实验动物质量控制.ppt

<p>单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验动物质量控制,北京大学医学部实验动物科学部,周淑佩,Tel:[phone],实验动物,质量,营养控制,遗传控制,微生物控制,环境控制,实验动物质量控制,怎样才能养好实验动物作好动物实验？,*从种子中心引种,*拥有合格的饲养管理人员,*执行标准操作规范（,SOP,）,*,实验动物种群饲养在合格的实验动物繁育、生产设施（普通环境、屏障环境、隔离环境）内。,*使用合格的饲料,*,使用合格的实验动物（遗传学分类和按微生物控制分类）,*合格的实验动物饲养在合格动物实验设施（普通环境、屏障环境、隔离环境）内。,*科技人员要持证上岗,*特殊实验需在特殊环境（,感染、放射、转基因、,GLP,等）中进行操作，确保实验人员及周围环境不受伤害。,实验动物遗传学控制,近交系,封闭群（远交群）,杂交群,实验动物按遗传学控制分类,近交系（,Inbred Strain),定义,在一个动物群体中，任何个体基因组中,99%,以上的等位位点为纯合时定义为近交系。,经连续,20,代以上的全同胞兄妹交配或亲子交配，近交系数大于,99,%,，品系内所有个体都可追溯到第,20,代或以后代数的一对共同祖先。,近交系数：,群体中某个体通过遗传携带两个同源等位基因的概率。,近交系（,Inbred Strain),命名,一般以大写英文字母或大写英文字母加阿拉伯数字命名。,BALB,DBA,TA1,C3H,等。一些历史较长，已经广泛使用并获得认可的品系除外，如,129,等。,亚系（,Substrain,),定义,一个近交系内各个分支的动物之间，因遗传分化而产生差异，成为近交系的亚系。,亚系的形成,兄妹交配,20-40,代时形成的分支；主要原因是,残留杂合,某分支与其他分支分开繁殖超过,100,代；主要原因是,突变,发现一个分支与其他分支的差异。原因为,残留杂合,、,突变,或,遗传污染,亚系（,Substrain,),亚系命名,在品系名称后加一道斜线（,/,），斜线后标,明亚系的符号，亚系的符号可以是以下三种：,数字，如,DBA/1,、,DBA/2,等。,培育或产生亚系的单位或人的缩写英文名称，第一个字母用大写，以后的字母用小写。使用缩写英文名称应注意不要和已公布过的名称重复。例如：,A/He,，,表示,A,近交系的,Heston,亚系；,CBA/J,，,表示由,Jackson,保持的,CBA,近交系的亚系。,亚系（,Substrain,),亚系命名,当一个保持者保持的一个近交系具有两个以上的亚系时，可在数字后再加保持者的缩写英文名称来表示亚系。如：,C57BL/6J,，,C57BL/10J,分别表示由美国杰克逊研究所保持的,C57BL,近交系的两个亚系。,作为以上命名方法的例外情况是一些建立及命名较早，并为人们所熟知的近交系，亚系名称可用小写英文字母表示，如,BALB/c,、,C57BR/cd,等。,由于遗传污染形成的亚系，通常与原品系之间遗传差异较大，因此对这样形成的亚系应重新命名。例如由,GLaxo,保持的,A,近交系在发生遗传污染后，重新命名为,A2G,。,近交系的主要特征,基因位点的纯合性,遗传组成的同源性,表型的一致性,长期遗传的稳定性,遗传特征的可分辨性,对外界因素的敏感性,遗传组成的独特性,分布的广泛性,生育力和繁殖力较低,背景资料的完整性,动物个体具有相同的遗传组成和特性，因而对实验反应极为 一致,只需用少量的动物，即可得到非常规律的实验结果；,动物个体之间组织相容性抗原一致，异体移植不产生排斥反应；,每个近交系都有各自鲜明的生物学特点,。,近交系的名称缩写,近交系名称 缩写名称,C57BL/6 B6,BALB/c C,DBA/2 D2,C3H C3,近交系名称中常见的缩写符号,f(foster nursing):,代乳,o(ovary):,卵巢移植,p:,表示移植的胚胎经过冷冻处理,e(egg):,受精卵转输,BR:Barrier Reared,CRL:Charles River Laboratories,CRJ:Charles River Japan,常用亚系符号,N,或,NIH:,美国国立卫生研究院,J,或,Jax,:The Jackson Laboratory,He:,美国,NCI,的,W.E.,Heston,博士,An:,美国国立肿瘤研究所（,NCI),Jie,:,日本实验动物中央研究所,Ola:,英国牛津郡实验动物场,近交系动物命名实例,DBA/1fC57BL/6J,DBA:,小鼠品系名,1,：亚系名,f,：,表示代乳,C57BL:,代乳母鼠品系名称,6,：亚系名,J,：,亚系名,特殊类型的近交系,重组近交系（,Recombinant Inbred Strain),重组同类系（,Recombinant,Congenic,Strain),同源突变系（,Coisogenic,Inbred strain),同源导入系（,Congenic,Inbred Strain),重组近交系,(RI),定义,：,由两个近交系杂交后，经连续,20,代以上兄妹交配育成的近交系。