中药材掺假染色检测方法的研究.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,色彩与人类生活息息相关,“红心鸭蛋”事件,中药材掺假染色,中药材掺假染色的主要方式和品种,增重掺假染色 红花 冬虫夏草、青黛等,劣质药材染色 五味子 蒲黄 延胡索 等,造假染色 西红花 血竭 朱砂 等,着色物的种类,食用色素（水溶性色素）食品添加剂,合成染料 可溶于使用介质 纺织品着色 被纤维吸附、固着,有机颜料 不溶于使用介质 非纺织品着色 靠树脂、胶黏剂等于着色物结合,无机或矿物颜料,着色物（合成）的基本化学结构,偶氮类,蒽醌类,三芳基甲烷类,苋菜红,赤藓红,亮蓝,禁用染料,含有偶氮结构的染料在经过裂解后有可能产生以下24种致癌芳香胺的染料是被欧盟和许多国家禁止使用的。,24种致癌芳香胺是：,（1）4-氨基联苯（2）联苯胺（3）4-氯-2-甲基苯胺,（4）2-萘胺（5）4-氨基-3,2-二甲基偶氮苯,（6）2-氨基-4-硝基甲苯（7）2,4-二氢基苯甲醚（8）4-氯苯胺,（9）4,4-二氨基二苯甲烷（10）3,3-二氯联苯氨,（11）3,3-二甲氧基联苯胺（12）3,3-二甲基联苯胺,（13）3,3-二甲基-4,4-二氨基二苯甲烷,（14）2-甲氧基-5-甲基苯胺,（15）4,4-亚甲基-二（2-氯苯胺）（16）4,4-二氨基二苯醚,（17）4,4-二氨基二苯硫醚（18）2-甲基苯胺,（19）2,4-二氢基甲苯（20）2,4,5-三甲基苯胺,（21）2-甲氧基苯胺（22）4-氨基偶氮苯,（23）2,4-二甲基苯胺（24）2,6-二甲基苯胺,食用色素,天然食用色素：焦糖色素、红曲红、高梁红、栀子黄、萝卜红、叶绿素铜钠盐、胡萝卜素、可可壳色、姜黄等,我国食品添加剂使用卫生标准（GB27601996）列入的合成色素有胭脂红、苋菜红、日落黄、赤藓红、柠檬黄、新红、靛蓝、亮蓝、二氧化钛（白色素）等等。,合成食用色素,合成色素具毒性(包括毒性、致泻性和致癌性)。这些毒性源于合成色素中的砷、铅、铜、苯酚、苯胺、乙醚、氯化物和硫酸盐，它们对人体均可造成不同程度的危害。,我国食品添加剂使用卫生标准，其中规定使用合成色素的种类，并定出了最大使用量。,合成色素的纯色素含量不得低于8599；砷1ppm;铅10ppm;铜20ppm;苯酚5ppm，苯胺4ppm;各种氯化物不应超过0.5等，这些规定是为了限制色素中的杂质，以减少对人体的毒害。,合成染料,偶氮染料,苏丹红IV,酸性橙II,三芳基甲烷类,金胺O,孔雀石绿,颜料,普通有机颜料 偶氮类颜料 酞箐颜料,无机颜料 二氧化钛 铅铬绿 等等,着色物的危害,偶氮染料,致癌性,过敏性,蒽醌类染料,癌诱变性,皮肤过敏性,三芳基甲烷类染料,致癌,对眼睛的刺激,对水生生物的毒性,中药材掺假染色检测方法研究的内容,（1）关注药材质量，及时发现问题；,（2）确定掺伪物、染色物的种类；明确化学组成；,（3）建立检测用对照物质；,（4）建立检测方法，进行必要的方法验证；,（5）按规定程序申报补充检验方法，作为法定检验的依据。,中药材掺假染色检测的技术方法,经验鉴别、理化鉴别快速筛查,薄层色谱法定性鉴别、常规检测,高效液相色谱法定性鉴别、常规检测,液-质联用法结构鉴定、方法验证,中药材掺假染色检测方法研究实例,单一色素或染料染色,7 34 39 40 42 A B C D E F G H I J K L,对照,红花染色物,金橙II,的检测,硅胶G薄层板,展开剂：氯仿-甲醇-冰乙酸(7：1：2),金橙II的HPLC检测,色谱柱：Diamonsil C18,流动相：乙腈0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调pH值为3.0）(40：60),检测波长：484nm,UV,ES-,ES+,UV,ES-,ES+,金橙II,红花药材,蒲黄掺伪染色的检验,蒲黄掺伪染色的检验,蒲黄掺伪染色的检验,8 20 30 32 34 A B C D E F G 对照,金胺O的薄层色谱检测,硅胶G薄层板,展开剂：二氯甲烷乙酸乙酯甲醇氨水（4：5：1：1）的下层溶液,上：金胺O对照试剂；中34#样品（阳性样品）；下：样品E（阴性样品,）,金胺O的HPLC检测,色谱柱：Diamonsil C18,流动相：乙腈0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调pH值3.0）（35：65）,检测波长:432nm,金胺O对照试剂相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱,蒲黄药材阳性样品相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱,金胺O对照试剂,蒲黄药材中相应色谱峰,中药材掺假染色检测方法研究实例,不同来源样品，多种色素或染料染色,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15,硅胶G薄层板,展开剂：乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水(1：3：3：1：1),五味子染色物的HPLC色谱图,柱：Diamonsil C18，4.6 x 250mm,流动相：以甲醇-0.05mol/L醋酸铵梯度洗脱；检测波长为508nm,复合色素染色,乌梅染色物：,苋菜红,亮蓝,日落黄,硅胶GF254板，,展开剂：乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水（1：3：3：1：1）可见光检视,乌梅染色物HPLC检测,Waters C18，5m，250 x 4.6mm；,甲醇-0.02mol/L乙酸铵（冰乙酸调pH4.0），梯度洗脱,500nm检测苋菜红和日落黄，630nm检测亮蓝。