酵母核糖核酸为原料经酶解法,或以核苷为原料经酶促法制得的食品营养强化剂5 -单磷酸尿苷。2 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量2.1 化学名称5 -单磷酸尿苷2.2 分子式C9H1 3N2O9P2.3 结构式2.4 相对分子质量3 2 4.1 8(按2 0 1 8年国际相对原子质量)3 技术要求3.1 感官要求感官要求应符合表1的规定。表1 感官要求项目要求检验方法色泽白色或类白色状态结晶状颗粒或粉末气味无特殊气味取适量试样,置于清洁、干燥的白瓷盘中,在自然光线下观察其色泽和状态,嗅其气味1G B1 9 0 3.6 92 0 2 43.2 理化指标理化指标应符合表2的规定。表2 理化指标项目指标检验方法5 -单磷酸尿苷含量(以干基计),w/%9 5.0附录A中A.4吸光度比A2 5 0n m/A2 6 0n m0.7 00.7 8A2 8 0n m/A2 6 0n m0.3 40.4 2附录A中A.5水分,w/%1 0.0G B5 0 0 9.3第四法 卡尔费休法有关物质,w/%2.0附录A中A.6p H(0.2 5%水溶液)1.82.5G B/T9 7 2 4乙醇/(m g/k g)10 0 0附录A中A.7铅(P b)/(m g/k g)1.0附录A中A.8总砷(以A s计)/(m g/k g)2.0附录A中A.93.3 微生物限量微生物限量应符合表3的规定。表3 微生物限量项目限量检验方法菌落总数/(C F U/g)10 0 0G B4 7 8 9.2霉菌和酵母菌总数/(C F U/g)1 0 0G B4 7 8 9.1 5大肠菌群/(MP N/g)3G B4 7 8 9.3沙门氏菌/2 5g不得检出G B4 7 8 9.42G B1 9 0 3.6 92 0 2 4附 录 A检验方法A.1 警示本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性,使用时需小心谨慎并按照相关规定操作。若溅到皮肤上应立即用水冲洗,严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时,要在通风橱中进行。A.2 一般规定除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯试剂和G B/T6 6 8 2中规定的一级水。试验方法中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品,在没有注明其他要求时,均按G B/T6 0 1、G B/T6 0 2和G B/T6 0 3的规定制备。所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液。A.3 鉴别试验A.3.1 试剂和材料A.3.1.1 盐酸(HC l):3 6%3 8%。A.3.1.2 磷酸二氢钾(KH2P O4)。A.3.1.3 三水合磷酸氢二钾(K2H P O43 H2O)。A.3.1.4 5 -单磷酸尿苷标准品(C9H1 3N2O9P,C A S号:5 8-9 7-9):纯度9 8%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。A.3.1.5 盐酸溶液:移取1m L盐酸,溶于水并定容至10 0 0m L。A.3.1.6 磷酸二氢钾溶液(0.1m o l/L):称取1 3.6g磷酸二氢钾,溶于水并定容至10 0 0m L。A.3.1.7 磷酸氢二钾溶液(0.1m o l/L):称取2.2 8g三水合磷酸氢二钾,溶于水并定容至1 0 0m L。A.3.1.8 流动相:0.1m o l/L磷酸二氢钾溶液(A.3.1.6),用0.1m o l/L的磷酸氢二钾溶液(A.3.1.7)调p H至5.6,过滤膜,备用。A.3.1.9 微孔滤膜:0.4 5m,水系。A.3.2 仪器和设备A.3.2.1 电子天平:感量为0.0 0 1g。A.3.2.2 紫外-可见光分光光度计。A.3.2.3 高效液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。A.3.2.4 p H计:精度为0.0 1。A.3.2.5 石英比色皿:1c m。