,命名：,由两个亲代近交系的缩写名称中间加大写英文字母,X,。,重组同类系,(RC),定义：,由两个近交系杂交后，子代与两个亲代中的一个进行数次回交（通常,2,次），再经不对特殊基因选择的近亲交配（通常大于,14,代）而育成的近交系。,命名：,两个亲代近交系缩写名称中间加小写字母,c,。,同源突变系,定义：,两个近交系，除了一个指明位点等位基因不同外，其遗传基因全部相同的品系。,命名：,由发生突变的近交系名称后加突变基因符号（用英文斜体印刷体），二者之间以连接号分开。如：,DBA/Ha-,D,同源导入系,定义：,通过回交（,backcross),方式形成的一个与原来的近交系只是在一个很小的染色体片段上有所新的近不同的新的近交系。,要求至少回交,10,个世代，供体品系的基因组占基因组总量在,0.01,以下。,同源导入系,命名：,由以下三部分组成：,a.,接受导入近交系缩写名称；,b.,提供导入基因的近交系缩写名,称并与,a,之间用英文句号分开；,c.,导入基因符号（英文斜体），与,b,之间用连字符分开。如：,B10.129-,H-12b,表示该同类系背景为,C57BL/10,导入基因为,H-12b,基因提供者为,129,。,封闭群（,Closed Colony),定义,以非近亲交配方式进行繁殖生产的实验动物种群,在不从外部引入新个体的条件下,至少连续繁殖,4,代以上,称为一个封闭群,或叫远交群。,命名,封闭群由,2-4,个大写英文字母命名,种群名称前标明保持者的英文缩写名称,第一个字母须大写,后面字母小写,一般不超过,4,个字母。保持者名称与种群名称之间用冒号分开。,封闭群（,Closed Colony),N:NIH,美国卫生研究院（,N),保持的,NIH,封闭群小鼠,Lac:LACA,英国实验动物中心（,Lac),保持的,LACA,封闭群小鼠,某些命名较早，又广为人知的封闭群动物，名称与上述规则不一致时，仍可沿用其原来的名称。如：,Wistar,大鼠，日本的,ddy,小鼠等,把保持者的缩写名称放在种群名称的前面，二者之间用冒号分开，是封闭群动物与近交系动物命名中最显著的区别,近交系命名规则中的一些符号也适用于封闭群动物的命名,封闭群动物的特点,遗传组成具有很高的杂合性,具有类似于人类群体遗传异质性的遗传组成,具有较强的繁殖力、生活力和抵抗力,突变种所携带的突变基因通常导致动物在某方面的异常，从而成为生命科学研究的模型,常用封闭群动物,昆明小鼠（,KM),、,NIH,小鼠、,ICR,小鼠、,Wistar,大鼠、,SD,大鼠,Hartley,豚鼠,日本大耳白兔、新西兰白兔、青紫蓝兔,Beagle,狗,杂交群（,Hybrids),定义,由不同品系或种群之间杂交产生的后代,杂交一代动物（,F1,代,),：,两个不同近交系或种群杂交所生的第一代动物,命名,雌性亲代名称在前，雄性亲代名称居后，二者之间以大写英文字母“,X”,相连，将以上部分用括号括起，再在其后标明杂交的代数（如,F1,、,F2,等）,品系或种群的名称可使用通用的缩写名称例如：,（,C57BL/6XDBA/2,）,F1=B6D2F1,表示以,C57BL/6,为母系,DBA/2,为父系杂交后生育的杂交一代,可简写为,B6D2F1.,F1,动物的特征和应用,遗传和表型上的一致性,：表型变异率低，对周围环境变化适应性较强，实验反应高度均一；,杂交优势,：具较强的生命力和对疾病的抵抗能力，寿命较长，适合于保存某些有害基因和长期慢性致死实验，也可作为代乳动物以及卵、胚胎和卵巢移植的受体；,杂合的遗传组成,：同时具有两个亲本品系的特点，可接受两个亲本品系的细胞、组织、器官和肿瘤移植。,如何保持实验动物遗传稳定？,严格的繁育制度,按期进行遗传监测,遗传监测的主要方法,毛色基因测试法,生化标记基因检测法,下颌骨测定法,皮肤移植法,实验动物微生物与寄生虫控制,前 言,实验动物传染病、寄生虫质量控制是实验动物标准化的重要内容之一。