RIG-I_NF-κB信号通路在老龄小鼠围术期神经认知障碍中的作用.pdf

宁夏医科大学学报4缘卷文章编号：1674-6309（2023）08-0792-07论著收稿日期：2023-01-13基金项目：甘肃省麻醉与脑功能临床医学研究中心（21JR7RA675）作者简介：杨玉东（1983），硕士，主治医师，研究方向为围术期脑保护。通信作者：阎文军（1971），女，博士，研究方向为围术期器官功能保护。E-mail：围术期神经认知障碍（perioperative neurocog原nitive disorders，PND）是围术期严重并发症，主要表现为学习和记忆、注意力、执行功能、语言思维、知觉运动、社会认知等能力下降1-2。PND 导致术后 1耀6 个月的病死率增加，且发病率高，严重影响患者的术后恢复质量，使其住院时间延长、医疗费用增加，甚至可能导致长期的认知功能障碍，但其发病机制尚未完全阐明3。研究4-5表明，由手术创伤引起的外周炎症和全身炎性介质的释放会影响中枢神经系统的炎症过程，并且这些炎性介质水平的高低与认知功能障碍的严重程度相关，尤其是在记忆和学习方面。维甲酸诱导基因 I（RIG-I）是一种 RNA 解旋酶，被认为是一种重要的细胞内模式识别受体，通过识别病毒与细菌的 RNA 和脂多糖（lipopolysaccharide，LPS），导致核因子 资B（nuclear factor kappa-B，NF-资B）的激活，从而发挥抗病毒和抗菌的先天免疫反应。据报道6，RIG-I/NF-资B 信号通路与神经炎性反应关系密切，故其过度激活可能通过导致脑内促炎因子级联式增加，引起神经细胞损伤，从而对认知功能产生影响，但抑制该通路是否可以改善 PND 仍不明确。因此，本实验旨在探讨 RIG-I/NF-资B 信号通路在老龄小鼠 PND 中的作用及其潜在机制，为 PND 提供新的分子靶点和治疗策略。1材料与方法1.1实验动物及分组50 只 15 月龄雄性野生型 C57BL/6J 小鼠饲养于南京拉姆达医药有限公司 实验动物使用许可证编号：SYXK（苏）2021-0038，并由南京拉姆达医药有限公司实验动物伦理委员会批准（批准文号：IACUC-20220608），所有相关实验方法与RIG-I/NF-资B 信号通路在老龄小鼠围术期神经认知障碍中的作用杨玉东1，2，董东2，阎文军3（1.宁夏医科大学，银川750004；2.宁夏回族自治区人民医院麻醉科，银川750002；3.甘肃省人民医院麻醉手术科，兰州730000）摘要：目的探讨 RIG-I/NF-资B 信号通路在老龄小鼠围术期神经认知障碍（perioperative neurocognitive disor原ders，PND）发生中的作用。方法健康雄性 15 月龄野生型 C57BL/6J 小鼠 36 只，随机分为空白组（C 组）、假手术组（Sham 组）、PND 组和 RIG-I-/-+PND 组，每组 9 只。PND 组和 RIG-I-/-+PND 组通过胫骨骨折髓内钉内固定手术构建老龄小鼠术后认知功能障碍模型，RIG-I-/-+PND 组海马注射 RIG-I-siRNA 干扰海马 RIG-I的表达。C 组不做任何处理，Sham 组仅麻醉后切开小腿皮肤，不做胫骨骨折处理。术后第 1、3、7 天分别通过 Morris水迷宫行为学实验评估各组的学习记忆能力、采用 RT-qPCR 法检测海马组织中 RIG-I 基因表达，Westernblot 检测 RIG-I 和 NF-资B（p65）蛋白含量，ELISA 法测定海马组织中促炎因子白细胞介素 1茁（interleukin 1茁，IL-1茁）、白细胞介素 6（interleukin 6，IL-6）及肿瘤坏死因子-琢（tumor necrosis factor-琢，TNF-琢）水平。结果与Sham 组相比，PND 组小鼠在水迷宫训练潜伏期延长（P约0.001），目标象限停留时间与穿越平台次数均减少（P均约0.05）。而 RIG-I-/-+PND 组小鼠与 PND 小鼠相比，潜伏期缩短（P约0.001），目标象限停留时间和穿越平台次数均增加（P均约0.05）。相比 PND 小鼠，RIG-I-/-+PND 组小鼠 RIG-I 基因表达受到抑制（P约0.001）、RIG-I/NF-资B 信号通路中 RIG-I 和 NF-资B p65 蛋白表达均减少（P均约0.05）、海马中促炎因子 IL-6、TNF-琢 和 IL-1茁 浓度均降低（P均约0.05）。