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33现代医学与健康研究Modern Medicine and Health Research基础研究/Basic Research2023 年第 7 卷第 15 期2023 Vol.7 No.1515 张竞宇,刘晓丹,范莹,等.肿瘤相关成巨噬细胞外泌体miR-92b靶向 PTEN 而诱导三阴性乳腺癌细胞自噬 J.中国临床药理学杂志,2023,39(1):32-36.16 刘飞,何贵金,鲍姝睿,等.miR-17-5p 通过靶向调控 PTEN 表达抑制乳腺癌的增殖、侵袭及迁移 J.解剖科学进展,2022,28(4):446-449.17 蔡冰,尹香利,刘静.乳腺癌组织中泛素特异性蛋白酶 18/干扰素刺激基因 15 表达水平及其临床意义 J.安徽医药,2023,27(7):1449-1454,1487.18 霍翔,吴兵,方德根,等.HER2阳性乳腺癌新辅助化疗疗效的影响因素及列线图预测模型建立 J.川北医学院学报,2023,38(1):126-129,136.19 贺新,彭书甲,师弘.乳腺癌患者原发灶与复发转移灶中 ER、PR、HER-2 及 Ki-67 表达异质性的回顾性分析 J.现代肿瘤医学,2023,31(9):1660-1665.20 张国平,陈小龙,杨传盛,等.HER-2、Ki-67 及 CD147 在乳腺癌中的表达及对病情进展和预后生存的评估 J.临床误诊误治,2021,34(6):66-70.可逆性肾动脉狭窄大鼠模型的建立与评估周 爽1,2，李学东2*，付鸿江2，孔宣柱2（1.承德医学院研究生学院，河北 承德 067000；2.泰达国际心血管病医院血管外科，天津 300457）【摘要】目的 建立一种新型的、可逆的两肾一夹肾性高血压大鼠（2K1C-RHR）模型，模拟临床中肾动脉狭窄患者血运重建的过程，并观察狭窄前后大鼠收缩压（SBP）的动态变化，评估模型的可逆性。方法 选择 50 只体质量为 250300 g 的 SPF 级健康 Sprague Dawley（SD）雄性大鼠，按照随机数字表法分为狭窄 3 d 组（10 只）、狭窄 5 d 组（10 只）、狭窄 7 d 组（10 只）、狭窄 14 d组（10 只）、狭窄 21 d 组（10 只）等模型组，另选择 5 只同类大鼠作为假手术组。使用内径为 0.3 mm 的食品级硅胶管缩窄肾动脉，并在缩窄肾动脉前、解除肾动脉狭窄前、解除肾动脉狭窄后分别测定大鼠的 SBP。结果 狭窄 3 d 组和狭窄 14 d 组的大鼠在狭窄术后各死亡 1 只，狭窄 21 d 组大鼠解除狭窄后死亡 2 只。与狭窄前比，解除狭窄前模型组各组大鼠 SBP 均显著升高，且狭窄 14 d 前随着狭窄时间的延长，SBP 升高越明显，狭窄 14 d 后 SBP 升高缓慢；狭窄 14 d 组大鼠狭窄前后 SBP 差值（SBP）显著高于其他各组。与解除狭窄前比，解除狭窄后模型组各组大鼠 SBP 均显著下降；与狭窄 3 d 组比，狭窄 5 d 组、狭窄 7 d 组大鼠的 SBP 均显著升高；狭窄 7 d 组大鼠 SBP 显著高于狭窄 3 d 组及狭窄 21 d 组大鼠，且狭窄 21 d 组低于狭窄 5 d 组（均P0.05）。结论 对于 2K1C-RHR 模型大鼠，在狭窄 7 d 内解除肾动脉狭窄其 SBP 容易恢复，狭窄时间越长，SBP 越不容易恢复，因此建立可逆性肾动脉狭窄大鼠模型是可行的，此模型的建立为今后探索最佳肾动脉血运重建的时机奠定了基础。【关键词】两肾一夹;肾动脉狭窄;肾血管性高血压;大鼠;可逆性【中图分类号】R544.1+4 【文献标识码】A 【文章编号】2096-3718.2023.15.0033.04DOI：10.3969/j.issn.2096-3718.2023.15.010基金项目：2017 年天津市滨海新区卫生计生委科技项目（编号：2017BWKZ009）作者简介：周爽，2021 级在读硕士生，研究方向：外科学（血管外科）。通信作者：李学东，硕士研究生，主任医师，研究方向：血管外科。