因为：,1,、实验动物感染的某些人兽共患微生物、寄生虫能够导致我们实验工作者感染其共患疾病；,2,、直接导致实验动物的大量死亡；,3,、结果不真实。,前 言,国家标准要求总共排除,20,种以上细菌、,25,种以上病毒，,8,种以上寄生虫。,第一节 按微生物学和寄生虫学质量控制分类,按微生物和寄生虫的控制程度，将实验动物划分为,1.,普通级动物,(Conventional Animal,C.V),2.,清洁动物,(Clean,Animal,C.L,),3.,无特定病原体动物,(Specific Pathogen Free,SPF),4.,无菌动物,(Germfree Animal,G.F),四个等级，后者包括悉生动物,。,饲养在普通环境中，不携带人畜共患病和动物烈性传染病病原体的动物。,如鼠痘病毒、流行性出血热病毒、弓形虫。,普通级动物,（Conventional Animal,CV),饲养在屏障环境，除普通级动物应排除的病原体外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原体。,如鼠肝炎病毒、仙台病毒、体内、外寄生虫等。,清洁级动物,无特定病原体动物,（,Specific Pathogen-free Animal,SPF,）,饲养在屏障环境，无特定病原体的动物。,如绿脓杆菌等。,无菌动物,(Germfree Animal,GF),饲养在隔离环境，体内外无任何可检出的生命体,已知菌动物,动物体内外所携带的生命体是已知的,也可叫已知菌动物。,悉生动物,悉生动物是由无细菌动物植入已知细菌而得到的。,广义的悉生动物,包括：,无菌动物（,Germfree Animal,）,单菌动物（,Monognoxenic,Animal,）,双菌动物（,Dignoxenic,Animal,）,多菌动物（,Polygnoxenic,Animal,）,VAF,(virus antibodies free)plus,概念,各种实验动物具有的等级：,1,、小鼠和大鼠只有清洁级、,SPF,级和无菌级动物；,没有普通级动物,。,2,、豚鼠、地鼠和家兔则有普通级、清洁级、,SPF,级和无菌级四个等级动物。,3,、犬和猴只有,普通级和,SPF,级动物,；没有清洁级和无菌级动物,。,第二节,微生物和寄生虫,感染的危害性,一、,影响实验结果,：鼠肝炎,二、,影响动物生产,：动物死亡,三、,威胁人类健康,：人兽共患病,四、,污染实验材料,：微生物污染细胞培养物,五、,寄生虫对实验动物的影响,：,影响实验结果,第三节 实验动物常见感染性疾病,一、传染病的分类,（一）,人兽共患病原,狂犬病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、沙门氏菌、志贺氏菌、结核分枝杆菌、致病性皮肤真菌以及弓形体（虫）等。,（二）,主要对人致病性强的人兽共患病原,猴疱疹病毒（,B,病毒）、流行性出血热病毒。,（三）,动物烈性传染病病原,鼠痘病毒、兔出血症病毒、多杀性巴氏杆菌、鼠棒状杆菌、泰泽氏菌等。,（四）,主要对宿主以外动物致病性强的动物烈性传染病病原,松鼠猴疱疹病毒。,（五）一般传染病病原,小鼠肝炎病毒、仙台病毒、鼠支原体等。,（六）,污染生物制剂、细胞培养物的病原,鸡白血病病毒、猴病毒,40,。,二、重要的人兽共患病,（一）,流行性出血热,(,肾综合征出血热,),流行性出血热病毒（汉坦病毒）感染,1.,传染源,：携带流行性出血热病毒的黑线姬鼠、褐家鼠、实验大鼠。,2.,传播途径,：接触传染源及其排泄物、气溶胶传播。,3.,易感者,：人。动物感染无症状表现。,4.,症状表现,：高热、头痛、肌肉痛、结膜水肿、充血（点状），最后肾衰竭、尿毒症、死亡。,（二）淋巴细胞性脉络丛脑膜炎,淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒感染,1.,传染源,：携带淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒的小家鼠、金黄仓鼠。,2.,传播途径,：传染源经唾液、鼻分泌物和尿液传播，也可经子宫和乳汁传给后代。,3.,易感者,：人、小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、犬、猴、鸡、马、兔、棉鼠。,4.,症状表现,：大脑型：脑脊髓炎；内脏型：被毛粗乱、结膜炎、消瘦、腹水、昏睡、死亡；迟发型：被毛粗乱、行动异常、蛋白尿、发育不良、生长缓慢。