DB23∕T 2803-2021 玉米茎基腐病抗性鉴定及评价技术规程.pdf

ICS 65.020.20B 16DB23黑龙江省地方标准DB 23/T28032021玉米茎基腐病抗性鉴定及评价技术规程2021- 01 - 25 发布2021 - 02 - 24 实施黑龙江省市场监督管理局发 布DB23/T 28032021I前言本标准依据GB/T 1.1-2009的编写规则起草。本标准由黑龙江省农业农村厅提出。本标准由黑龙江省农业科学院玉米研究所、东北农业大学、中国农业科学院作物科学研究所起草。本标准主要起草人：杨剑飞、李永刚、扈光辉、王天宇、李春辉、龚士琛、李国良、付立新、王明泉、任洪雷、胡少新、刘畅。DB23/T 280320211玉米茎基腐病抗性鉴定及评价技术规程1范围本标准规定了进行玉米茎基腐病抗性鉴定及评价技术的接种体制备、抗病性鉴定圃、接种、病情调查、抗病性评价和田间档案。本标准适用于栽培玉米（Zea MaysL.）自交系和杂交种对玉米茎基腐病的田间抗性鉴定和评价。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。 凡是注日期的引用文件， 其随后所有的修改单或修订版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 4401.1-2008粮食作物种子第1部分：禾谷类NY/T 1248.7-2016玉米抗病虫性鉴定技术规范第7部分：镰孢茎腐病DB 23/T 017-2008玉米生产技术规程3接种体制备3.1培养基制备取 200g 去皮马铃薯块，切成小块，加入 800ml1000mL 的水煮沸 30min，用双层纱布过滤后，用蒸馏水补足 1000mL，加入 20g 葡萄糖，少量多次加入共 18g 琼脂粉，并不断搅拌，分装至锥形瓶内，然后将其放置于温热灭菌器中 121灭菌 20min，将培养基倒入培养皿中，制成 PDA 平板培养基，备用。3.2病原菌准备取病健交接部分的组织，置于 75%的酒精中浸泡 2s3s，取出后置于质量体积比为 1%的次氯酸钠中浸泡 2min3min，再经无菌水换洗，晒干后转移至 PDA 平板培养基中，置于 2527环境中，黑暗培养 3d 后挑取病原菌至试管中保存。依据柯赫氏法则进行致病力测定，确定为玉米茎基腐病病原菌的菌株后采用形态学及分子生物学方法进行属种鉴定， 从比例占绝对优势的病原菌中选取致病力较强的菌株作为接种的目标菌株。3.3孢子悬浮液制备从试管中挑取目标菌株，接种到 PDA 平板培养基上，目标病原菌在 PDA 平板培养基上生长 7d 后，取直径 7mm 的菌碟接种到高粱粒培养基 （高粱粒用开水煮 20min 后， 转移至三角瓶中 121灭菌 45min）中，每个三角瓶中接种 5 个7 个菌碟，26黑暗培养，每天振荡三角瓶 1 次2 次，震荡时间 3min5min，待菌丝长满每个高粱粒的表面，然后用无菌水冲洗带菌的高粱粒，用灭菌双层纱布过滤后，利用血球计数板将孢子悬浮液浓度调整 1106孢子/ml，室温保存，2d3d 内使用。4抗病性鉴定圃DB23/T 2803202124.1鉴定圃设计鉴定材料采取随机排列，每隔50行鉴定材料设置1组已知抗病、感病对照材料，对照选用玉米自交系齐319（高抗） 、掖478（高感） 。鉴定圃设计符合NY/T1248.7-2016标准。鉴定材料采用双行区种植，小区行长5m，行距0.65m，植株密度为75000株/hm2。4.2鉴定圃播种鉴定材料播种时间与大田播种时间相当， 也可根据当年农业生产气候条件适当调整播种期。 播种时期符合 DB 23/T017-2008 标准。鉴定材料种子不进行包衣处理，播种方式采用机器开沟，人工点播，每穴点播种子2粒，出苗后每穴保留1株健康的植株。种子符合GB4401.1-2008标准。4.3田间管理田间管理及虫草害防治与大田生产相同， 田间管理过程中不使用对茎基腐病有防治作用的药剂， 生产过程符合DB 23/T017-2008标准。5接种5.1接种时期接种时期为玉米苗期，植株长至5片7片叶时。接种可全天进行。5.2接种部位及方法在植株靠近地表1.5cm2.0cm处， 用注射器以45角斜向下插入茎中心后缩回0.2cm0.5cm， 注入1.5ml孢子悬浮液。接种后进行常规田间管理。6病情调查6.1调查时间在鉴定材料接种25d后，即可进行调查。同一天接种的材料，应在同一天内完成调查。6.2调查方法调查时根据玉米植株生长情况进行病情分级，病情分级应按表1执行。记录每份鉴定材料的总株数和各发病级别株数。表1玉米茎基腐病鉴定田间病情指数分级病情分级植株生长情况0 级植株生长正常，无症状1 级叶片边缘有轻微坏死3 级植株略微矮小，畸形，外缘叶片有轻微的坏死5 级植株矮小明显，有轻微畸形外缘叶片基本上缺失7 级植株矮小明显，畸形明显，植株无法正常生长，心叶出现坏死DB23/T 2803202139 级植株矮小显著，畸形严重，心叶坏死或全株死亡7抗病性评价7.1抗病性评价方法根据不同材料的病情级别，计算每份鉴定材料的病情指数，病情指数计算公式见式1。()100(9)AANXDIN（式1）式中：DI代表病情指数；NA代表各病级发病株数，单位为株；XA代表相对病级数值；N代表调查总株数，单位为株。鉴定材料的抗性评价方法按表2执行。表2玉米对茎基腐病抗性的评价标准病情指数（DI）抗性DI10.0高抗 Highly resistant （HR）10.0DI20.0抗Resistant （R）20.0DI40.0感Susceptible （S）DI40.0高感 Highly susceptible （HS）7.2有效性判别当设置的高感对照材料达到高感程度，该批次鉴定视为有效。7.3重复鉴定当鉴定材料初次鉴定结果抗性表现为高抗或抗，应在第二年进行重复性鉴定。7.4抗病性评价将初次鉴定结果同重复鉴定结果进行比较， 以记载的最高病情指数为准， 依此结果对鉴定材料的抗病性进行评价。8田间档案应建立田间档案，内容包括：鉴定材料名称、接种时间、调查时间、接种总株数、各病情级别发病株数、病情指数和抗病性评价。