DB15∕T 2665—2022 苜蓿草240小时体外消化率的测定(内蒙古自治区).pdf

ICS 65.020.01 CCS B20 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 26652022 苜蓿草 240 小时体外消化率的测定 Determination of 240 hour in vitro digestibility of alfalfa 2022-07-15 发布 2022-08-15 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 26652022 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧厅综合保障中心、内蒙古自治区农牧业科学院，蒙草生态环境（集团）股份有限公司、内蒙古农业大学、内蒙古自治区质量和标准化研究院、呼和浩特市农牧局综合保障中心、呼和浩特市农牧技术推广中心、呼和浩特市农畜产品质量安全中心、巴彦淖尔市畜牧业服务中心、呼和浩特市农牧业综合行政执法支队、土默特左旗农牧业综合服务保障中心。 本文件主要起草人：张福胜、金鹿、李胜利、张崇志、吴昊、毕超、张春华、桑丹、珊丹、郭大伟、刘芳、张洋、胡晓晓、萨初拉、刘威、李长胜、宝华、杨鼎、张跃华、付强、王志军、康长清、赵晨宇、张丽平、王芳。 DB15/T 26652022 1 苜蓿草 240 小时体外消化率的测定 1 范围 本文件规定了苜蓿草240小时体外消化率的测定方法。 本文件适用于不同生长期、不同品种的苜蓿草产品。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 3358.1 统计学词汇及符号 第1部分：一般统计术语与用于概率的术语 GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 DB15/T 1583 牧草中aNDFom的测定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 中性洗涤纤维 neutral detergent fiber 用中性洗涤剂去除饲草中的脂肪、淀粉、蛋白质和糖类等成分后，残留的不溶解物质的总称。 苜蓿中性洗涤纤维体外降解率 the degradability of neutral detergent fiber of alfalfa in vitro 瘤胃液体外降解的苜蓿中中性洗涤纤维含量占苜蓿原样中中性洗涤纤维含量的百分比。 4 试剂和溶液 如无特别说明，所用试剂均为分析纯。 本文件所用水，应符合 GB/T 6682-2008 中三级水要求。 丙酮（100%）。 缓冲液 A：将 10.00 g 磷酸氢二钾、0.50 g 七水硫酸镁、0.50 g 氯化钠、0.10 g 二水氯化钙和0.50 g 尿素加入到 1000 mL 的容量瓶中，用蒸馏水定容。 DB15/T 26652022 2 缓冲液 B：将 15.00 g 碳酸钠和 1.00 g 九水硫化钠加入到 1000 mL 的容量瓶中，用蒸馏水定容。 3%十二烷基硫酸钠（中性洗涤剂）溶液：称取 18.60 g 乙二胺四乙酸二钠和 6.80 g 四硼酸钠加入到 100 mL 烧杯中，加少量水加热溶解后，再加入 30.00 g 十二烷基硫酸钠和 20 mL 乙二醇乙醚。称取4.65 g 无水磷酸氢二钠， 置于另一烧杯中， 加少量水， 微微加热溶解后倒入第一个烧杯中， 稀释至 1000 mL。 5 仪器和设备 实验室用样品粉碎机或研钵。 瘤胃液取样器（长 30 cm，内径 12.70 mm，PPR 管）。 分析天平（分度值 0.0001 g）。 烘干箱（室温300 ）。 磁力搅拌器（转速为 100 r/min1400 r/min）。 纤维袋（ANKOM F57，25 m 孔隙）。 封口机。 体外模拟培养箱（ANKOM DAISY 型，美国）。 纤维分析仪（ANKOM 220P，美国）。 量筒（100 mL 和 1000 mL）。 6 样品 取样 按GB/T 14699.1要求进行采样。 制备 样品按GB/T 20195的要求制备，置于烘箱内于65 烘干，研磨，过1 mm筛后取筛下物。 