,（三）狂犬病,狂犬病毒感染,1.,传染源,：携带狂犬病毒的犬、狐、山狗、郊狼、豺、狼、袋鼠、棉鼠。,2.,传播途径,：被传染源动物咬伤。,3.,易感者,：人，几乎所有温血动物。,最易感犬、狐、山狗、郊狼、豺、狼、袋鼠、棉鼠；次易感仓鼠、臭鼬、浣熊、猫、蝙蝠、猫鼬、豚鼠、兔、啮齿类动物。,4.,症状表现,：,前驱期或沉郁期,：举止异常、瞳孔散大、反射功能亢进、咬伤处发痒；,兴奋期或狂暴期,：病犬狂躁不安、攻击性强、自咬、奔走、流涎、声音嘶哑、下颌下垂；,麻痹期,：精神高度迟钝、四肢麻痹、中枢衰竭死亡。,（四）猴,B,病毒病,猴,B,病毒感染,1.,传染源,：,携带猴,B,病毒（疱疹病毒）的恒河猴。,2.,传播途径,：猴性交，人被猴咬伤。,3.,易感者,：人、恒河猴、帽猴、食蟹猴、台湾猴、日本猕猴、红面猴、家兔。,4.,症状表现,：,人,伤口疼痛、红肿、出现疱疹并有渗出物，出现脊髓炎或脑脊髓炎，最终麻痹、死亡。,猴,舌表面和口腔黏膜出现小疱疹，,7,14,天自愈，鼻腔常有黏液或脓性分泌物，常并发结膜炎和腹泻。,兔,最易感，表现感觉过敏、斜颈、呼吸困难、流涎、眼鼻分泌物增多、结膜炎和角膜浑浊、死亡。,（五）弓形虫病,弓形虫（体）感染,1.,传染源,：携带弓形虫（体）的猫。,2.,传播途径,：人和动物吞食侵袭性卵囊。,3.,易感者,；猫为终末宿主。人、小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、犬、猴为中间宿主。,4.,症状表现,：在人或动物的内脏器官进行无性生殖，形成包囊，随包囊位置引起相应症状，妇女子宫存在包囊容易导致流产。,（六）沙门氏菌病,沙门氏菌感染,1.,传染源,：携带,沙门氏菌的人和动物。,2.,传播途径,：消化道传播。人食用被,沙门氏菌污染的食物和饮水，动物吃了被沙门氏菌污染的动物饲料、饮水和垫料。,3.,易感者,：人、豚鼠、小鼠、大鼠、兔、猴、猪、犬。主要经消化道传播。,4.,症状表现,：腹泻和失水的相应症状，严重的休克、死亡。,（七）钩端螺旋体病,钩端螺旋体感染,1.,传染源,：携带,钩端螺旋体的,几乎所有的温血动物，鼠类是最重要的储存宿主。,2.,传播途径,：从传染源尿排出的,钩端螺旋体遍布水田、池塘、沼泽及淤泥，生存数月或更长。通过皮肤、黏膜或经食入消化道感染。,3.,易感者,：人，鼠类，几乎所有的温血动物。,4.,症状表现,：发热、黄疸、肌肉酸痛（人）、血红蛋白尿、出血、流产、皮肤和黏膜坏死及水肿。,（八）结核分枝杆菌病,结核分枝杆菌感染,1.,传染源,：携带结核分枝杆菌的人、猴，还有犬、豚鼠、兔、猫。,2.,传播途径,：人呼吸道（人型结核）、猴,消化道和呼吸道（人型和牛型结核）,3.,易感者,：人、猴、犬、豚鼠、兔、猫。,4.,症状表现,：咳嗽、咯血、消瘦、低热，后期呼吸困难、皮肤结核、淋巴结肿大。,（九）志贺菌病,志贺菌感染,1.,传染源,：携带,志贺菌的,人和猴。,2.,传播途径,：苍蝇和蟑螂传播，人和猴经口食入被,志贺菌污染的食物和饮水,。,3.,易感者,：人和猴。,4.,症状表现,：人和猴主要表现为细菌性痢疾和急性胃肠炎。,三、主要的动物烈性传染病,（一）,鼠痘,鼠痘（传染性脱脚病）病毒感染,1.,传染源,：携带鼠痘病毒的野小鼠、病小鼠和带毒小鼠。,2.,传播途径,：经呼吸道、消化道、皮肤伤口传播。,3.,易感者,：实验小鼠，主要是,DBA,、,CBA,、,BALB/C,、,A,、,C3H,等近交系小鼠。,4.,症状表现,：急性型：绝食、昏睡、被毛逆立、松乱、头颈肿胀、结膜炎、死亡；亚急性型：典型脱脚表现；慢性型：疾病后期转慢性，影响生长发育、繁殖。,（二）兔出血症,兔出血症病毒感染,1.,传染源,：携带,兔出血症（兔瘟）病毒的家兔。,2.,传播途径,：直接接触，通过接触病兔排泄物、分泌物污染的饲料、饮水和物品传染。,3.,易感者,：家兔。,4.,症状表现,：超急性型；突然兴奋、挣扎、抽搐、惨叫，死亡。慢性型：多见,3,月龄兔，精神欠佳、食欲减退、喜饮水、被毛无光、消瘦、体温升高。,四、常见的微生物和寄生虫感染,（一）仙台病毒感染,1.,传染源,：携带仙台病毒的小鼠和大鼠。,2.,传播途径,：直接接触和空气传播。,3.,易感者,：未感染过仙台病毒的小鼠，新生乳鼠、未成年小鼠。大鼠、仓鼠、豚鼠。,4.,症状表现,：类似感冒症状，打“呼噜”、被毛粗乱、发育迟钝、体重下降、易诱发支原体感染。