DB35_T+1514-2015+农产品中白藜芦醇的测定+高效液相色谱法（打印版）-(高清版）.pdf

ICS 11.120.10 C 15 DB35 福建省地方标准 DB35/T 15142015 农产品中白藜芦醇的测定 高效液相色谱法 Determination of resveratrol in agricultural products High performance liquid chromatography method 2015-06-26 发布 2015-09-26 实施福建省质量技术监督局 发 布 DB35/T 15142015 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写给出的规则起草。本标准由福建省农业科学院提出。本标准由福建省农业厅归口。本标准起草单位：福建省农科院中心实验室 本标准主要起草人：潘葳、涂杰峰、刘文静、罗钦。DB35/T 15142015 1 农产品中白藜芦醇的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了农产品中白藜芦醇含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于花生衣、葡萄皮、苜蓿、虎杖、藜芦等农产品中白藜芦醇含量的测定。本标准方法测定花生衣、葡萄皮、苜蓿中白藜芦醇含量的检出限均为0.6 g/g，定量限均为2.0 g/g；虎杖、藜芦中白藜芦醇含量的检出限均为7.5 g/g，定量限均为25 g/g。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法。3 原理 用乙醇-水溶液提取试样中的白藜芦醇，提取液离心后，取上清液，经微孔滤膜过滤，高效液相色谱-紫外检测法测定，外标法定量。4 试剂和材料 除另有规定，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682-2008中一级要求。4.1 无水乙醇（C2H6O）。4.2 甲醇（CH4O）：色谱纯。4.3 乙腈（C2H3N）：色谱纯。4.4 冰醋酸（C2H4O2）。4.5 85%乙醇溶液：取 850 mL 无水乙醇（4.1），加 150 mL 水，混匀。4.6 白藜芦醇标准品（CAS 501-36-0，反式）：纯度99%（质量分数）。4.7 0.1%乙酸溶液：取 1.0 mL 冰醋酸（4.4），用水稀释并定容至 1000 mL。4.8 流动相：将 26 体积乙腈（4.3）与 74 体积 0.1%乙酸溶液（4.7）混合。使用前经微孔滤膜（5.9）过滤并脱气。4.9 白藜芦醇标准储备液（500 g/mL）：称取 50 mg（精确至 0.1 mg）白藜芦醇标准品（4.6），置于100 mL 容量瓶（5.11）中，用甲醇（4.2）溶解并定容至刻度，配制成浓度为 500 g/mL 的标准储备液，2 8 避光保存，有效期 2 个月。4.10 白藜芦醇标准工作液：分别准确移取 0.01 mL、0.05 mL、0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL 白藜芦醇标准储备溶液（4.9）于不同的 50 mL 容量瓶（5.11）中，用流动相溶液（4.8）稀释并定容至刻度，摇匀，得到不同浓度的白藜芦醇标准工作溶液（质量浓度分别为 0.1 g/mL、0.5 g/mL、1 g/mL、5 g/mL、10 g/mL），即配即用。DB35/T 15142015 2 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2 电子天平：感量 0.1 mg。5.3 电热鼓风干燥箱：温度可控制。5.4 粉碎机：高速万能粉碎机，转速 24 000 r/min，或相当的设备。5.5 涡旋振荡器。5.6 超声波清洗器：功率不低于 250 W，或相当的设备。5.7 离心机型号 1：体积 50 mL，转速不低于 4 000 r/min 或相当的设备；5.8 离心机型号 2：体积 2 mL，转速不低于 10 000 r/min 或相当的设备。5.9 微孔滤膜：0.22 m，直径 25 mm 的聚砜膜或相当者。5.10 离心管：50 mL（螺旋盖），1 mL。5.11 容量瓶：100 mL、50 mL（棕色）。5.12 分样筛：筛网孔径为 250 m。