7 分析步骤 瘤胃液的制备 在晨饲前经瘤胃瘘管利用瘤胃液取样器采集体况健康的供试牛的瘤胃液，转入预热至39 的保温容器中，混合均匀后经4层纱布过滤，滤液持续通入CO2气体，然后量取试验所需量的瘤胃液保温备用。 体外消化步骤 7.2.1 消化 称取0.5000 g样品放置于纤维袋中，封口后平铺放置于体外模拟培养箱中消化罐的分隔板两侧。取两个容器分别加入266 mL缓冲液B和1330 mL缓冲液A，于39 条件下调节其pH达到6.80。于每个消化罐中加入 1600 mL混合缓冲溶液后放置于体外模拟培养箱中，打开加热和转动开关，使消化罐的温度在20 min30 min内达到平衡。取出消化罐加入提前预处理好的400 mL瘤胃液，持续通入CO2然后盖紧盖子，置于体外模拟培养箱中连续培养240 h。 7.2.2 洗涤 DB15/T 26652022 3 培养完毕后取出消化罐倒掉液体，再将纤维袋取出，用流动的自来水冲洗干净。 7.2.3 干燥 将纤维袋置于105 烘箱中烘干6 h，放入干燥器中冷却30 min后，称重。然后再烘干30 min，再冷却称重，直至两次称量之差小于0.0020 g为恒重。 中性洗涤纤维含量的测定 原样样品和残渣样品中中性洗涤纤维含量按照DB15/T 1583的规定进行。 8 结果计算 样品中中性洗涤纤维含量按式（1）计算。 100123=WWWY（1） 式中： Y样品中中性洗涤纤维的含量，单位为百分比 (%)； W3洗涤后样品和纤维袋的重量，单位为克（g） ； W2纤维袋的重量，单位为克（g） ； W1样品的重量，单位为克（g）。 样品中中性洗涤纤维体外降解率按式（2）计算。 100454=WWWZ（2） 式中： Z样品在 240 h 时间点的中性洗涤纤维瘤胃液体外降解率，单位为百分比 (%)； W4样品中中性洗涤纤维的重量，单位为克（g） ； W5经过240 h体外降解后残渣样品中中性洗涤纤维的重量，单位为克（g）。 结果表示 取两次测定结果的算数平均值，计算结果保留2位小数点。 不同苜蓿草NDF240 h体外降解率的测定结果见附录A。 重复性 按照GB/T 3358.1的要求， 在重复条件下同一样品同时两次平行测定所得结果相对相差小于等于10%。 DB15/T 26652022 4 A A 附录A （资料性） 苜蓿草 NDF240 h 体外降解率的测定结果 苜蓿草NDF240 h体外降解率的测定结果见表A.1。 表A.1 苜蓿草 NDF240 h 体外降解率的测定结果 采样地点 品种 茬次 DM （%） NDF （%） NDFD(%NDF) uNDF(%NDF) 呼伦贝尔农垦三生产队 紫花苜蓿 三茬 95.89 69.67 50.55 49.45 呼伦贝尔谢尔塔拉农场 杂花苜蓿 三茬 95.38 36.86 69.29 30.71 呼伦贝尔牙克石农垦 杂花苜蓿 三茬 94.99 63.67 58.63 41.37 呼和浩特市 杂花苜蓿 返青期 96.71 36.86 81.09 18.91 呼和浩特市 黄花苜蓿 返青期 95.64 32.20 72.75 27.25 达拉特旗 紫花苜蓿 二茬 96.22 62.10 54.78 45.22 乌审旗毛乌素基地 龙牧 801 二茬 93.85 54.52 58.20 41.80 乌审旗毛乌素基地 中苜 3 号 二茬 93.38 52.93 53.48 46.52 乌审旗毛乌素基地 草原 3 号 二茬 94.79 58.02 52.59 47.41 乌审旗毛乌素基地 中苜 2 号 二茬 96.06 57.26 54.31 45.69 阿鲁科尔沁旗 康赛 三茬 93.92 46.17 55.51 44.49 阿鲁科尔沁旗 WL2981162 三茬 94.85 45.38 57.93 42.07 阿鲁科尔沁旗 WL343HQ 三茬 96.48 45.12 62.70 37.30 阿鲁科尔沁旗 WL319HQ 三茬 96.76 45.39 57.29 42.71 阿鲁科尔沁旗 WL358HQ 三茬 95.72 45.53 57.10 42.90 敖汉旗 紫花苜蓿 三茬 94.76 41.12 51.72 48.28 阿鲁科尔沁旗 龙牧 806 三茬 95.39 41.26 54.22 45.78 阿鲁科尔沁旗 2065MF 三茬 95.34 47.09 62.82 37.18 阿鲁科尔沁旗 公农 1 号 三茬 94.86 45.56 52.22 47.78 阿鲁科尔沁旗 紫花苜蓿 三茬 94.06 51.46 60.46 39.54