DB62∕T 2522-2021 羊梭菌性疾病防治技术规范(甘肃省).pdf

ICS 65.020. 30 CCS B 41 0062 甘肃省由巳ETA 万标准D862/T 2522-2021 代替DB62/T2522-2014 羊梭菌性疾病防治技术规范Technical specifications for prevention and treatment of sheep clostridia disease 2021一 08 一04发布2021一09一04实施甘肃省市场监督管理局发布0862/T 2522-2021 目IJ=1 本文件按照GB/T11-2020 (标准化工作导则第l部分标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件代替DB62/T2522-2014 (羊梭菌病防治技术规范)，与DB62/T2522-2014相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下更改了文件名称;更改了规范性引用文件;更改了术语和定义，增加了更加详细的内容，更改了羊快疫、羊肠毒血症、羊猝犯、羊黑疫和羔羊俐疾的流行特点、l自床症状、剖检变化和实验室诊断等内容，增加了更加详细的表述;增加了细菌分离及生化反应试验培养、毒素测定。本文件由甘肃省农业农村厅提出并监督实施。本文件由甘肃省畜牧业标准化技术委员会归口。本文件起草单位甘肃省动物疫病预防控制中心、成县索池镇畜牧兽医站、卓尼县动物疫病预防控制中心、金川区农业农村局。本文件主要起草人:卢旺银、徐睁蝶、梁斌、张莉、郑红飞、祁福红、包世民、陈永超、车小蚊。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:2014年首次发布为DB62/T2522-2014; 本次为第次修订。本文件白甘肃省动物疫病预防控制中心解释。各单位或个人在执行本文件过程中如发现需要修改和补充之处，请随时将意见和建议反馈至羊梭菌性疾病防治技术规范地方标准编制组(地址:甘肃省兰州市城关区红柳滩路41号，邮编730046，联系人:郑红飞，E-mail:，联系方式0931-459201幻，以供今后修订时参考。I 羊梭菌性疾病防治技术规范1 范围本文件规定了羊梭菌性疾病的诊断、预防和治疗。本文件适用于羊梭菌性疾病的防治。2 规范性引用文件0862/T 2522-2021 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件J、不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件:不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 39915 动物tE养场防疫准则NY/T 388 畜禽场环境质量标准NY/T 1167 畜禽场环境质量及卫生控制规范NY/T 1168 畜禽粪便无害化处理技术规范NY 5027无公害食品畜禽饮用水水质NY/T 5030无刽害农产品兽药使用准则NY5032无公害食品畜禽饲料和饲料添加剂使用准则NY 5149无公害食品肉羊饲养兽医防疫准则NY/T 5151 无公害食品肉羊饲养管理准则3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1 羊梭菌性疾病clostridiosis of sheep 自梭状芽胞杆菌属中的细菌引起的以发病急、病程短和病死率高为特征的一类羊的传染性疾病，包括羊快疫、羊肠毒血症、羊寻平3日、羊黑E星和羔羊那疾。3. 2 羊快疫bradsot 自腐败梭菌引起的种急性传染病，以突然死亡，胃底或幽门区点、斑状或弥漫性出血为特征，6月18月龄羊多发。3. 3 羊肠毒血症enterotoxemla 自D型产气英膜梭菌在羊肠道中大量繁殖并产生毒素引起的一种急性毒血症，又称软肾病、类快疫。