E-mail：lixuedong_肾血管性高血压（renovascular hypertension,RVH）通常是由肾动脉闭塞或肾动脉狭窄（renal artery stenosis,RAS）而引起肾脏灌注压下降，激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS），最终导致血压升高。RAS 引起的 RVH 是继发性高血压最常见的病因，其中动脉粥样硬化性肾动脉狭窄（atherosclerotic renal artery stenosis,ARAS）是引起 RAS 最主要的病因，约占 RAS 患者的80%1-2。两肾一夹肾性高血压大鼠（2K1C-RHR）模型是研究肾血管性高血压最常见的动物模型之一，最初有研究应用不同尺寸的银夹缩窄狗的肾动脉进行模型的制作，从而为 RVH 产生的机制及对其他器官影响的研究奠定了基础3-4。然而，由于传统的银夹材质软，易变形，内径容易发生改变，且容易脱落，往往会造成模型的成功率下降。基于此，本研究使用食品级硅胶管缩窄肾动脉，既可保证 RAS 程度一致，又可以避免 RAS 的材料脱落，从而提高模型重建成功率。在 2K1C-RHR 大鼠模型建立成功后，还需恢复狭窄的肾动脉，以满足肾动脉血运可以复通的条件，本研究模拟临床中的肾动脉血运重建的过程，并探究模型的可逆性，为今后研究降压药与支架置入术对大鼠血压的影响奠定基础，现报道如下。34基础研究/Basic Research现代医学与健康研究Modern Medicine and Health Research2023 年第 7 卷第 15 期2023 Vol.7 No.151 材料与方法1.1 实验动物 55 只体质量为 250300 g 的健康 Sprague Dawley（SD）雄性大鼠，SPF 级，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK（京）2017-0005，饲养于天津市滨海新区医学动物实验中心。所有动物实验方案均符合泰达国际心血管病医院动物伦理委员会相关规定与条例。1.2 实验方法1.2.1 实验前的准备 实验开始前，将大鼠置于带有垫料的鼠笼，并置于专门饲养大鼠的屏障中，自由进食、饮水，室温保持在 25 左右，对大鼠进行至少 1 周的适应性喂养。将 50 只大鼠按照随机数字表法分为狭窄 3 d组（10 只）、狭窄 5 d 组（10 只）、狭窄 7 d 组（10 只）、狭窄 14 d 组（10 只）和狭窄 21 d 组（10 只），将另 5 只同类大鼠作为假手术组。除了假手术组外，其他统称为模型组。术前 3 d 所有大鼠均灌胃阿司匹林肠溶片（石家庄康力药业有限公司，国药准字 H13024364，规格：25 mg/片），剂量为 9 mg/kg体质量，1 次/d，连续使用 3 d。1.2.2 模型构建及解除肾动脉狭窄方法 术前禁食 12 h后，使用装有异氟烷（天津瑞普生物技术股份有限公司，兽药字 020037015，规格：100 mL/瓶）的小动物麻醉机（天津德鸿盛生物科技有限公司，型号：DHS-MS-3）对大鼠进行吸入麻醉。将大鼠置于 37 的恒温加热垫上，固定四肢，剃除腹部毛发，碘伏消毒术区皮肤。于肋弓下腹正中线外侧偏左 0.51 cm 处作一长 23 cm 的切口纵行切开，用组织剪将肌肉剪开相应大小的开口，充分暴露腹腔后，用纱布将左侧的结肠和小肠推至右侧显露左侧肾脏，将左侧肾动脉与肾静脉分离，管径较细的为肾动脉，粗的为肾静脉，如图 1-A 所示。在靠近主动脉处的肾动脉上套入内径为 0.30 mm，厚约 1 mm 的食品级硅胶管，如图 1-B 所示。手术结束后，取出腹腔内的纱布，处理干净渗液，仔细检查腹腔内无出血和肠管损伤后，恢复肠管的生理位置，然后用 5-0 丝线依次间断缝合关闭腹膜、肌肉及皮肤。假手术组的大鼠除了没有进行肾动脉缩窄外，其他操作均与模型组相同。术后继续灌胃使用阿司匹林至解除狭窄的前 1 天，剂量同术前。模型组的大鼠分别于术后 3、5、7、14、21 d 时拆除软管，均再次打开腹腔，仔细分离肾动脉周围组织并取出置入的硅胶管，其中狭窄 7 d 组大鼠取出硅胶管后肾动脉如图 1-C 所示。