A.3.3 紫外最大吸收峰鉴别A.3.3.1 分析步骤A.3.3.1.1 试样溶液的制备称取试样0.0 2g(精确至0.0 0 1g),用盐酸溶液(A.3.1.5)溶解并定容至10 0 0m L,混匀,作为试样溶液。3G B1 9 0 3.6 92 0 2 4A.3.3.1.2 测定将试样溶液(见A.3.3.1.1)注入1c m石英比色皿,以盐酸溶液(A.3.1.5)为空白,用紫外-可见光分光光度计A.3.2.2测定其吸光度,最大吸收值应在(2 6 22)n m处。A.3.4 液相色谱保留时间鉴别A.3.4.1 分析步骤A.3.4.1.1 试样溶液的制备称取试样0.0 2g(精确至0.0 0 1g),用流动相(A.3.1.8)溶解并定容至1 0m L。移取该溶液1.0 0m L,用流动相稀释并定容至1 0 0m L,混匀,过滤膜,作为试样溶液。A.3.4.1.2 对照溶液的制备称取5 -单磷酸尿苷标准品0.0 2g(精确至0.0 0 1g),用流动相(A.3.1.8)溶解并定容至1 0m L。移取该溶液1.0 0m L,用流动相稀释并定容至1 0 0m L,混匀,作为对照溶液。A.3.4.1.3 色谱参考条件a)色谱柱:C1 8色谱柱(柱长2 5 0mm,内径4.6mm,粒径5m),或等效色谱柱。b)检测波长:2 5 4n m。c)流动相:同A.3.1.8。d)流速:1.0m L/m i n。e)柱温:3 0。f)进样体积:2 0L。A.3.4.1.4 系统适应性试验将对照溶液(见A.3.4.1.2)注入液相色谱仪中,记录色谱图。5 -单磷酸尿苷主峰与它最近的杂质峰的分离度R应不小于2.0。连续进样6次,5 -单磷酸尿苷峰面积的相对标准偏差(R S D)应不大于2.0%。A.3.4.1.5 测定将试样溶液(见A.3.4.1.1)及对照溶液(见A.3.4.1.2)分别注入液相色谱仪中,记录色谱图。两者的主峰保留时间应一致,相对偏差2.5%。A.4 5 -单磷酸尿苷含量(以干基计)A.4.1 紫外分光光度法A.4.1.1 方法原理采用紫外-可见光分光光度计,测定2 6 0n m处试样溶液的吸光度值,以摩尔吸光系数计算试样中5 -单磷酸尿苷的含量。A.4.1.2 试剂和材料A.4.1.2.1 盐酸(HC l):3 6%3 8%。A.4.1.2.2 盐酸溶液:移取1m L盐酸,溶于水并定容至10 0 0m L。4G B1 9 0 3.6 92 0 2 4A.4.1.3 仪器和设备A.4.1.3.1 电子天平:感量为0.0 0 1g。A.4.1.3.2 紫外-可见光分光光度计。A.4.1.3.3 石英比色皿:1c m。A.4.1.4 分析步骤称取0.5g(精确至0.0 0 1g)样品,用盐酸溶液(A.4.1.2.2)溶解并定容至10 0 0m L。移取该溶液1 0.0m L,用盐酸溶液稀释并定容至2 5 0m L,该溶液即为试样溶液。将试样溶液注入1c m的石英比色皿中,以盐酸溶液做空白,用紫外-可见光分光光度计测定其在2 6 0n m处的吸光度。A.4.1.5 结果计算试样中5 -单磷酸尿苷的质量分数(以干基计)w1的数值以百分比(%)表示,按式(A.1)计算。w1=AMVfbm1 0 01 0 0-w1 0 0(A.1)式中:A 试样溶液在波长2 6 0n m下的吸光度;M 5 -单磷酸尿苷的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/m o l)M=3 2 4.1 8;V 试样定容体积,单位为升(L);f 试样溶液的稀释倍数(f=2 5);5 -单磷酸尿苷在2 6 0n m处的摩尔吸收系数,单位为升每摩尔厘米L/(m o lc m)(=99 0 0);b 比色皿厚度,单位为厘米(c m);m 试样的质量,单位为克(g);w 试样的水分含量,以%表示。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留小数点后一位。两次独立测定结果的绝对差值不超过其算术平均值的2%。A.4.2 高效液相色谱法A.4.2.1 方法原理采用液相色谱仪,测定试样溶液,以保留时间定性,峰面积外标法定量。A.4.2.2 试剂和材料A.4.2.2.1 磷酸二氢钾(KH2P O4)。