以急性死亡、心包积液，肺充血、水肿，胸腺出血、肠粘膜脱落或溃荡，死后肾脏肿大、实质柔软、触压即朦烂为特征，3月12月龄羊多发。3. 4 羊猝listruck 0862/T 2522-2021 自C型魏氏梭菌引起羊的一种急性传染病，以发病突然，急性死亡，形成腹膜炎、溃药性肠炎和死后肌肉出现气肿症样病变为特征，6月24月龄羊多发。3. 5 羊黑疫black disease 自B型诺维氏梭菌引起羊的种急性、高度致死性毒血症，又称传染性坏死性肝炎。以尸体迅速腐败，皮肤发黑，肝脏出现特异性坏死灶为特征，2岁4岁羊多发。3. 6 羔羊病疾lamb dysentery 自B型魏氏梭菌引起初生羔羊的一种急性毒血症，以随泻和小肠出血性溃荡，回肠外观如血肠子样为特征，2日3日龄羔羊多发。4诊断4. 1 羊快疫4. 1. 1 流行特点6月龄18月龄营养状况较好的绵羊最易感，山羊和鹿也可感染发病。主要在秋、冬季节和早春时节经消化道感染。潮湿低洼的环境以及寒冷、饥饿等不良因素可促使本病发生。4. 1. 2 临床症状多数病羊营养状态较好，未见l自床症状就突然死亡，常死于牧场或圈舍。慢性病例的羊常远离羊群，不愿行走，卧地不起，运动失调，腹痛、腹泻，磨牙抽撞，眼结膜发红，最后衰弱昏迷，口流带血泡沫，数小时内死亡。4. 1. 3 剖检变化病死羊腹部膨胀，皮下胶冻样浸润，真胃和十二指肠毅膜有明显的充血、出血，幽门及胃底部教膜见点、斑状或弥漫性出血，并可见溃荡和坏死灶。肠腔鼓气变薄，心内外膜有大量的出血点。胸腔、腹腔、心包有大量积液，暴露于空气易于凝固，胆囊肿大，肠内容物中有许多小气泡。4.1.4 实验室诊断4. 1. 4. 1 细菌学检查无菌采取病死羊心脏、肝脏、脾脏涂片，用革兰氏、瑞氏或美蓝染色后镜检，可见革兰氏阳性的、两端钝圆、单个或短链的杆状细菌，有的数个连接在起形成长短不等的长丝状。4. 1. 4. 2 细菌分离培养无菌采取病死羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏等病料分别接种子葡萄糖鲜血琼月旨和肝片肉汤，370C厌氧培养24h，可见在葡萄糖鲜血琼脂上形成微隆起、边缘厚薄不均的淡灰色菌落，菌落周围有微弱i窑血区，在肝片肉汤培养基可见肉汤均匀混浊，并产生气体，有脂肪腐败的气睐。4. 1. 4. 3 结果判定4. 1. 4. 3. 1 符合4.1.1、4.1.2和4.1.3的，判定为疑似羊快疫。2 0862/T 2522-2021 4. 1.4.3.2 符合4.1.1、4.1.2和4.1.3的，同时符合4.14.1或4.14. 2的，确诊为羊快疫。4. 2 羊肠毒血症4.2. 1 流行特点2月龄12月龄的绵羊最易发病，山羊少见。本病具有明显的季节性和条件性。在牧区，多发生于春末夏初，或秋季牧草结籽后;在农区，多发二F采收利收粮季节。4.2.2 临床症状4.2.2.1 抽搞型突然发病，死亡前，囚肢剧烈划动，肌肉抽擒，眼球转动，磨牙，梳涎，随后头颈显著抽撞，于2h4h内死亡。4.2.2.2 昏迷型病程稍长，羊只表现不安、步态不稳，随后倒地，呼吸急促，心跳加快，全身肌肉震颤，感觉敏感，流涎，上下领摩擦咯咯作响，角弓反张，鼻流白沫，眼结膜开口口毅膜苍白，角膜!王射消失，四肢和耳尖发冷，发出哀鸣，继而昏迷，有的病羊发生腹泻，排黑色或深绿色稀粪，通常在3h4h内死亡。4.2.3 剖检变化病死羊尸体僵硬，腹部膨大，口鼻流出泡沫状液体或黄绿色胃内容物。真冒含辛手未消化的饲料;小肠毅膜充血、出血，严重的整个肠壁呈血红色，肠内有血红色内容物;胆囊肿大;肾脏肿大、充血、实质变软，重者软化如泥状，稍加触压即烂;肺脏充血、水肿，气管和支气管内充满白色泡沫;胸腔、腹腔及心包腔内有灰黄色t积液，混有纤维素性渗出物;心脏扩张，心外膜有出IDl点，心冠部脂肪黄染;全身淋巴结肿大、充血。4.2.4 实验室诊断4.2.4.1 细菌学检查无菌采取病死羊的小肠内容物、肾、淋巴结或刮取病变部毅膜涂汁，革兰氏染色镜检，可见到大量有英膜的两端钝圆、短粗、单个、成对或短链状革兰氏阳性杆菌。