,（二）小鼠肝炎,小鼠肝炎病毒感染,1.,传染源,：携带小鼠肝炎病毒的小鼠。,2.,传播途径,：经口和呼吸道传播。,3.,易感者,：小鼠。,4.,症状表现,：,急性型：乳鼠精神沉郁、食欲废绝、,被毛粗乱、腹泻、消瘦、脱水，甚至死亡,；神经型：两后肢松弛性麻痹，结膜炎，全身抽搐，转圈运动，,2,4,天内死亡。,（三）支原体病,支原体感染,1.,传染源,：携带支原体的大鼠和小鼠。,2.,传播途径,：病鼠呼吸道分泌物污染饲料、饮水、垫料、用具和环境。经直接接触和空气传播。,3.,易感者,：大鼠、小鼠。,4.,症状表现,：肺炎支原体致大鼠、小鼠肺炎及雌性生殖器炎症。,（四）巴氏杆菌病,巴,斯德,杆菌感染,1.,传染源,：携带多杀性巴斯德杆菌或嗜肺巴斯德杆菌的兔或啮齿类动物。,2.,传播途径,：传染源的排泄物、分泌物污染饲料、饮水、用具和环境，经消化道传播。或飞沫经空气传播。,3.,易感者,：兔或啮齿类动物等。,4.,症状表现,：家兔感染多杀巴斯德杆菌后鼻腔充满黏液、被毛逆乱、食欲差、呼吸困难、头偏向一侧、结膜充血、流泪、眼睑肿胀；：嗜肺巴斯德杆菌为隐性感染，可引起呼吸道以外器官化脓性病变。,（五）呼肠弧病毒,型病毒,呼肠弧病毒,型病毒感染,1.,传染源,：携带病毒的小鼠、豚鼠、仓鼠等。,2.,易感者,：主要有小鼠、豚鼠、仓鼠。还有猴、牛、犬、鸡等。,3.,症状表现,：成年鼠呈阴性感染，幼鼠感染后呈脂肪性下痢。,（六）球虫病,艾美尔球虫感染,1.,传染源,：携带艾美尔球虫的家兔。,2.,传播途径,：家兔食入带有侵袭性卵囊的饲料和饮水。,3.,易感者,：家兔。,4.,症状表现,：肠球虫病：精神沉郁、行动迟缓、食欲减退、腹泻与便秘交替，常因消瘦和衰竭死亡；肝球虫病：黏膜黄染、腹部膨大。后期出现四肢痉挛或麻痹，死亡。,（七）犬瘟热,犬瘟热病毒感染,1.,传染源,：携带病原的犬。,2.,传播途径,：接触传播、空气传播。,3.,易感者,：主要是犬（特别幼犬），及狼、丛林狼、豺、狐、貂、雪貂、白鼬、臭鼬、伶鼬、南美鼬鼠、黄鼠狼、獾、水獭、浣熊、密熊、白鼻熊、小熊猫。,4.,症状表现,：高热,2-3,天死亡。急性鼻卡他，支气管炎、卡他性肺炎、胃肠炎、神经症状。,（八）传染性犬肝炎,犬腺病毒,型,感染,1.,传染源,：携带病原的病犬和康复犬排出尿液携带病毒。,2.,传播途径,：经直接接触病犬或接触被病原污染的用具传播。,3.,易感者,：犬、狐狸、山狗、狼、浣熊、黑熊。,4.,症状表现,：最急性型：潜伏期,6,9,天，在呕吐、腹痛和腹泻后数小时死亡；急性型：怕冷、高热、精神抑郁、食欲废绝、喜饮水、呕吐、腹泻、粪中带血；亚急性性：角膜水肿,“,蓝眼”病（特征）、咽炎、喉炎、头颈部水肿。,（九）犬细小病毒病,犬细小病毒感染,1.,传染源,：携带病原的病犬。,2.,传播途径,：直接接触病犬或间接接触病犬污染的饲料、饮水和用具。,3.,易感者,：主要有犬。还有郊狼、丛林犬、食蟹狐、鬣狗。,4.,症状表现,：急性出血性肠炎和非化脓性心肌炎。,肠炎病犬初期精神沉郁，厌食，偶见发热，软便或轻微呕吐，随后发展成为频繁呕吐和剧烈腹泻。起初粪便呈灰色，黄色或乳白色，带果冻状粘液，其后排出恶臭的酱油样或番茄汁样血便。,病犬迅速脱水，消瘦，眼窝深陷，被毛凌乱，皮肤无弹性，耳鼻，四肢发凉，精神高度沉郁，休克，死亡。从病初症状轻微到严重一般不超过,2,天，整个病程一般不超过一周。,心肌炎型多见于,4-6,周龄幼犬，常无先兆性症状，或仅表现轻微腹泻，继而突然衰弱，呻吟，粘膜发绀，呼吸极度困难，脉搏快而弱，心脏听诊出现杂音，常在数小时内死亡,。,第四节,实验动物的,微生物和寄生虫控制,国家标准,按照国家实验动物标准要求：,1,、清洁级小鼠应排除,10,种细菌和,5,种病毒。,2,、,SPF,级小鼠应排除,16,种细菌和,11,种病毒。,3,、清洁级大鼠应排除,10,种细菌和,2,种病毒。,4,、,SPF,级大鼠应排除,16,种细菌和,7,种病毒。,5,、清洁级兔应排除,7,种细菌和,1,种病毒。,6,、,SPF,级兔应排除,13,种细菌和,3,种病毒。,7,、清洁级豚鼠应排除,9,种细菌和,2,种病毒。,8,、,SPF,级豚鼠应排除,15,种细菌和,4,种病毒。,请学员按照上述举例，完成表格中动物应排除的微生物的统计分类。,第五节 实验动物的卫生防疫,与隔离措施,一、实验动物的防疫原则,（一）隔离饲养：各种动物要分开饲养。,（二）引进动物严格检疫。,（三）坚持卫生制度。,（四）从业人员每年体检一次。