各模型组大鼠取出硅胶管后，仔细检查腹腔内无出血和肠管损伤后，恢复肠管的生理位置，然后用 5-0 丝线依次间断缝合关闭腹膜、肌肉及皮肤，术后观察 1 h，然后单独饲养，允许自由进食和饮水。每次手术结束后，各大鼠均肌肉注射头孢呋辛钠（深圳信立泰药业股份有限公司，国药准字 H20000410，规格：0.75 g/支），剂量为 0.2 g/kg体质量，3 次/d，连续使用 3 d。1.2.3 血压测量方法 清醒状态下的大鼠，在肾动脉狭窄模型建立前、解除肾动脉狭窄前、解除肾动脉狭窄后分别用小动物无创血压测量仪（北京众实迪创科技发展有限责任公司，型号：ZS-BPIV）测量收缩压（SBP）。测量前，将保温桶调节至适当温度，并诱导大鼠进入温度适宜且具有黑暗环境的保温桶中，用鼠袋裹住保温筒，将测压气囊置于鼠尾根部，待其安静至少 10 min 再进行测量，测量 3 次 SBP，取平均值。1.3 观察指标 比较假手术组和模型组大鼠肾动脉狭窄前后 SBP 差值（SBP）。比较假手术组和模型组大鼠解除肾动脉狭窄前后 SBP。1.4 统计学方法 所有数据均使用 SPSS 23.0 统计学软件进行分析，计量资料经 S-W 法检验均符合正态分布且方差齐，以(xs)表示，两组间比较行t检验，多组间比较采用重复测量方差分析，两两比较采用 SNK-q检验。以P0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 假手术组与模型组大鼠肾动脉狭窄前后 SBP 比较 狭窄 3 d 组和狭窄 14 d 组的大鼠在狭窄术后各死亡 1 只，狭窄 21 d 组大鼠解除狭窄后死亡 2 只。与狭窄前比，解除狭窄前模型组各组大鼠 SBP 均显著升高，且狭窄14 d 前随着狭窄时间的延长，SBP 升高越明显，狭窄 14 d 后SBP 升高缓慢，狭窄 14 d 组狭窄前后 SBP 显著高于其他各组，差异均有统计学意义（均P0.05），见表 1、图 2。2.2 假手术组与模型组大鼠解除狭窄前后 SBP 比较 与解除狭窄前比，解除狭窄后模型组各组大鼠 SBPA 肾动脉狭窄前B 肾动脉狭窄后C 狭窄 7 d 组解除狭窄后图 1 模型构建及解除肾动脉狭窄示意图35现代医学与健康研究Modern Medicine and Health Research基础研究/Basic Research2023 年第 7 卷第 15 期2023 Vol.7 No.15均显著下降；与狭窄 3 d 组比，狭窄 5 d 组、狭窄 7 d 组大鼠的 SBP 均显著升高；狭窄 7 d 组大鼠 SBP 显著高于狭窄 21 d 大鼠，且狭窄 21 d 组低于狭窄 5 d 组，差异均有统计学意义（均P0.05），见图 3、表 2。表 1 假手术组与模型组大鼠狭窄前后 SBP 及 SBP 比较(mmHg，xs)组别只数狭窄前 SBP 值解除狭窄前SBP 值狭窄前后 SBP假手术组587.404.3491.606.11狭窄 3 d 组989.117.52112.117.47*23.008.69狭窄 5 d 组1091.304.99124.306.04*33.005.83#狭窄 7 d 组1091.005.08 132.1014.82*41.1013.03#狭窄 14 d 组989.114.31 162.0013.34*72.8914.08#狭窄 21 d 组890.757.03 156.0012.87*65.2512.95#注：与狭窄前 SBP 值比，*P0.05；与狭窄 3 d 组比，#P0.05；与狭窄 5 d 组比，P0.05；与狭窄 7 d 组比，P0.05。SBP：收缩压。1 mmHg=0.133 kPa。表 2 假手术组与模型组大鼠解除狭窄前后 SBP 比较(mmHg，xs)组别只数解除狭窄前 SBP 值解除狭窄后 SBP 值解除狭窄前后SBP假手术组 5 91.606.1188.005.15狭窄 3 d 组 9112.117.47 92.117.04 20.008.56狭窄 5 d 组10124.306.04 94.604.79 29.707.63#狭窄 7 d 组10 132.1014.82 98.006.1134.1012.27#狭窄 14 d 组 9 162.0013.34 135.6712.35 26.339.41狭窄 21 d 组 8 156.0012.87 136.8810.22 19.137.26 注：与解除狭窄前SBP值比，P0.05；与狭窄3 d组比，#P0.05；与狭窄 5 d 组比，P0.05；与狭窄 7 d 组比，P0.05。