结论在老龄小鼠中，RIG-I 基因沉默可以通过抑制 RIG-I/NF-资B 信号通路激活，降低神经炎症水平，从而改善手术麻醉引起的神经认知功能障碍。关键词：维甲酸诱导基因 I；NF-资B 信号通路；炎性因子；围术期神经认知障碍中图分类号：R614文献标识码：ADOI院10.16050/ki.issn1674-6309.2023.08.006第 45 卷8 期2023 年 8 月宁夏医科大学学报Journal of Ningxia Medical University792窑窑8期操作均严格遵守伦理规范。经 Morris 水迷宫实验筛选出无学习能力障碍的 36 只小鼠，于第 7 天进行分组和造模。采用随机数表法将小鼠平均分为 4 组：空白组（C 组）、假手术组（Sham 组）、PND组、RIG-I-/-+PND 组，每组 9 只。C 组不做任何处理，其他组在腹腔注射 4%水合氯醛麻醉后切开小腿皮肤，Sham 组不做胫骨骨折处理，0.9%生理盐水冲洗后逐层缝合伤口；PND 组、RIG-I-/-+PND 组进行胫骨骨折髓内钉内固定手术处理，应用利多卡因注射液镇痛后缝合。RIG-I-/-+PND 组于术前和术后第 3 天经海马注射 RIG-I-siRNAs通用生物（安徽）股份有限公司，中国 各 1 次。注射时将 siRNA 以 5 nmol/20 g 的浓度溶解于RNase-free 水中，将小鼠麻醉后固定于脑立体定位仪（南京卡尔文生物科技有限公司，中国），沿颅骨中线切开皮肤，暴露颅骨并消毒后，用定位仪推进器将头皮针插入颅骨小孔下约 2 mm 处进行注射。每只小鼠注射体积为50滋L，注射时间90 s，留针时间约 30 s，注射期间保持注射管道系统的通畅及封闭。注射用 RIG-I-siRNA 序列如下：正向引物：5-GCCAUGCAACAUAUCUGUAAAdT原dT-3；反向引物：5-UUUACAGAUAUGUUG原CAUGGCdTdT-3。1.2胫骨骨折髓内钉内固定手术胫骨骨折髓内钉内固定术用于建立 PND 模型7。腹腔注射 5%水合氯醛（博士德生物工程有限公司，中国）0.5 mL/100 g 麻醉小鼠。待小鼠翻正反射消失后，将其固定于手术台（瑞沃德生命科技有限公司，中国）上，备皮、使用碘伏消毒小鼠右下肢，铺巾后于右侧膝关节下切开约0.5 cm 皮肤，逐层分离，暴露胫骨。将 0.3 mm 的髓内固定针插入髌腱，充分固定后用手术钳于胫骨中上 1/3 处断裂胫骨骨干，立即使用 0.9%生理盐水冲洗后再将固定针完全插入并对合。清创后逐层缝合伤口，手术切口周围以 0.2%利多卡因胶浆局部浸润镇痛，包扎后将小鼠置于电热毯（三春电器有限公司，中国）上复苏，待其苏醒后送回动物房正常饲养。手术时间约 30 min，全程无菌操作，术中室温维持在 24耀26 益，直肠温度维持 36.5耀37.5 益。1.3组织样本采集小鼠术后第 1、3、7 天 Morris 水迷宫行为学测试结束后，每组随机取 3 只小鼠麻醉后使用脊椎脱臼法处死，剥离小鼠大脑皮质，快速分离海马组织。将分离的海马组织置于培养皿中，用 1伊PBS 洗涤 3 次，以去除杂质。随后液氮速冻，-80 益保存备用8。1.4Morris 水迷宫实验Morris 水迷宫实验包括定位航行实验和空间探索实验，分别于术前和术后进行9-10。术前用于剔除学习能力异常的小鼠，术后用于评价 RIG-I基因沉默对于 PND 小鼠认知能力的影响。空间认知能力差异无统计学意义的 4 组小鼠于术后第 1、3、7 天进行逃避潜伏期、目标象限停留时间及穿越平台次数测试。每次实验分别从 4 个象限的固定点将小鼠面向池壁放入，记录其找到平台的时间（逃避潜伏期），60 s 内未找到平台的潜伏期记为 60 s。定位航行实验结束后，撤掉水下平台，将小鼠从原平台对角象限面向池壁放入，记录 60 s 内其在原逃生平台所在象限的停留时间（目标象限停留时间），以及在该时间内穿越原平台位置的次数（穿越平台次数）。实验期间使用路径追踪系统采集小鼠游泳轨迹（Noulds，EthoVi原sion 14.0，荷兰）。1.5ELISA 测定海马组织炎性因子含量-80 益冻存的海马组织用无菌手术剪刀剪碎，按质量（g）颐体积（mL）=1颐9 加入 1伊PBS 液，利用玻璃匀浆器将组织制成匀浆，4 益、12 000 r min-1，离心 10 min，收集上清液。