,（五）保种单位要定期对动物进行质量检查。,（六）定期对大动物进行免疫接种。,（七）隔离和无害化处理：严防野生动物进入实验室，死亡动物实施无害化处理。,二、平时的预防措施,严格执行饲养管理、卫生防疫制度及操作规程。做好各项记录。,三、发生疫情时的扑灭措施,及时发现、诊断和上报疫情（鼠痘、流行性出血热等），并通知邻近单位做好预防工作。,四、消毒措施,（一）预防性消毒：定期消毒动物房、笼架具、饮水。,（二）随时消毒：发生传染病时，随时和定期消毒动物房、隔离场所，患病动物的分泌物、排泄物及被其污染的场所和笼器具。,（三）终末消毒,物理和化学消毒法,1,、物理消毒法：高压蒸汽、高热煮沸、干烤消毒、火焰消毒、,X,射线或,r,射线、过滤消毒。,2,、化学消毒法：,（,1,）液体消毒剂：石碳酸、过氧乙酸、来苏水、次氯酸。,（,2,）蒸汽消毒：福尔马林、三聚甲醛。,五、隔离措施,隔离患病和可疑感染动物。,第六节实验动物的微生物学、寄生虫学质量监测,一、检测要求：,1,、检测实验动物外观健康无异常；,2,、按国标对实验动物进行微生物学和寄生虫学检测。,二、检测程序：,1,、寄生虫检测：,取被毛、血液、皮肤检测体外寄生虫，取内脏、肠内容物和粪便检测体内寄生虫。,2,、微生物检测：,取皮肤检测真菌，取血清检测病毒或其它病原的抗体，取脏器、肠内容物和气管分泌物分离细菌。,三、检测方法：,参照相关实验动物国标进行。,四、检测规则：,1,、检测频率（动物生产单位自检）,普通级动物、清洁动物、,SPF,动物每,3,个月至少检测,1,次，无菌动物每年检测,1,次。每,2-4,周检查,1,次动物的生活环境标本和粪便标本。,2,、动物检测的采样数量：,小于,100,只的群体，取样不少于,5,只；,100-500,只的群体，取样不少于,10,只；,大于,500,只的群体，取样不少于,20,只。,一般应选择成年动物。,3,、判定标准：,如有,1,只动物的,1,项指标不合格，即判定该群动物不符合该等级标准。,实验动物环境设施控制,一、实验动物设施概念,实验动物繁育、生产设施,(Production Animal Facility),指用于实验动物繁育、生产的建筑物、设备以及运营管理在内的总和。,2.,动物实验设施,(Animal experimental Facility),指以研究、试验、教学、生物制品、药品生产等为目的进行实验动物饲育、试验的建筑物、设备以及运营管理在内的总和。,3.,特殊动物实验设施,包括感染动物实验设施和应用放射性物质或其他特殊化学物质等进行动物实验的设施。,二,实验动物环境设施分类,按照“实验动物环境与设施”,GB14925-2001,规定，实验动物环境设施分为三级，控制程度从低到高，依次为,普通环境,(,open condition),、,屏障环境,(barrier condition),和隔离环境,(Isolation condition),。,1.,普通环境,(open condition),：,该环境设施符合动物居住的基本要求，不能完全控制传染因子，适用于饲养教学等用途的普通级实验动物,(conventional animal),。,2.,屏障环境,(barrier condition,),该环境设施适用于饲育清洁实验动物,(Clean animal),及无特定病原体实验动物（,SPF specific pathogen free animal,），,该环境严格控制人员、物品和环境空气的进出,。,屏障区内物品准备间,屏障区内饲育员更换笼具,屏障区内饲育员更换动物饮用水,屏障区内育成动物观察,1,屏障区内育成动物观察,2,屏障区内育成动物观察,3,工作人员每日工作完毕清洁工作,(,亚清洁走廊,),屏障区内日常维持消毒,1,屏障环境设施图一,屏障环境设施图二,屏障环境设施图三,屏障区动物实验室,的管理规范,动物实验申请资料：,1,动物实验申请表,一份。,北京市实验动物从业人员上岗证,。,动物实验人员须知,到过其他饲养场的人员,两周内不得再到一层饲养区工作。,实验动物不得带出实验室，动物一旦离开，本实验室不再接收。,禁止在洁净区内解开工作服暴露身体，严禁在操作中用手摸口、鼻、眼睛和头发的习惯，手更不得接触暴露部位。,实验完毕后应自觉清理实验台及地面，并对实验区域进行消毒。,动物实验人员须知,实验人员在实验过程中不能乱串房间，不能随意调换动物的饲养位置。,本动物实验室禁止携带书本进入，如需实验数据，仅允许单张记录纸经紫外照射传入实验室内。严禁自带笔支，本实验室已配备了各类常用笔以供使用。