3 讨论虽然 2K1C-RHR 大鼠模型已经广泛应用于各项研究中，但有文献报道，用血管夹制作的 2K1C-RHR 大鼠和小鼠的模型成功率低5-6，其原因是各种材质的血管夹均存在一定的缺陷。制作 2K1C-RHR 大鼠模型的银夹，银是最早应用于 2K1C-RHR 大鼠模型的材料7，由于银的延展性好，易于变形，操作过程中会由于术者的力度不均，导致RAS 的程度不能保持一致，结果将会导致得到的大鼠 SBP值不准确。如果狭窄程度轻，则血压上升缓慢，甚至血压可能不会发生明显改变；如果变形严重，将会导致其在动物体内极易滑脱，导致模型的失败率增高。戴勇等8用丝线和针灸针缩窄肾动脉，将针灸针与肾动脉平行放置，用丝线将两者系在一起，然后撤出针灸针，造成肾动脉狭窄。理论上针灸针去除后能够留出部分空隙，使肾动脉缩窄为理想直径，实际上，丝线结扎的力度无法保持一致，结扎力度大，狭窄程度大，结扎力度小，狭窄程度小；另一方面，动脉管壁具有较大弹性，即使撤除针灸针，管壁也无法恢复到理想状态，若结扎过紧会导致肾动脉闭塞。丝线的表面是粗糙的，使用丝线结扎肾动脉会损坏血管壁，易形成血栓，有可能导致肾动脉完全闭塞，模型失败率增大。用钛夹和针头缩窄肾动脉同样存在弊端，当针头与肾动脉并行放置时，由于钛夹呈 V 形，使用钛夹将肾动脉和针头一起夹住时，夹子会留有一定的空隙，肾动脉也许会滑到空隙中，并不能确保肾动脉被均匀的缩窄成理想中的程度9-10；用钛夹制作 2K1C-RHR 大鼠模型，会损伤血管壁，破坏管壁弹性，导致肾动脉无法顺利地恢复血运。综合以上模型的不足，本研究最终决定采用一种内壁光滑的圆形内径材料，可以均匀地收缩肾动脉，而且不会对肾动脉管壁造成伤害，受操作者手法的影响小。本研究采用内径为 0.30 mm 的食品级硅胶管收缩肾动脉，大鼠 SBP升高明显。结果可以发现，在狭窄 3 d 时 SBP 开始升高，并且在狭窄 14 d 左右达到高峰，事实证明此方法可以在相对短时间内成功制作 RVH 模型。根据研究结果可知，SBP不会随着狭窄时间的延长无限增高，本实验肾动脉只有一侧狭窄，考虑另一侧健康的肾脏会起到代偿的作用，因而肾动脉狭窄到一定时间时，SBP 不会再继续明显升高，反而会有轻度下降的趋势，但基本不会下降到正常范围，肾动脉狭窄程度不同，大鼠 SBP 升高程度也不同。拆除硅胶管后，肉眼可见肾动脉管腔内有血流通过，动脉搏动和管壁弹性仍然存在。选择肉眼观察有一定局限性，因此本研究仍然通过血压变化判断肾动脉血运是否恢复。由本研究表 2 结果发现，拆除硅胶管后，即肾动脉狭窄解除之后，大鼠 SBP 下降。使用硅胶管缩窄肾动脉，不仅可以使血压升高，对肾动脉管壁不会造成明显的损伤，图 2 假手术组与模型组大鼠狭窄前后 SBP图 3 假手术组与模型组大鼠解除狭窄前后 SBP36基础研究/Basic Research现代医学与健康研究Modern Medicine and Health Research2023 年第 7 卷第 15 期2023 Vol.7 No.15而且还可以使狭窄后的肾动脉恢复正常血运。此外，狭窄7 d 内 SBP 均容易恢复，而狭窄 14 d 及 21 d 组的 SBP 很难恢复到术前的水平，说明狭窄时间越长，大鼠的 SBP 越不容易恢复。因此 RAS 后应该尽早干预，不应该单纯将狭窄程度作为手术标准。综上，对于 2K1C-RHR 模型大鼠，在狭窄 7 d 内解除RAS其SBP容易恢复，狭窄时间越长，大鼠的SBP越不容易恢复，因此建立可逆性肾动脉狭窄大鼠模型是可行的，此模型的建立为今后探索最佳肾动脉血运重建的时机奠定了基础。本研究不足之处是无法真正模拟临床中RAS形成的过程，在 RAS 的病因中最常见的 ARAS 形成是一个缓慢的过程，今后的实验中我们拟使用一种可以缓慢膨胀的材料，使大鼠的肾动脉呈一种缓慢狭窄的状态。参 考 文 献1 郝炎,杨乔岚,余翼,等.肾动脉狭窄合并动脉粥样硬化大鼠模型的建立 J.