4.2.4.2 细菌分离培养无菌采取病死羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏等病料分别接种于葡萄糖鲜血琼月旨和肝片肉汤，370C厌氧培养24h，可见在葡萄糖鲜血琼脂上形成微隆起、表面有放射状条纹、边缘呈锯齿状、灰白色、半透明、直径2mm5mm的勋章样。菌落周围有窑血环，之外还有圈不完全i吉血环，即所谓双重熔血环在肝片肉汤培养基可见肝片肉汤浑浊，产生气泡，管底形成白色沉淀物。4.2.4.3 毒素测定主要采取病死羊的回肠及其内容物。用标准产气英膜梭菌抗毒素与处理得到的肠内容物上清液做中和试验。结果A、B、c型血洁无中和作用，小鼠死亡，D型血清中和毒素，小鼠存活，则证明羊肠毒血症病原为D型魏氏梭菌。操作方法按照附录A执行。3 0862/T 2522-2021 4.2.4.4 结果判定4.2.4.4.1 符合4.2.1、4.2.2和4.2.3的，判定为疑似羊肠毒血症。4.2.4.4.2 符合4.2.1、4.2.2和4.2.3的，同时符合4.24.1或4.24. 2或4.24.3的，确诊为羊肠毒血症。4. 3羊猝组4.3. 1 流行特点主要发生于成年绵羊，12月龄24月龄绵羊多发，山羊亦可感染;本病多通过消化道感染，多发子冬、春季节和低洼、沼泽地区;常呈地方流行性。4.3.2 临床症状病程短促，常尚未表现出l陆床症状就突然死亡。有时发现病羊远离羊群、精神沉郁、卧地不安，衰弱、痊孪，眼球突出，数小时内死亡。4.3.3 JllJ检变化胃肠道尤其是十二指肠和空肠毅膜严重充血、出血，有的肠段可见大小不等的溃荡，胸腔、腹腔和心包大量积液，渗出的液体暴露于空气后可形成纤维素凝块。4.3.4 实验室诊断4.3.4.1 细菌学检查无菌采取病死羊的肠内容物或毅膜坏死部分做涂片染色镜检，可见到大量单独或成双排列两端钝圆、短粗的革兰氏阳性大杆菌。4.3.4.2 细菌分离培养病料在鲜血琼脂平皿上形成表面光滑隆起的藏白色菌落，外围有单层、半透明i否血环，挑取典型菌落接种厌氧肝片肉汤厌氧培养，结果接种3h5h开始生长，5h6h后大量产气，培养液便极度混浊，24h后菌体密集沉积子管底，上部清澈。4.3.4.3 毒素测定主要采取病死羊的回肠及其内容物或首u取的病变部毅膜。用标准产气英膜梭菌抗毒素与处理得到的肠内容物上清液做中和试验。结果A、B、D型血清无中和作用，小鼠死亡，C型血清中和毒素，小鼠存活，则证明羊肠毒血症病原为C型魏氏梭菌。操作方法按照附录A执行。4.3.4.4 结果判定4.3.4.4.1 符合4.3.1、4.3.2和4.3.3的，判定为疑似羊猝狸。4.3.4.4.2 符合4.3.1、4.3.2和4.3.3的，同时符合4.34.1或4.34.2或4.34.3的，确诊为羊猝狸。4.4羊黑疫4.4.1 流行特点4 0862/T 2522-2021 主要引起12月龄以上的绵羊感染，尤其以24月龄48月龄营养良好的绵羊最多发，山羊也可感染。主要发生于春夏季节和肝片吸虫病流行的低洼潮湿地区。4.4.2 临床症状病程十分急促，绝大多数病羊未见临床症状突然死亡，少数病例病程稍长，可达1d剑，一般不超过到。病羊食欲废绝，反兰主采食停止、精神沉郁，离群或站立不动，呼吸急促、流涎，体温41.50C左右，呈俯卧姿势昏迷而死。4.4.3 剖检变化病羊尸体易腐败，皮下静脉显著充血发黑，胸部皮下组织水肿，浆膜腔有液体渗出，暴露子空气易于凝固，液体常呈黄色;胸腔、腹腔和心包积液，左心室心内膜下常出lIl;真胃幽门部和小肠充血和出血，肠淋巴结水肿;肝脏充血肿大坏死，从表面可看到或摸到一个到多个凝固性坏死灶，坏死灶直径可达2cm3cm，坏死灶灰黄色，界限清晰为不整圆形，周围常有炎性充血带，i日才可见肝片吸虫幼虫或发现黄绿色弯曲似虫的带状病痕。4.4.4 实验室诊断4.4.4.1 细菌学检查采集病羊的心、肝、脾、淋巴结等涂片，染色镜检，可见粗大、两端钝圆、菌体多平直或略弯曲、两两相联或单个存在的革兰氏阳性巨大杆菌。4.4.4. 2 细菌分离培养本菌严格厌氧，分离较为困难。应立即采样，严格无菌操作。