A.4.2.2.2 三水合磷酸氢二钾(K2H P O43 H2O)。A.4.2.2.3 5 -单磷酸尿苷标准品(C9H1 3N2O9P,C A S号:5 8-9 7-9):纯度9 8%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。A.4.2.2.4 磷酸二氢钾溶液(0.1m o l/L):称取1 3.6g磷酸二氢钾,溶于水并定容至10 0 0m L。A.4.2.2.5 磷酸氢二钾溶液(0.1m o l/L):称取2.2 8g三水合磷酸氢二钾,溶于水并定容至1 0 0m L。A.4.2.2.6 流动相:0.1m o l/L磷酸二氢钾溶液(A.4.2.2.4),用0.1m o l/L的磷酸氢二钾溶液(A.4.2.2.5)调p H至5.6,过滤膜,备用。A.4.2.2.7 5 -单磷酸尿苷标准储备液(20 0 0m g/L):准确称取5 -单磷酸尿苷标准品0.0 2g(精确至5G B1 9 0 3.6 92 0 2 40.0 0 01g)于1 0m L容量瓶中,用流动相(A.4.2.2.6)溶解并定容至刻度,配制成质量浓度20 0 0m g/L标准储备液。4下保存。A.4.2.2.8 5 -单磷酸尿苷标准工作溶液(2 0 m g/L):移取20 0 0 m g/L的标准储备液(A.4.2.2.7)1.0 0m L于1 0 0m L量瓶中,用流动相(A.4.2.2.6)稀释至刻度。A.4.2.2.9 微孔滤膜:0.4 5m,水系。A.4.2.3 仪器和设备A.4.2.3.1 电子天平:感量为0.0 0 01g。A.4.2.3.2 高效液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。A.4.2.3.3 p H计:精度为0.0 1。A.4.2.4 分析步骤A.4.2.4.1 试样溶液的制备称取试样0.0 2g(精确至0.0 0 01g),用流动相溶解并定容至1 0m L。移取该溶液1.0 0m L,用流动相(A.4.2.2.6)稀释并定容至1 0 0m L,混匀,过滤膜,作为试样溶液。A.4.2.4.2 色谱参考条件a)色谱柱:C1 8色谱柱(柱长2 5 0mm,内径4.6mm,粒径5m),或等效色谱柱。b)检测波长:2 5 4n m。c)流动相:同A.4.2.2.6。d)流速:1.0m L/m i n。e)柱温:3 0。f)进样体积:2 0L。A.4.2.4.3 系统适应性试验取5 -单磷酸尿苷标准工作溶液(A.4.2.2.8),注入液相色谱仪中,记录色谱图。5 -单磷酸尿苷主峰与它最近的杂质峰的分离度R应不小于2.0。连续进样6次,5 -单磷酸尿苷峰面积的相对标准偏差(R S D)应不大于2.0%。A.4.2.4.4 测定系统适用性试验合格后,将5 -单酸尿苷标准工作溶液(见A.4.2.2.8)及试样溶液(见A.4.2.4.1)分别注入液相色谱仪中,记录色谱图,参考色谱图见附录B中图B.1,按外标法进行计算。A.4.2.5 结果计算试样中5 -单磷酸尿苷的质量分数(以干基计)w2的数值以百分比(%)表示,按式(A.2)计算。w2=A1A2C2C11 0 01 0 0-w1 0 0(A.2)式中:A1 试样溶液中5 -单磷酸尿苷的峰面积;A2 标准溶液中5 -单磷酸尿苷的峰面积;C2 标准溶液中5 -单磷酸尿苷的质量浓度,单位为毫克每升(m g/L);C1 试样溶液中样品的质量浓度,单位为毫克每升(m g/L);6G B1 9 0 3.6 92 0 2 4w 试样的水分含量,以%表示。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留小数点后一位。两次独立测定结果的绝对差值不得超过其算术平均值的2%。A.5 吸光度比A.5.1 方法原理通过测定试样溶液在特定波长处的吸光度比值来表示试样的纯度。A.5.2 试剂和材料A.5.2.1 盐酸(HC l):3 6%3 8%。A.5.2.2 盐酸溶液:移取1m L盐酸,溶于水并定容至10 0 0m L。A.5.3 仪器和设备A.5.3.1 电子天平:感量为0.0 0 1g。A.5.3.2 紫外-可见光分光光度计。A.5.3.3 石英比色皿:1c m。