采用 ELISA 试剂盒（上海酶联生物科技有限公司，中国）检测术后第1、3、7 天海马组织上清液中炎性因子白细胞介素（interleukin 1茁，IL）-1茁、IL-6 以及肿瘤坏死因子-琢（tumor necrosis factor-琢，TNF-琢）水平。具体步骤按照 ELISA 试剂盒（上海酶联生物科技有限公司）说明书进行操作：将样本按 1颐4 稀释后，分别加入小鼠 IL-1茁、IL-6 或 TNF-琢 捕获抗体包被的固相抗体微孔板。结合后加入 HRP 酶标记抗体，最后用 TMB 显色。用多功能酶标仪（M3 公司，美国）在 450 nm 波长下测定光密度（OD）值，根据标准品梯度稀释绘制标准曲线，并根据标准曲线计算小鼠海马组织中 IL-1茁、IL-6 和 TNF-琢水平。1.6Real-time qPCR 检测小鼠海马组织 RIG-I基因表达水平按 TRIzol 试剂说明书（Invitrogen 公司，美国）操作步骤，提取海马组织中总 RNA。总 RNA在 OD 260 nm 处测定 RNA 浓度，OD 260/280 nm处检测抽提的 RNA 纯度。根据试剂盒说明书，使用 cDNA 第一链合成试剂盒（TaKaRa RR036B，日本）进行反转录和 One Step TB GreenRPrime原杨玉东，等.RIG-I/NF-资B 信号通路在老龄小鼠围术期神经认知障碍中的作用793窑窑宁夏医科大学学报4缘卷ScriptTMRT-PCR Kit域（SYBR Green，TaKaRa 公司，日本）进行 cDNA 片段扩增。0.1 mL PCR 管中，依次加入如下组分混合成 20 滋L 反应体系：10 滋L2伊Real-time PCR Master Mix、1 滋L 8 倍稀释的cDNA 模板、2 滋L 引物 Mix 及 7 滋L 0.1%DEPC水。随后使用荧光定量 PCR 循环仪（ABISteponeplusReal time-PCR system，美国），设置 95 益预热5 min，95 益变性 15 s、60 益退火20 s、72 益延伸30 s，共 40 次循环。RIG-I 和 GAPDH 内参引物使用 Primer 6 设计，由通用生物（安徽）股份有限公司合成，引物序列见表 1。2-驻驻Ct法用于计算基因相对表达量。表 1qPCR 引物序列名称序列（5 3）RIG-IF：GCCGAATGTCTTATCAGATCCGR：5-ATGAAAATCTGGATGCTGGACGGAPDHF：5-ATTCCATGGCACCGTCAAGGCR：5-TTCTCCATGGTGGTGAAGACGCCA1.7Western blot 检测小鼠海马组织 RIG-I 和NF-资B p65 的表达使用全蛋白抽提试剂盒（江苏凯基生物技术股份有限公司，KGP250，中国）提取冻存的小鼠海马组织中的总蛋白，具体步骤按照产品说明书操作。用 BCA 蛋白含量检测试剂盒（江苏凯基生物技术股份有限公司，KGP250，中国）定量蛋白浓度。蛋白加热变性后等体积上样，用十二烷基磺酸钠原聚丙烯酰胺凝胶电泳（10%分离胶、5%浓缩胶）分离蛋白后，转移至硝酸纤维素膜（nitrocellulosemembrane，NC）。NC 膜在常温下用 5%脱脂牛奶封闭 2 h 后，移入 4 益分别同抗兔 RIG-I（CellSignaling Technology 公司，美国，1颐1 000）、抗兔NF-资B p65（Abcam 公司，美国，1颐1 000）或抗兔GAPDH 一抗（江苏凯基生物技术股份有限公司，中国，1颐5 000）摇床振荡孵育过夜。次日，加入对应抗兔 HRP 酶标 IgG 二抗（江苏凯基生物技术股份有限公司，中国，1颐1 000）常温孵育 2 h 后使用增强化学发光试剂显色。ChemiDoc MP ImagingSystem（Bio-rad 公司，美国）用于成像，Gel-Pro32 软件（Media Cybernetics 公司，美国）进行灰度分析。1.8统计学方法数据应用 SPSS 25.0 软件进行统计分析，GraphPad Prism 9.0 软件绘制柱状图。