可用葡萄糖鲜血琼脂培养基:t1J线培养，在严格厌氧条件下，370C培养24h48h可观察到菌落里浅薄透明，形状不规则，边缘呈细线状散开，易蔓延生长。4.4.4.3 结果判定4.4.4.3.1 符合44.1 、44. 2和44.3的，判定为疑似羊黑疫。4.4.4.3.2 符合44.1 、斗4.2和44.3的，同时符合444.1或444. 2的，确诊为羊黑疫。4. 5 羔羊病疾4.5. 1 流行特点主要发生于7日龄以内的羔羊，尤其2日龄-:-3日龄的发病最多，主要通过消化道和创伤感染。母羊孕期营养不良，羔羊体质瘦弱，气候寒冷，羔羊受冻;哺乳不当，羔羊饥饱不均或卫生不良均可诱发本病。4.5.2 临床症状4.5.2.1 下病型病初精神不振，低头弓背，不思吮乳;腹泻，粪便恶臭，有的稠如面糊，有的稀薄如水，后期有带有血甚至出现血便。5 0862/T 2522-2021 4.5.2.2 神经型病羊腹胀而不下病或只排少量稀粪。以神经症状为主，囚肢瘫软，卧地不起，呼吸急促，口流白沫，最后昏迷，头向后仰，体温降至常温以下。数小时到十几小时内死亡。4. 5. 3 剖检变化尸体严重脱水，脏门处有粪便污染，真胃内有未消化的凝乳块，小肠尤其是回肠毅膜充血，肠内充满血样物，病程长的小肠或结肠毅膜可见1mm3mm溃荡，溃殇周围有出血带环绕。肠系膜淋巴结肿胀充血，间或出血。肺脏充血淤血，心包有积液，心内、外膜有出血点或出血斑。4.5.4 实验室诊断4.5.4.1 细菌学检查将死亡羔羊的肝、脾及小肠内容物无菌取出，涂片，染色镜检，可见两端钝圆，短粗的革兰氏阳性菌，呈单个或成双排列，具有英膜，少数有芽J包。4.5.4.2 细菌分离培养无菌采取病死羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏等病料分别接种子葡萄糖鲜血琼月旨和肝片肉汤，370C厌氧培养24h，可见在葡萄糖鲜血琼脂上形成微隆起、表面有放射状条纹、边缘呈锯齿状、灰白色、半透明、直径2mm5mm的勋章样。在肝片肉汤培养基可见肝片肉汤浑浊，产生气泡，管底形成白色沉淀物。4.5.4.3 毒素测定主要采取病死羊的回肠及其内容物或首u取的病变部毅膜。用标准产气英膜梭菌抗毒素与处理得到的肠内容物上清液做中和试验。结果A、C、D型血清无中和作用，小鼠死亡，B型血清中和毒素，小鼠存活，则证明羔羊俐疾病原为B型魏氏梭菌。操作方法详见附录Ao4.5.4.4 结果判定4.5.4.4.1 符合4.5.1、4.5.2和4.5.3的，判定为疑似羔羊俐疾。4.5.4.4.2 符合4.5.1、4.5.2和4.5.3的，同时符合4.54.1或4.54. 2或4.54.3的，确诊为羔羊俐疾。5 预防5. 1 科学饲养管理在本病易发季节，尽量选择地势较高、干燥地区放牧，避免羊只采食过量多;十饲料、结籽饲草和精料。秋冬季节要做好保暖，避免羊只采食霜冻牧草。饮水要求按照NY5027的规定执行，饲料应符合NY5032的要求，根据羊的生长阶段配制饲料，供给富含蛋白质、矿物质、维生素的饲料，饲养管理按照GB/T39915和NY/T5151的规定执行;环境控制应符合NY/T388、NY/T1167的规定。5. 2消毒灾菌保持羊舍干燥、卫生，定期用三氯异曹L尿酸、盼类等消毒剂交替使用消毒。发病时，及时隔离病羊，未发病的羊应全群预防性给药，可选用长效土霉素Cl5mg!kg体重，肌内注射，1次Id，连用2d3d)、6 0862/T 2522-2021 多西环素。mg!kg体重，肌内注射或静脉注射，1次Id，连用2d3d)、抗血清等。药物使用应符合NY/T5030的规定。对被污染的圈舍和场地、用具，用3%的烧碱i窑液或20%的漂白粉iil液消毒灭菌。5. 3 免疫预防该病常发地区，每半年注射次羊黑疫疫苗和羊梭菌三联囚防疫苗或羊快疫、肠毒血症、猝犯、羔羊俐疾、羊黑疫五联疫苗。对于娃振母羊可以在怀孕105d和120dB才分别接手中l次羊梭菌三联囚防疫苗预防新生羔羊发生梭菌病。防疫应符合NY5149的规定。