A.5.4 分析步骤A.5.4.1 试样溶液的制备称取试样0.0 2g(精确至0.0 0 1g),用盐酸溶液(A.5.2.2)溶解并定容至10 0 0m L,混匀,作为试样溶液。A.5.4.2 测定将试样溶液(见A.5.4.1)注入1c m石英比色皿,以盐酸溶液(A.5.2.2)为空白,用紫外-可见光分光光度计分别测定2 5 0n m、2 6 0n m及2 8 0n m处的吸光度。A.5.5 结果计算紫外吸光度比值X1和X2分别按式(A.3)和式(A.4)计算。X1=A2 5 0A2 6 0(A.3)X2=A2 8 0A2 6 0(A.4)式中:A2 5 0 试样溶液在波长2 5 0n m处测得的吸光度;A2 6 0 试样溶液在波长2 5 0n m处测得的吸光度;A2 8 0 试样溶液在波长2 5 0n m处测得的吸光度。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留两位有效数字。两次独立测定结果的绝对差值不得超过其算术平均值的5%。A.6 有关物质A.6.1 方法原理试样用流动相溶解后,采用液相色谱仪检测,峰面积比较法定量。7G B1 9 0 3.6 92 0 2 4A.6.2 试剂和材料A.6.2.1 磷酸二氢钾(KH2P O4)。A.6.2.2 三水合磷酸氢二钾(K2H P O43 H2O)。A.6.2.3 5 -单磷酸尿苷标准品(C9H1 3N2O9P,C A S号:5 8-9 7-9):纯度9 8%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。A.6.2.4 尿苷(C9H1 2N2O6):纯度9 8%。A.6.2.5 尿嘧啶(C4H4N2O2):纯度9 8%。A.6.2.6 磷酸二氢钾溶液(0.1m o l/L):称取1 3.6g磷酸二氢钾,溶于水并定容至10 0 0m L。A.6.2.7 磷酸氢二钾溶液(0.1m o l/L):称取2.2 8g三水合磷酸氢二钾,溶于水并定容至1 0 0m L。A.6.2.8 流动相:0.1m o l/L磷酸二氢钾(A.6.2.6),用0.1m o l/L的磷酸氢二钾(A.6.2.7)调p H至5.6,过滤膜,备用。A.6.2.9 微孔滤膜:0.4 5m,水系。A.6.3 仪器和设备A.6.3.1 电子天平:感量为0.0 0 1g。A.6.3.2 高效液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。A.6.3.3 p H计:精度为0.0 1。A.6.4 分析步骤A.6.4.1 系统适应性溶液的制备分别称取5 -单磷酸尿苷标准品(A.6.2.3)、尿苷(A.6.2.4)和尿嘧啶(A.6.2.5)0.0 2g(精确至0.0 0 1g),用流动相溶解并定容至1 0m L。移取上述溶液各1.0 0m L,用流动相稀释并定容至1 0 0m L,混匀。A.6.4.2 试样溶液的制备称取试样0.0 2g(精确至0.0 0 1g),用流动相溶解并定容至1 0m L。移取该溶液5.0 0m L,用流动相稀释并定容至1 0.0m L,混匀,过滤膜。A.6.4.3 对照溶液的制备移取试样溶液(见A.6.4.2)2.0 0m L,用流动相稀释并定容至1 0 0m L,混匀。A.6.4.4 灵敏度溶液的制备移取对照溶液(见A.6.4.3)1.0 0m L,用流动相稀释并定容至1 0m L,混匀。A.6.4.5 色谱参考条件同A.3.4.1.3。运行时间不小于5 -单磷酸尿苷保留时间的4倍。A.6.4.6 系统适应性试验取系统适应性溶液(A.6.4.1)注入液相色谱仪中,记录色谱图。5 -单磷酸尿苷主峰与它最近的杂质峰的分离度R应不小于2.0。灵敏度溶液中5 -单磷酸尿苷主峰的信噪比应大于3。8G B1 9 0 3.6 92 0 2 4A.6.4.7 测定系统适用性试验合格后,将试样溶液(见A.6.4.2)及对照溶液(见A.6.4.3)分别注入液相色谱仪中,记录色谱图。参考色谱图见图B.2。根据试样溶液各杂质峰的峰面积之和与对照溶液中5 -单磷酸尿苷的峰面积进行比较计算有关物质的含量。A.6.5 结果计算试样中有关物质的含量w3的数值以百分比(%)表示,按式(A.5)计算。w3=A32A41 0 01 0 0(A.5)式中:A3 试样溶液除主峰以外的所有杂质峰的峰面积之和;A4 对照溶液中主峰的峰面积。