重庆医学,2012,41(6):581-583,626.2 陈津,周颖玲,罗德谋,等.肾动脉狭窄大鼠模型的心脏结构及微循环改变 J.岭南心血管病杂志,2015,21(4):539-543.3 CHELKO S P,SCHMIEDT C W,LEWIS T H,et al.A novel vascular clip design for the reliable induction of 2-kidney,1-clip hypertension in the rat J.J Appl Physiol,2012,112(3):362-366.4 秦秋华,蒋伟哲,施晓霞,等.肾性高血压大鼠模型制备方法的改进 J.广西医科大学学报,2011,28(5):671-673.5 吴浩,陈清枝,邢淑华,等.Pyk2 介导的细胞信号转导在两肾一夹肾性高血压大鼠心肌肥大时的变化 J.徐州医学院学报,2005,25(2):102-106.6 黄朝晖,吴雄飞,赵洪雯,等.ApoE-/-小鼠肾动脉狭窄及肾损害特点观察 J.第三军医大学学报,2007,29(19):1844-1847.7 杨学伟,陈军,崇卓,等.肾血管性高血压大鼠模型的建立和评测(英文)J.中国临床康复,2006,10(40):165-167.8 戴勇,彭武建,徐卓佳.“两肾一夹”肾性高血压大鼠模型的改进 J.实验动物科学与管理,2006,23(2):60-62.9 毛晓燕,胡东旭,冉兵.肾性高血压模型建立法:从“两肾一夹”到“单肾可控结扎”J.泸州医学院学报,2014,37(2):172-174.10 李悦梅,万载阳,杨保堂,等.两肾一夹肾血管性高血压大鼠(2K1C-RHR)肾脏内的血管重构 J.高血压杂志,2003,11(2):147-150.结直肠癌组织中吻素-1、周期蛋白 E 的表达及其临床意义陈文倩1，丁晓璐2（1.常熟市第一人民医院肿瘤科；2.常州市第一人民医院病理科，江苏 苏州 215500）【摘要】目的 探讨吻素-1（Kiss-1）、周期蛋白 E（Cyclin E）在结直肠癌组织中的表达情况，分析其阳性表达与患者临床病理特征的关系，以期为临床治疗该疾病提供参考依据。方法 回顾性分析常熟市第一人民医院 2016 年 1 月至 2020 年 3 月接受手术治疗的 85例结直肠癌患者的临床资料，并搜集其术后结直肠癌组织与癌旁组织石蜡标本，分别作为结直肠癌组、癌旁组；采用免疫组织化学染色法检测两组 Kiss-1、Cyclin E 蛋白表达情况；分析 Kiss-1、Cyclin E 蛋白表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系。结果 结直肠癌组中Kiss-1 阳性表达患者占比显著低于癌旁组，Cyclin E 阳性表达患者占比显著高于癌旁组（均P0.05）；Kiss-l 蛋白阳性表达中低分化、有淋巴结转移、+分期患者占比均显著低于 Kiss-l 蛋白阴性表达；Cyclin E 蛋白阳性表达中有淋巴结转移、+分期患者占比均显著高于 Cyclin E 蛋白阴性表达（均P0.05）。结论 结直肠癌组织中 Kiss-1 蛋白低表达，Cyclin E 蛋白高表达，且两者阳性表达均与患者临床病理特征有关，早期可通过检测上述指标对患者的病情进行判断。【关键词】结直肠癌;吻素-1;周期蛋白 E【中图分类号】R735.3 【文献标识码】A 【文章编号】2096-3718.2023.15.0036.04DOI：10.3969/j.issn.2096-3718.2023.15.011作者简介：陈文倩，大学本科，主治医师，研究方向：消化道肿瘤。结直肠癌是严重危害人类生命健康的常见消化系统恶性肿瘤，虽然各种综合治疗手段不断发展，但总体生存率依旧欠佳，其原因主要是远处转移高发生率及肿瘤局部高复发率，因此抑制和治疗结直肠癌远处转移是影响患者预后重要因素。结直肠癌的发生和进展呈多因素、多阶段性，与多个癌基因的激活和过度表达、抑癌基因及脱氧核糖核酸（DNA）修复基因突变或功能缺失密切相关。目前，肿瘤细胞形成的分子机制及其与癌基因和抑癌基因的关系已成为研究热点。吻素-1（Kiss-1）是从黑色素瘤细胞株中发现的一种肿瘤转移抑制基因，具有抑制肿瘤