6 分析步骤 以下操作尽可能避免阳光直射。6.1 样品前处理 6.1.1 试样制备 将花生衣、葡萄皮、苜蓿、虎杖、藜芦等样品置于干燥箱（5.3）中，60 恒温干燥至恒重，冷却至室温后，分取样品约100 g，用粉碎机（5.4）粉碎，过分样筛（5.12），备用。6.1.2 提取 称取花生衣、葡萄皮、苜蓿等粉碎样品约 2.5 g（精确到 0.1 mg）；虎杖、藜芦等粉碎样品约 0.2 g（精确到 0.1 mg）于 50 mL 离心管（5.10）中，加入 30 mL 85%乙醇溶液（4.5），涡旋振荡器（5.5）涡旋振荡 2 min，旋紧盖子，用超声波清洗器（5.6）超声波萃取 15 min，萃取功率为 250 W，用离心机（5.7）4 000 r/min 离心 10 min，将上层溶液移入 50 mL 容量瓶（5.11）中。再分 2 次各用 10 mL 85%乙醇溶液（4.5）重复以上振荡、萃取和离心步骤，合并提取液于 50 mL 容量瓶（5.11）中，用 85%乙醇溶液（4.5）定容至刻度，摇匀。移取 1 mL 定容液，用离心机（5.8）10 000 r/min 离心 10 min，离心后的上清液经微孔滤膜（5.9）过滤，滤液待上机测定（72 h 内完成测定）。6.2 样品测定 6.2.1 高效液相色谱参考条件 以下分析条件可供参考，采用其它条件应验证其适用性：色谱柱：C18，150 mm4.6 mm i.d.，粒径3 m，或性能相当者；柱温：40；紫外检测波长：306 nm；流速：1.0 mL/min；进样体积：10 L。DB35/T 15142015 3 6.2.2 液相色谱测定 分别取适量的白藜芦醇标准工作溶液（4.10）及待测样液，按 6.2.1 列出的条件进行液相色谱分析测定。由保留时间进行定性，外标法定量，根据标准工作溶液的浓度及白藜芦醇响应峰面积，建立标准工作曲线。工作曲线线性相关系数 R20.99。待测样液中白藜芦醇的响应值应在标准曲线范围内，超过线性范围则应稀释后再进行分析。分析间每 20 次样品测定后应加入一个与样品峰面积相近的标准工作液，如果测得的值与原值相对平均偏差超过 5%，则应重新进行标准曲线的制作。标准样品及典型样品色谱图参见附录 A。7 结果计算与表示 7.1 结果计算 试样中白藜芦醇的含量按式（1）进行计算：mfVcX.(1)式中：X试样中白藜芦醇的含量（以质量分数计），单位为微克每克（g/g）；c由标准工作曲线得出的白藜芦醇浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；f 试样稀释倍数；m试样质量，单位为克（g）。7.2 结果表示 测定结果以平行测定的算术平均值表示，计算结果保留两位有效数字。在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8 精密度和回收率 本标准的精密度与回收率试验结果参见附录 B。9 检验报告 检验报告应包括以下内容：识别被测试样需要的所有信息；依据本标准方法；白藜芦醇的测定结果；实验日期；测定人员。此外，还需说明使用的方法，还应包括本标准未规定的或选择性的条件，以及可能影响结果的其它条件。测试报告应包括试样的唯一性资料。DB35/T 15142015 4 A A 附 录 A（资料性附录）色谱图示例 标准溶液及典型样品色谱图示例分别见图A.1图A.6。图A.1 标准溶液色谱图 图A.2 花生衣试样色谱图 DB35/T 15142015 5 图A.3 葡萄皮试样色谱图 图A.4 苜蓿试样色谱图 DB35/T 15142015 6 图A.5 虎杖试样色谱图 图A.6 藜芦试样色谱图 DB35/T 15142015 7 B B 附 录 B（资料性附录）精密度和回收率试验研究结果 本方法的精密度和回收率研究结果见表B.1。表B.1 方法的精密度与回收率 样品 RSD%(n=6)平均回收率%日内 日间 低 中 高 花生衣 4.9 4.8 95.1 96.7 97.6 葡萄皮 3.7 4.3 97.1 99.7 96.8 苜蓿 4.5 4.6 91.6 98.6 97.4 虎杖 1.7 3.3 98.9 99.5 96.6 藜芦 1.9 3.2 97.9 98.0 97.7 _ DB35/T 15142015 福建省地方标准 农产品中白藜芦醇的测定 高效液相色谱法 DB35/T 15142015*2015 年 11 月第一版 2015 年 11 月第一次印刷