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留两位有效数字。两次独立测定结果的绝对差值不超过其算术平均值的1 0%。A.7 乙醇A.7.1 方法原理试样置于密闭的顶空瓶中,在特定温度下平衡一定时间,使试样中的乙醇挥发出来并在顶空瓶内达到动态平衡,通过气相色谱仪进行分离检测,外标法定量。A.7.2 试剂和材料A.7.2.1 乙醇(C2H6O):色谱纯,纯度9 9.5%。A.7.2.2 氢氧化钠(N a OH)。A.7.2.3 氢氧化钠溶液(1m o l/L):称取4 0g氢氧化钠(A.7.2.2),加水稀释并定容至10 0 0m L。A.7.2.4 顶空进样瓶:体积2 0m L。A.7.3 仪器和设备A.7.3.1 电子天平:感量为0.0 0 1g、0.0 0 01g。A.7.3.2 气相色谱仪,配顶空进样器和氢火焰离子化检测器。A.7.4 分析步骤A.7.4.1 试样溶液的制备称取试样1 0g(精确至0.0 0 1g),用氢氧化钠溶液(A.7.2.3)溶解并定容至1 0 0m L。移取1 0m L该溶液于顶空进样瓶,旋紧盖子,备用。A.7.4.2 对照溶液的制备称取0.0 1g乙醇(精确至0.0 0 01g),用氢氧化钠溶液(A.7.2.3)溶解并定容至1 0 0m L。移取1 0m L该溶液于顶空进样瓶,旋紧盖子,备用。A.7.4.3 色谱参考条件a)色谱柱:毛细管柱(3 0m0.5 3mm,固定液为6%氰丙基苯基-9 4%二甲基聚硅氧烷,薄膜厚度9G B1 9 0 3.6 92 0 2 4为3.0 0m)或等效柱。b)柱温:初始温度4 0,保持2 0m i n,以1 0/m i n速率升温至2 4 0,保持1 0m i n。c)检测器温度:2 5 0。d)进样口温度:1 4 0。e)载气:N2;柱流量:2.5m L/m i n。f)顶空进样器条件:平衡温度8 0,平衡时间6 0m i n;定量环温度8 5;传输线温度9 0。g)进样时间:1m i n。h)进样量:1.0m L。A.7.4.4 系统适应性试验取对照溶液(见A.7.4.2)注入气相色谱仪中,观察色谱图。连续进样6次,乙醇峰面积的相对标准偏差(R S D)应不大于5.0%。A.7.4.5 测定系统适用性试验合格后,将试样溶液(见A.7.4.1)和对照溶液(见A.7.4.2)分别注入气相色谱仪中,记录色谱图,参考色谱图见附录C中图C.1。比较乙醇峰面积,计算乙醇含量。A.7.5 结果计算试样中乙醇的含量w4的数值以毫克每千克(m g/k g)表示,按式(A.6)计算。w4=A5C3V110 0 0A6m110 0 0(A.6)式中:A5 试样溶液乙醇的峰面积;C3 对照溶液中乙醇的质量浓度,单位为毫克每升(m g/L);V1 试样溶液的定容体积,单位为毫升(m L);m1 试样质量,单位为克(g);10 0 0 换算系数;A6 对照溶液乙醇的峰面积。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留两位有效数字。两次独立测定结果的绝对差值不超过其算术平均值的1 0%。A.8 铅(P b)称取试样1g(精确至0.0 0 1g),用1%硝酸溶解并定容至5 0m L,摇匀,作为试样溶液。其他操作按G B5 0 0 9.1 2或G B5 0 0 9.7 5石墨炉原子吸收光谱法的规定。A.9 总砷(以A s)计称取试样1g(精确至0.0 0 1g),加1 0m L水溶解后,加4m L1 0 0g/L抗坏血酸和硫脲混合溶液,用水定容至5 0m L,摇匀,作为试样溶液。其他操作按G B5 0 0 9.1 1或G B5 0 0 9.7 6氢化物原子荧光光度法的规定。01G B1 9 0 3.6 92 0 2 4附 录 B5 -单磷酸尿苷液相色谱图 5 -单磷酸尿苷标准品液相色谱图如图B.1所示。5 -单磷酸尿苷试样有关物质液相色谱图如图B.2所示。图B.1 5 -单磷酸尿苷标准品液相色谱图图B.2 5 -单磷酸尿苷试样有关物质液相色谱图11G B1 9 0 3.6 92 0 2 4附 录 C乙醇气相色谱图 乙醇气相色谱图如图C.1所示。图C.1 乙醇气相色谱图21G B1 9 0 3.6 92 0 2 4