符合正态分布的计量资料以均数依标准差（x依s）表示，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用 LSD-t检验。P臆0.05 为差异有统计学意义。2结果2.1RIG-I 基因沉默改善老龄 PND 小鼠神经认知障碍老龄小鼠连续 5 d 进行定位航行训练帮助形成空间记忆后，筛选记忆功能无障碍的小鼠纳入实验。术后第 1、3、7 天分别对各组进行 Morris水迷宫空间探索实验。实验结果显示，与 Sham 组相比，术后第 7 天 PND 组老龄小鼠逃避潜伏期延长（图 1A），目标象限停留时间缩短（图1B），穿越平台次数减少（图 1C）（P均约0.05），表明手术创伤可导致老龄小鼠术后围术期神经认知障碍。而 RIG-I-/-+PND 组与 PND 组相比，逃避潜伏期缩短（图 1A）、目标象限停留时间（图 1B）及穿越平台次数增加（图 1C）（P 均约0.05），该 3 项指标RIG-I-/-+PND 组和 C 组或 Sham 组间差异均无统计学意义（P均跃0.05）。提示 RIG-I 基因沉默对PND 老龄小鼠的空间记忆学习功能障碍有积极的改善作用，能使其接近于正常水平。A.逃避潜伏期；B.目标象限停留时间；C.穿越平台次数；*P0.05；*P0.01。图 1RIG-I 基因沉默后老龄 PND 小鼠的 Morris 水迷宫实验结果ABC*6040200第 1 天第 猿 天第 苑 天*40302010086420第 1 天第 猿 天第 苑 天第 1 天第 猿 天第 苑 天C 组Sham 组PND 组RIG-I-/-+PND 组C 组Sham 组PND 组RIG-I-/-+PND 组C 组Sham 组PND 组RIG-I-/-+PND 组2.2RIG-I 基因沉默对老龄 PND 小鼠海马组织中 RIG-I 基因表达水平的影响如图 2 所示，利用 RT-qPCR 检测各组小鼠海马组织中 RIG-I 基因的表达水平。结果发现，与 Sham 组相比，第 7 天 PND 组中 RIG-I 基因水平更高（P0.001）。且 RIG-I 基因在 RIG-I-/-+794窑窑8期A.Western blot 检测灰度成像曝光图；B.RIG-I 蛋白的相对表达水平；C.NF-资B p65 蛋白的相对含量；*P 0.05；*P0.01。图 3Western blot 检测 RIG-I 基因沉默后 PND 小鼠海马组织中 RIG-I 与 NF-资B p65 蛋白水平的变化杨玉东，等.RIG-I/NF-资B 信号通路在老龄小鼠围术期神经认知障碍中的作用*1.00.80.60.40.20.01.00.80.60.40.20.0101 kDa65 kDa37 kDaRIG-INF-资B p65GAPDHABC第 1 天第 猿 天第 苑 天第 1 天第 猿 天第 苑 天C 组Sham 组PND 组RIG-I-/-+PND 组C 组Sham 组PND 组RIG-I-/-+PND 组PND 组表达低于 PND 组，该趋势在术后第 3 天（P0.05）和第 7 天（P0.001）的检测中均得到了证实，说明 RIG-I-siRNA 注射海马可以成功沉默 PND 小鼠海马中高表达的 RIG-I 基因。C 组Sham 组PND 组RIG-I-/-+PND 组*2.01.51.00.50.0第 1 天第 猿 天第 苑 天两组间比较*P0.05；*P0.001。图 2 RT-qPCR 检测 RIG-I 基因沉默后 PND 小鼠海马组织中 RIG-I mRNA 表达变化2.3RIG-I 基因沉默对老龄 PND 小鼠海马组织RIG-I 与 NF-资B p65 蛋白表达的影响通过 Western blot 对 RIG-I 与 NF-资B p65蛋白进行检测，结果发现，在术后第 7 天，RIG-I 和NF-资B p65 蛋白水平在 PND 组中的表达均高于Sham 组和对照组（图 3A 和图 3B），而 RIG-I-/-+PND 组则低于 PND 组（P 均0.05），提示 PND 可能与 RIG-I/NF-资B 通路激活有关，而 RIG-I 基因沉默对 PND 小鼠的影响可能通过对该信号通路的抑制来实现。2.4RIG-I 基因沉默对老龄 PND 小鼠海马组织中炎性因子水平的影响与 Sham 组相比，术后第 3 天起，PND 组小鼠海马组织中 IL-6（图 4A）、TNF-琢（图 4B）以及IL-1茁（图 4C）水平均升高（P 均0.05），而 RIG-I-/-+PND 组与 PND 组相比，IL-6、TNF-琢 及 IL-1茁 炎性因子浓度均降低（P 均0.05）。