,染色物、掺伪物同时检测,血竭,伪品血竭样品,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9,显色前，可见光检视,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9,显色前，紫外光灯（,254nm,）检视,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9,显色后，可见光检视,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9,显色后，紫外光灯（,365nm,）检视,TLC检查伪品血竭中松香酸、808猩红和苏丹红,血竭伪品药材HPLC分析检测,Agilent C18(4.6 X 250mm)；,流动相：乙腈水（955）,阳性样品中相应色素成分峰的DAD吸收光谱,检出成分的确证,样品#,色谱峰保留时间,吸收峰1,吸收峰2,检出大红粉的样品,1,8.15,497,519,6,8.05,496,519,大红粉对照,8.03,496,517,检出苏丹红IV的样品,2,19.17,350,518,3,19.18,350,518,4,19.18,350,518,5,19.20,350,518,苏丹红对照,19.13,350,518,血竭伪品（大红粉）HPLC/MS/MS图,2-羟基-3-苯胺羰基-1-偶氮苯基-萘,m,/,z,368.1394,808 猩红(808 Scarlet),苏丹红IV峰的二级质谱,伪品血竭中松香酸的HPLC/MS/MS图,松香酸,伪品血竭检测情况,样品,编号,样品提供或购买地点,TLC,HPLC,808,猩,红,苏,丹,红,松,香,酸,808,猩,红,苏,丹,红,松,香,酸,1,安徽亳州中药材市场,+,-,+,+,-,+,2,安徽亳州中药材市场,-,+,-,-,+,-,3,安徽亳州中药材市场,-,+,+,-,+,+,4,重庆解放碑中药材市场,-,+,+,-,+,+,5,成都荷花池中药材市场,-,+,+,-,+,+,6,澳门药店,+,-,+,+,-,+,已批复的中药材染色补充检验项目和检验方法,品种,批准件编号,检测指标和方法,蒲黄,2007007,金胺O薄层色谱和HPLC检查,黄芩片（饮片）,2007008,金胺O薄层色谱和HPLC检查,红花,2007009,金橙II薄层色谱和HPLC检查,五味子,2007014,胭脂红、赤藓红和酸性红73薄层色谱和HPLC检查,朱砂,2008003,808猩红薄层色谱和HPLC检查,血竭,2008004,808猩红、苏丹红IV和松香酸薄层色谱和HPLC检查,乌梅(炙乌梅),2009001,苋菜红、亮蓝、日落黄薄层色谱和HPLC检查,其它已批复的有关中药材掺伪等的检测方法,沉香,穿山甲 胆南星 海金沙 细辛 桔梗,关于中药材补充检验方法研究和建立原则的几点思考,根据中药材的质量问题，结合监管需要；,建立针对性检测指标；,检测方法适用性强：快速、简便、准确；,研究样品有代表性，覆盖面广；,格式完整规范,方法验证的内容,专属性 正常药材样品的比较 HPLC/MS验证,检测限,检测成分的结构确证 对照物对照 质谱等光谱数据比较等,阳性样品的HPLC/MS验证,补充检验方法格式,项目 检查 检测成分,方法描述 供试品溶液制备 对照品溶液制备 分析检测条件,结果判断 “应不得检出.”,“若检出.,按方法试验”,乌梅（炙乌梅）,Wumei,FRUCTUS MUME,检查（1）取,本品2粒，加70%乙醇20ml，超声提取20分钟，溶液颜色不得显墨绿色。若溶液呈墨绿色，则采用下列方法检查。,（2）,苋菜红、亮蓝、日落黄,薄层色谱法,取本品2粒，加70%乙醇20ml，超声提取20分钟，取上清液离心，作为供试品溶液。另取苋菜红、亮蓝、日落黄溶液（国家标准物质，标示浓度0.5mg/ml，国家标准物质研究中心）各1ml，分别加70%乙醇稀释至5ml，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）试验，吸取供试品溶液5l，对照品溶液各2l，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水（1：3：3：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置应不得检出相同颜色的斑点。若检出相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法进一步检查。,（3）高效液相色谱法,照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）测定。,色谱条件与系统适用性,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B为0.02mol/L醋酸铵（冰乙酸调pH4.0），梯度洗脱程序为：0-45分钟，流动相A 20%50%；流动相B，80%50%。检测波长500nm（检测苋菜红和日落黄）和630nm（检测亮蓝）。理论板数按苋菜红峰计算应不低于4000。,测定法,分别吸取检查（1）项下供试品溶液5l和检查（2）项下对照品溶液各2l，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。,结果判断,供试品色谱中，应不得检出与对照色谱保留时间相同的色谱峰。,其它,正文附图问题,申报程序 省级药品检验所试验复核,省局上报国家局,中检所技术审核,国家局批复,谢谢各位！,