5.4药物预防有羔羊俐疾病史的羊场，羔羊出生后12h内，灌服土霉素。15g1只 0.2g1只，1次Id，连续灌服3do控制肝片吸虫的感染，每年对羊用丙硫咪瞠驱虫2次。6 治疗6. 1 使用国家批准的针对本病的中西药物，药物的选用应符合NY/T5030的规定。6. 2 选用青霉素。乃U!kg3万U!kg体重，肌内注射，2次Id3次Id，连用2d3d)、阿莫西林Cl5mg!kg体重，肌内注射，2次Id3次Id，连用2d3d)、土霉素(lOmg农g20mg!kg体重，口服或肌内注射，2次Id，连用3d5d)、囚环素clOmg!kg 20mg!kg体重，口服，2次闭，连用2d3d)、磺胶六甲氧陪院(25mg!kg50mg!kg体重，首次加倍，口服、肌内注射或静脉注射I1次Id2次Id，连用3d5d)、复方磺胶陪院纳(以SD计划mg句30mg句体重，肌内注射，1次Id2次Id，连用立j3d)、磺胶脉(0Ig句。与她体重，口服，2次Id，连用3d5d)。6. 3 羊黑疫可在发病早期静脉或肌内注射抗诺维梭菌血清50mL80mL，连用12次，同时可用短得净16mg!kg体重、三氯苯瞠8mg!kg12mg!kg体重、丙硫咪瞠IOmg!kg体重、硫双二氯盼80mg!kg体重或硝氯因为4mg!kg5mg!kg体重等进行全群驱虫。6.4羊快疫可选用磺胶脉8g(或磺胶陪院2.5g)，次硝酸锁10g，螺酸蛋 丘5g，加水100mL.混匀次灌服，1次Id，连用2d3d;或在发病早期灌服10%石灰乳50mLI次100mLI次，间隔12h，连用2次。6. 5 羔羊俐疾可选用士霉素。2g1只0.3g1只，加胃蛋白酶0.2g1只0.3g1只，加水灌服，每天2次;或磺胶肌0泣，革柔酸蛋白0.2g，次硝酸锁。泣，重碳酸纳0.2g，加水灌mL每天3次。7 0862/T 2522-2021 A. 1 毒素检查附录A(规范性)产气英膜梭菌肠毒素的分离和鉴定方法羊只死亡后，尽快取小肠内容物(最好是回肠内容物)，加1%的氯仿防腐，在冷藏条件下送检。实验室在收到J送检材料后，用生理盐水稀释24倍(若内容物稀薄，不必稀释)，充分混合后经离心沉淀C3000r/min) 15min，取上清液，用赛氏滤器过滤后，1份直接注射动物(两只)，另l份加1%的膜蛋白酶粉，在室温处理lh以致活和l毒素，破坏p毒素，然后注射另组动物(两只)。若无离心机和赛氏滤器，可用滤纸反复过滤，直到J滤液清朗即可。动物可用小鼠(静脉注射02mL04mL)或家兔(静脉注射2mL4mL)。注射后至少观察24h，根据两组动物的反应情况作出判断。如肠毒素含量低，动物也可能子注射后定时间内呈现轻度昏迷，呼吸加快，经lh左右可能恢复。正常绵羊肠内容物注射后不引起反应。也可用豚鼠进行毒素检查。方法为皮内注射上述检滤液。2mL04mL，观察48h，如果有毒素存在，注射部可见坏死变化。A. 2 中和试验A. 2. 1 取灭菌试管5支，编为l、2、3、4、5号，然后按表l所列，分别加入台毒素滤液、抗毒素和生理盐水，每管总量为1.2mL。混合后将5个管同时放置370C温箱中，中和40mino表A.1中和试验方法加样表管号肠内容物滤液抗毒素ImL生理盐水中和静脉注射小鼠ImL B型C型D型E型ImL 数量/只剂量I(mLl只)0.9 0.3 2 0.4 2 0.9 0.3 2 0.4 370C, 3 0.9 0.3 40min 2 0.4 4 0.9 0.3 2 0.4 5 0.9 0.3 2 0.4 A. 2. 2 小鼠10只，分为5组，每组2只，各组依次静脉注射上述5个管中一个管中的混合液，注射剂量为每鼠04mL.观察72h，按表2判断结果。8 0862/T 2522-2021 表A.2 试验结果判定结果内容第种第种第种第四种第五种第六种B型血清+肠内容活活活活死死物滤液C型血清+Rii1内容活死?舌死死死物滤w:D型血清+肠内容活死死1孟死死物滤液E型血清+肠内容活死死死7舌死物滤液l不是魏氏梭菌毒素，考虑D型E型其它毒素或毒物肠毒素型别A型B型C型2检查各型血清，尤其是B型血清是否失效9