术后第 7 天的检测结果也呈现出相似的趋势，PND 组小鼠炎性因子比 Sham 组小鼠升高，而与 PND 组比较RIG-I-/-+PND 组降低（P0.05）。以上结果表明，海马注射 RIG-I-siRNA 能够改善手术后海马组织的炎性反应。3讨论PND 是老龄患者在麻醉和手术后最常见的并发症之一，以各种形式的认知功能障碍为特征。尽管其发病的相关机制尚不清楚，但神经炎症已被证明是最主要的原因之一1。RIG-I/NF-资B信号通路作为神经炎症的重要调控途径9，其在PND 发生发展中的直接作用却在国内外鲜有报道。本研究报道了抑制 RIG-I/NF-资B 信号通路对 PND 小鼠的认知功能障碍和神经炎症水平有明显的改善作用。C 组Sham 组PND 组RIG-I-/-+PND 组*2.01.51.00.50.0第 1 天第 猿 天第 苑 天795窑窑宁夏医科大学学报4缘卷*P0.05，*P0.01。图 4ELISA 检测 RIG-I 基因沉默后 PND 小鼠海马组织中炎性因子水平的变化*2520151050200150100500403020100第 1 天第 猿 天第 苑 天第 1 天第 猿 天第 苑 天第 1 天第 猿 天第 苑 天C 组Sham 组PND 组RIG-I-/-+PND 组C 组Sham 组PND 组RIG-I-/-+PND 组C 组Sham 组PND 组RIG-I-/-+PND 组PND 临床前研究依赖于良好的动物模型。目前 PND 模型的建立虽然有多种方法可以实现，但没有统一的标准。常用的造模方法主要包括肝部分切除术、脾切除术、肾切除术、剖腹探查术、单侧颈动脉暴露手术、LPS 诱导建模、单纯麻醉因素建模及胫骨骨折术10。其中，麻醉暴露和手术引起的神经炎症被认为是认知能力下降的主要原因。在通过手术方式造模的方法中，虽然特定的器官切除术和剖腹探查术都被证明可以成功诱导 PND，但前者可能导致器官功能失代偿11，后者可能导致肠道菌群平衡失衡12，从而影响 PND形成机制的准确判断。而胫骨骨折髓内钉内固定手术既能通过形成创伤，增加全身压力和释放炎性因子，从而作用于认知功能，又可避免对机体整体功能的损害，且术后实验对象生存率较高，因此在本实验中被采用13。本研究在 4%水合氯醛麻醉下行胫骨骨折髓内钉内固定术后，第 7 天可发现小鼠 PND 模型制备成功，为胫骨骨折术在 PND 建模的可行性方面提供了证据。但据报道14，对 C57BL/6 小鼠行胫骨髓内钉置入术后，第2 天进行 Morris 水迷宫实验发现小鼠活动及参考记忆未发生改变，这与本实验研究结果有一定差异。本研究术后第 1 天，水迷宫实验检测结果显示，虽然目标象限停留时间和穿越平台次数在各组间差异无统计学意义，但 PND 小鼠术后的逃避潜伏期相比空白组延长，这可能与动物模型月龄有关。相比本实验使用的老龄小鼠，在过往实验中使用的 2 月龄小鼠，PND 进程发生了推迟，这也证明了年龄与其相关，提示在 PND 建模应用过程中需要考虑到年龄的因素。RIG-I 是一种由 DDX58 基因编码的胞质模式识别受体，通常被认为是先天免疫中用于识别已感染病毒细胞的重要分子，存在于大多数细胞中，通过 IFN1 的激活促进先天免疫，帮助激活适应性免疫系统15。在不同的微环境中，它具有除病毒识别之外的更多功能，包括在癌症中诱导免疫原性肿瘤细胞死亡和刺激促炎细胞因子的产生16，以及被证明在阿尔茨海默病患者的星形胶质细胞中与淀粉样蛋白前体蛋白和淀粉样蛋白-茁 的表达增加有关17。Morris 水迷宫实验结果显示，尽管手术成功诱发了 PND，但 RIG-I 基因沉默的 PND 小鼠的术后空间学习记忆能力下降。进一步检测了其下游相关信号因子的蛋白表达水平，结果显示，PND 的发生发展与 RIG-I 和NF-资B p65 呈正相关，而 RIG-I 基因的沉默一定程度上抑制了该通路的激活，且抑制了炎性因子的释放，从而通过神经炎症的缓解改善神经损伤及认知功能。