NY∕T 402-2016 脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测技术规程(农业).pdf
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1、ICS 65.020 B 15 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/ T 402一2016代替NY/T402-2000 脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测技术规程Code of practice for virus detection of virus-free sweet potato seed roots or plant 2016一-01发布2017-04-01实施中华人民共和国农业部发布NY/T 402-2016 目U吕本标准按照GB/T1. 1一2009给出的规则起草。本标准代替NY/T4022000(脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测技术规程。与NY/T 4022000相比,除编辑性修改外,主要
2、技术变化如下:增加了检测甘薯病毒种类(见1、4);一一增加了规范性引用文件(见以一一对脱毒组培茵的定义进行了修改(见3.1, 2000年版的2.1);一一删除了术语和定义中病毒病株允许率,增加了带毒率(见3.6)和病毒病显症率(见3.7); 一一增加了病毒PCR检测方法(见6.3和附录C)和RT-PCR检测方法(见6.4和附录0); 一一根据生产实际重新确定了原种和生产用种的质量标准(见7.3和7.4)。本标准由农业部种子管理局提出并归口。本标准起草单位:江苏徐州甘薯研究中心、河南省农业科学院植物保护研究所。本标准主要起草人:谢逸萍、张振臣、孙厚俊、乔奇、张成玲、秦艳红、赵永强、张德胜、徐振、
3、王爽、杨冬静。本标准的历次版本发布情况为:一一-NY/T4022000。I NY/ T 402-2016 脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测技术规程1 范围本标准规定了脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测技术的术语定义、检测对象、抽样、检测方法和脱毒种薯(苗)的质量标准。本标准适用于脱毒甘薯种2. 1 毒(2.2 2. 4 原种用原原种在2. 5 生产用种certi 用原种在隔离条件下2. 6 带毒率virus-carrying rate 各级别甘薯种薯(苗)受病毒侵染薯块(植株)的比率。2. 7 病毒病显症率virus-syrnptorn rate 各级别甘薯种薯(苗)出现病毒病症状薯块(植株)的比率。3 检
4、测对象3. 1 甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)。3. 2 甘薯潜隐病毒(SPLV)。otato feathery mottle vir, 病毒(Sweetotato virus G, V)、甘薯G病oviruses) 1 NY/ T 402-2016 3. 3 甘薯G病毒(SPVG)。3. 4 甘薯褪绿斑病毒(SPCFV)。3.5 甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)。3. 6 甘薯双生病毒(Sweepoviruses)。4 抽样4. 1 组培苗抽样4. 1. 1 脱毒组培苗每个茎尖分生组织培养系应检测。4. 2 田间抽样4.2.1 原原种田和原种回抽样定植后30d、60 d、收获前2周,采用五点取
5、样法。面积运o.1 hm2,抽取数量为200株;0.1hm2面积1hm2,抽取数量为500株;超出1hm2面积,按0.1hm210000 抽样百分率,%610 抽样最低数量,株100 4.2.2.2 没有经过田间检测的种薯(苗)应进行块根或种苗检测。抽样数量标准见表2。将第一次抽取的样品混合后,进行二次抽样,随机抽取10%的混合样品检测。表2抽样数量标准表种类种薯(苗)总量抽样百分率,%抽样最低数量薯苗10 000株610 100株10000株35 种薯10 000 kg 610 100 kg 10000 kg 35 注:不足抽样最低数量的全部作为混合样品。5 检测方法5.1 硝酸纤维素膜酶联
6、免疫吸附测定(NCM-ELISA)检测法用于检测SPFMV、SPLV、SPVG、SPCFV和SPCSV共5种病毒,检测方法见附录A。5. 2 指示植物检测法用于辅助检测SPFMV、SPLV、SPVG、SPCFV、SPCSV和Sweepovires共6种(类)病毒,检测方法见附录B。5. 3 聚合酶链式反应(PCR)检测法用于检测Sweepoviruses。检测方法见附录c5. 4 反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测法用于检测SPCSVo检测方法见附录D。2 NY/T 402-2016 6 脱毒种薯(苗)的检测程序及质量标准6. 1 脱毒组培苗用NCM-ELISA、PCR、RT-PCR和指
7、示植物法进行检测,检测结果均应为阴性,即带毒率为0。6. 2 原原种用NCM-ELISA或指示植物法进行检测,其中10%以上(含)样品分别利用PCR和RT-PCR方法检测。带毒率为006. 3 原种用NCM-ELISA或指示植物进行检测,其中5%以上(含)的样品分别利用PCR和RT-PCR方法检测。SPFMV、SPLV、SPVG和SPCFV的带毒率2.0 % ,SPCSV和Sweepoviruses的带毒率为0,病毒病显症率1.0%。6. 4 生产用种用NCM-ELISA或指示植物进行检测,其中1%以上(含)的样品分别利用PCR和RT-PCR方法检测。SPFMV,SPLV、SPVG和SPCFV
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