,当实验人员因为某种原因无法亲自进入动物实验室实验或需要动物实验室人员辅助实验时，需填写,委托动物实验记录登记表,进行委托实验申请,动物实验人员须知,当发生动物逃逸时，应尽早捉住，单独放置，同时查明逃逸原因，判断所属笼盒并与实验人员确认，若核实未有结果，则将动物处死，按医疗废弃物处理。对其所经过的地方做彻底消毒。,发生安全事故后，应主动向负责人员汇报，填写登记表。,动物实验人员须知,当实验操作时被刺伤和切伤或动物抓伤咬伤时，应及时出屏障区摘掉手套，挤出伤口出血液，在流动水下冲洗伤口，如小伤口用,75%,酒精、,2%,碘酒处理；伤口如血流不止、应用无菌纱布止血、并到医院作进一步处理。,当发生停电情况时应采用备用电源并通知相关人员。使用备用电源期间，设施外人员不得进入，设施内人员不得开启任何屋门并站立不动等待处理。如果停电超过备用电源的控制时间，须与供电局联系。,动物实验人员须知,实验人员违反本实验室管理细则、操作规程者，视其情节轻重给予暂停或取消在实验室进行实验的处罚，造成的损失由课题组长（责任人）负责。,据,北京市实验动物管理条理,的规定：禁止在非实验动物设施使用清洁级大小鼠进行科学研究。本人已知此规定，并对所造成的一切后果负责。,当出现违规事故后，应主动到登记处填写事故通报单。否则加倍处罚。,处罚分类：口头警告、警告批评、严重警告、记过处分、记大过处分、吊扣操作合格证，并全公司通报。,人员进出程序（门斗）,进门后需先在门口的“药水脚垫”上停留片刻。以达到消毒杀菌的目的。,在门斗更衣柜处脱去大衣，将贵重物品存放于更衣柜内。,在门斗鞋柜处更换洁净拖鞋。,注意：屏障系统内严禁携带手机、首饰等物品进入。如发现将视为严重违纪行为。,人员进出程序（登记处）,向工作人员出示,北京市实验动物从业人员上岗证,。,在登记处填写,动物实验室进出登记,表。如实填写进出时间及操作内容。,填写,N95,口罩使用记录表,，领取口罩。,领取门禁卡。,注意：实验人员第一次进入屏障系统必须在动物中心工作人员的带领、监督下进行，并且严格执行,实验人员隔离制度,。,人员进出程序（过渡走廊）,进入人员应在过渡走廊处进行手部消毒。,如有涂抹香水应尽量洗去。洗后仍有香气者禁止入内,.,长发者应在此处把头发盘起。,留长指甲者应在此处把指甲剪短。,进入屏障之前将所带物品、药品进行有效消毒。,注意：进入屏障系统不得散发、留指甲、喷香水等。嗜酒、吸烟者也不得进入。违反者将视为严重违纪。,人员进入正压屏障系统程序（一更）,在一更处脱去所穿拖鞋。,刷卡进入二更。,人员进入正压屏障系统程序（二更）,穿上二更专用拖鞋。,戴乳胶手套。,戴口罩。,穿隔离服,从衣架底部抽取隔离服,小心打开牛皮纸 避免撕破,穿隔离服,自检：,口鼻、头发（尤其头发帘）不得暴露。,袖口需塞进手套内。,衣链、帽绳需系牢。,注意：如果以上任意一条未做到便进入屏障系统者视为严重违纪。,人员出正压屏障系统程序,在一更脱去衣物,用一只手套包裹着另一只手套脱掉。脱下的手套扔到指定的垃圾桶中。,脱下的隔离服与牛皮纸一同放入一更的不锈钢桶中。,最后摘下口罩。,物品进入屏障系统,高压消毒,(,推荐方法,),物品经过,121,度，,20,分钟高压灭菌后传入。,从缓冲间传出。,适用物品：耐高温、耐高压物品。如动物笼具，手术器械等金属物品。,物品进入屏障系统,紫外照射消毒,物品从传递仓进入，紫外照射,20,分钟。,紫外照射前需要用消毒液擦拭物体表面。,物品从缓冲间传出。,适用物品：表面无或少许褶皱隆起并且能直接使用的物品。如瓶装药品、注射器、手术器械、,物品进入屏障系统,渡槽消毒,物品从渡槽传入。在渡槽中浸泡,30,分钟。,物品从缓冲间传出。,适用物品：不怕湿、耐腐蚀物品。如,SPF,包装饲料，手术器械，桶、盆等塑料制品。,物品进入屏障系统,防紫外消毒,适用物品：怕紫外照射的物品（如,DNA,等生物制剂）,将物品用酒精擦拭后用高压灭菌的锡箔纸包裹。经传递仓紫外照射,20,分钟后传入。,从缓冲间传出。,物品进入屏障系统,冰紫外消毒,适用物品：不耐高温、怕紫外照射物品（如病毒、细胞等生物制剂）,将物品用酒精擦拭后用高压灭菌的锡箔纸包裹。放入盛有冰的消毒药水中。经传递仓紫外照射,20,分钟后传入。,(,冰自带,),从缓冲间传出。,物品进入屏障系统,适用物品：相机、摄像机等拍摄物品。,用无菌透明塑料袋密封包裹，经过传递仓,20,分钟紫外照射后方进入，但使用时不得摘去、弄破塑料袋。,从缓冲间传出。,注意,:,可以将镜头的头露在外边,但周围需要严格密封。