NF-资B 代表的诱导型转录因子家族调节参与炎性反应过程中的大量基因，包括 NF-资B1（p50）、NF-资B2（p52）、RelA（p65）、RelB 和 c-796窑窑8期Rel 共 5 个成员，它们通过结合特定的 DNA 元件和 资B 增强子形成二聚体来介导靶基因的转录，除了介导先天免疫细胞中各种促炎基因激活外，还调节炎性 T 细胞的功能18。尽管潜在机制还未完全阐明，但 RIG-陨 已被多项研究证明可作为NF-资B 信号转导的正调节剂，对于调节 NF-资B活性和蛋白质翻译有重要作用19，本研究中，RIG-陨抑制的小鼠中发现的 p65 蛋白下调也证明了这一观点。其原因是 p50/p65 二聚体是 RIG-陨/NF-资B 通路经典途径激活的最丰富的形式，它的介导作用通常由 IKK 的 NEMO 依赖性激活触发，随后 I资B 蛋白的磷酸化及泛素化引起蛋白酶体降解释放 p65。p65/输入蛋白-茁 复合物通过Ran-GTP 蛋白转移到核内后解离成游离 p65，通过结合目标基因的特定核苷酸序列来控制转录程序，其蛋白表达与 NF-资B 的活化程度呈正相关20。本研究中，小鼠通过手术造成的创伤和全身压力源激活 RIG-陨/NF-资B 在内的一系列促炎相关通路扩大了炎性反应，共同破坏血脑屏障导致的神经炎症诱导了 PND，但这一结局由于 RIG-陨/NF-资B 通路的抑制而逆转。Kan 等21也报道过在 NF-资B 信号通路阻断剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯可在临床前 PND 模型中改善认知表现。既往研究22发现，手术创伤的全身炎症可通过损伤相关分子模式、补体级联和凝血级联反应引起神经系统炎症，进一步诱导中枢神经胶质的激活。小胶质细胞和星形胶质细胞的激活可促使它们分泌炎性细胞因子23。海马 CA1 区 IL-1茁 和TNF-琢 的分泌与多种信号通路有关，例如，CCL2/CCR2 信号通路24，而本研究证实，RIG-陨 也通过激活 NF-资B 参与其中。另外有研究25显示，PND大鼠模型中，NF-资B 信号通路通过激活小胶质细胞导致 IL-6、IL-1茁 和 TNF-琢 上调和认知功能障碍，这也与本研究的结果一致，说明 RIG-陨 基因沉默可以通过下调 NF-资B 而抑制这些炎性因子表达。这些细胞因子在神经炎症的发展过程中，导致突触可塑性受损，进一步引起认知功能障碍，但可以通过抑制 RIG-陨 来改善其发生水平，从而为调控认知功能障碍提供靶点。但这些炎性因子特异性很低，与其他疾病同样有关26，无法准确预测 PND，所以何种细胞因子组合对于PND 预测具有更好的敏感性和特异性仍然有待探究。综上所述，小鼠海马组织 RIG-陨 基因沉默可以通过下调老龄 PND 小鼠海马组织 RIG-I 的表达和抑制下游 NF-资B p65 的激活，降低 IL-6、IL-1茁 和 TNF-琢 促炎因子水平，抑制神经炎性反应，从而改善胫骨骨折髓内钉内固定术引起的老龄大鼠认知功能障碍。抑制 RIG-陨 的表达可能为防治 PND 提供新的思路和靶点。参考文献：1 Liu Y，Fu H，Wang T.Neuroinflammation in perioper原ative neurocognitive disorders：From bench to the bed原side J.CNS Neurosci Ther，2022，28（4）：484-496.2 彭山攀，谢海辉.围术期神经认知障碍的研究进展J.医学信息，2022，35（17）：151-155.3 Lee HB，Oldham MA，Sieber FE，et al.Impact of delir原ium after hip fracture surgery on one-year mortality inpatients with or without dementia：a case of effectmodification J.Am J Geriatr Psychiatry，2017，25（3）：308-315.4Fu C，Lin J，Gong G，et al.Inflammatory markers inpostoperative cognitive dysfunction for patients under原going total hip arthroplasty：a meta-analysis J.AgingClin Exp Res，2022，34（2）：277-288.5 