,物品进入屏障系统,适用物品：显微镜、离心机等精密实验仪器。,物品经过还氧乙烷或钴,60,处理，密封包装经过传递仓或渡槽传入。,从缓冲间传出。,本项设备使用需与外单位联系。因此需要提前预约。,注意：如物品没有按规定进入，将视为严重违纪,动物进入屏障系统,屏障区动物实验室仅接受清洁级以上（含）级别的啮齿类实验动物。,必要时需在检疫隔离室进行检疫隔离,检测合格后动物方可传入屏障系统。,不需要检测的动物，用新洁尔灭或酒精擦拭符合级别要求的包装箱，经传递仓紫外照射,30,分钟后传入。,动物进入屏障区操作,全方面消毒运输包装盒 紫外照射,30,分钟,屏障内取出包装盒,3.,隔离环境,(Isolation condition),该环境设施采用无菌隔离装置以保存无菌或无外来污染动物。隔离装置内的空气、饲料、水、垫料和设备均为无菌，动物和物料的动态传递须经特殊的传递系统，该系统既能保证与环境的绝对隔离，又能满足转运动物时保持内环境一致。,该环境设施适用于饲育无特定病原体（,SPF,）、悉生,（,Gnotobiotic,animal,）,及无菌实验动物,(germ free,animal),。,无菌动物,(Germfree Animal,GF),无菌动物包括已知菌动物,饲养在隔离环境内，体内外无任何可检出的生命体,手术隔离器（,operating Isolator),三 实验动物饲养常用的 辅助设施,(assisted facility,),这是指在动物房舍设施内使用于动物饲养的器具和材料，主要包括笼具、笼架、饮水装置、运输笼和垫料等。这些器具和物品与动物直接接触，产生的影响最直接，务必予以重视。,1.,饮水设备和灭菌设备,普通实验动物饮水应符合,GB 5749,的要求,。,屏障和隔离环境内饲养的实验动物饮用水须经灭菌处理。,大型的实验动物设施，往往装设无菌水生产设备，用过滤系统和紫外线照射，来清除细菌、真菌和病毒,。实验动物的饮水一般无需作蒸溜、离子交换或反渗透等处理，有助于动物对微量元素的利用。,2.,笼具,(cage),和笼架,(rack),笼具要求能对动物,提供足够的活动空间，通风和采光良好,;,坚固耐用，里面的动物不会逃逸，外面的动物不会闯进,;,操作方便，适合于消毒、清洗和储运,;,成本低廉，经济实用。,现在国内已有多家厂商，生产各种式样和质量档次的笼具。,笼架是承托笼具的支架，使笼具的放置合理，有些还设有动物粪便自动冲洗和自动饮水器。要注意笼具和笼架的匹配，方便移动和清洗消毒。,3.,动物运输,(transport of animal),动物运输应符合安全和微生物控制等级要求，不同品种、品系和等级的动物不得混合装运。,动物运输应配置专用车辆，专人负责，定期消毒、保洁，车辆应装有空调设备。,运输笼具,(carrying cage),须经消毒、灭菌后方可回收使用。,运输笼具,(carrying cage),高等级,啮齿类,实验动物,运输笼,4.,垫料（,bedding),垫料应选用吸湿性好、尘埃少、无 异味、无毒性、无油脂的材料。,垫料须经消毒、灭菌后方可使用。,第二节环境因素对实验动物的影响,实验动物,外环境。是指实验动物设施或动物实验设施以外的周边环境。如气候或其他自然因素、邻近的民居或厂矿单位、交通和水电资源等。,实验动物,内环境。指实验动物设施或动物实验设施内部的环境。内环境又细分为大环境和小环境。前者是指实验动物的饲养间或实验间的整体环境状况,;,后者是指在动物笼具内，包围着每个动物个体的环境状况，如，温度,、,湿度，气流速度，氨及其他气体的浓度，光照，噪音等等。,一 实验动物设施选址,1.,实验动物繁育、生产及实验场所应避开自然疫源地。,2.,宜选在环境空气质量及自然环境条件较好的区域。,3.,宜远离铁路、码头、飞机场、交通要道以及散发大量粉尘和有害气体的工厂、贮仓、堆场等有严重空气污染、振动或噪声干扰的区域。,4.,实验动物繁育、生产、实验设施应与生活区保持大于,50m,的距离。,二,实验动物环境设施建筑要求,1.,建筑物门、窗应有良好的密封性。,2.,走廊宽度不应少于,1.5m,，,门宽度不少于,1.0m,。,3.,动物繁育、生产及实验室通风空调系统保持正压操作，应合理组织气流布置送排风口的位置，避免死角，避免断流，避免短路。,4.,各类环境控制设备应定期维修保养。,5.,动物繁育、生产、实验室的电力负荷等级，应根据工艺要求确定。,应备有应急电源。,6.,室内的配电设备，应选择不易积尘的设备，并应暗装。电气管线应暗敷，由非洁净区进入洁净</p>