Quinones MM，Gallegos AM，Lin FV，et al.Dysregula原tion of inflammation，neurobiology，and cognitive func原tion in PTSD：an integrative review J.Cogn AffectBehav Neurosci，2020，20（3）：455-480.6 Fang J，Yao X，Hou M，et al.ApoL1 induces kidneyinflammation through RIG-I/NF-资B activationJ.Biochem Biophys Res Commun，2020，527（2）：466-473.7 Sun L，Dong R，Xu X，et al.Activation of cannabinoidreceptor type 2 attenuates surgery-induced cognitiveimpairment in mice through anti-inflammatory activityJ.J Neuroinflammation，2017，14（1）：138.8 Abame MA，He Y，Wu S，et al.Chronic administrationof synthetic cannabidiol induces antidepressant effectsinvolving modulation of serotonin and noradrenalinelevels in the hippocampus J.Neurosci Lett，2021，744：135594.9 Yang X，Yu D，Xue 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pathway in the occurrence and de-velopment of perioperative neurocognitive disorders（PND）in aging mice.MethodsA total of 36 15-month-oldmale wild-type C57BL/6J mice were randomly divided into control group12 Doudakmanis C，Bouliaris K，Kolla C，et al.Bacterialtranslocation in patients undergoing major gastroin原testinal surgery and its role in postoperative sepsisJ.World J Gastrointest Pathophysiol，2021，12（6）：106-114.13 Li Z，Wang P，Li L，et al.Comparison between openreduction with internal fixation to circular externalfixation for tibial plateau fractures：A systematic re原view and meta-analysis J.PLoS One，2020，15（9）：e0232911.14 Wang Z，Liu T，Yin C，et al.Electroacupuncture pre原treatment ameliorates anesthesia and surgery-in原duced cognitive dysfunction via activation of an 琢7-nAChR signal in aged rats J.Neuropsychiatr DisTreat，2021，17：2599-2611.15Kell AM，Jr MG.RIG-I in RNA virus recognitionJ.Virology，2015，479（5）：110-121.16 Elion DL，Cook RS.Harnessing RIG-I and intrinsicimmunity in the tumor 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