DB36∕T 1036-2018 芝麻细菌性青枯病诊断及检测技术规程.pdf
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1、 ICS 65.020.20 B 15 DB36 江西省地方标准 DB36/T 1036-2018 芝麻细菌性青枯病诊断及检测技术规程 Techniquely Rules for Diagnosis and Detection of Sesame Bacterial WiltRalstonia solanacearum Smith 2018 - 07 - 03 发布 2019 - 01 - 04 实施 江西省质量技术监督局 发 布 DB36/T 1036-2018 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 术语和定义 . 1 3 症状诊断 . 1 4 病原菌形态学鉴定与致病性测定 .
2、1 5 病原菌 PCR 检测 . 2 附录 A(资料性附录) 培养基配制方法 . 3 附录 B(资料性附录) PCR 检测引物、反应体系条件 . 4 DB36/T 1036-2018 II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由江西省农业厅提出并归口。 本标准起草单位:江西省农业科学院植物保护研究所、江西生物科技职业学院。 本标准主要起草人:华菊玲、李信申、黄小梅、刘清兰、熊艳、黄瑞荣、王希、史建苗、盛琦、饶喜。 DB36/T 1036-2018 1 芝麻细菌性青枯病诊断及检测技术规程 1 范围 本标准规定了芝麻细菌性青枯病(Sesame bacterial w
3、ilt)诊断及检测技术的术语和定义、症状诊断、病原菌形态学鉴定与致病性测定和病原菌PCR检测。 本标准适用于芝麻细菌性青枯病症状诊断、病原菌形态学鉴定及PCR检测。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 16s rRNA 序列 细菌染色体上编码 rRNA 相对应的 DNA 序列,存在于所有细菌的染色体基因组中。具有高度的保守性和特异性。16s rRNA 基因检测技术已成为病原细菌检测和鉴定的重要方法。 2.2 ITS 序列 16S23S rRNA基因区间的一段高度可变序列,该区域种间多态性丰富,而种内却非常保守,这些特点使得它在细菌分类鉴定研究上具有独特的优势。 3 症状诊断
4、初期在茎杆上出现暗绿色水浸状斑块, 继而呈黑褐色条斑向上下扩展, 顶梢常有2个3个梭形溃疡状裂缝,部分病茎溃疡状裂缝可延伸至茎杆中下部,溃疡状裂缝出现早而多的病株常呈畸形。病株顶端先出现萎蔫, 继而整株呈失水状, 早期夜间可恢复正常, 后期则呈黑褐色枯死。 病株茎部维管束变褐色,髓部空洞。折断茎杆常可见菌脓形成的透明细丝。茎杆表皮下常可见泡状隆起,刺破后有乳白色菌脓溢出,渐成为漆黑色晶亮的颗粒。 4 病原菌形态学鉴定与致病性测定 4.1 菌株分离与形态学鉴定 4.1.1 菌株分离 采集典型的芝麻细菌性青枯病标本,剪取病健交界处病茎3cm4cm,经75%酒精消毒、灭菌水冲洗后,剪去两头取中间段置
5、于装有5ml10ml无菌水的试管中静置5min左右至悬浮液变混浊,用接种环蘸DB36/T 1036-2018 2 取少量粗悬液分别在NA平板和TZC平板上划线或涂布。 28培养72h后观察菌落形态。挑取典型菌落,进行光学显微镜下菌体的革兰氏染色、鞭毛染色和形态观察。 4.1.2 形态学鉴定 根据以下形态学特征作为鉴定依据。青枯菌革兰氏染色反应为阴性,菌体杆状,具1根4根极鞭,无荚膜。 在NA培养基平板上于28培养72h, 见附录A, 菌落呈污白色, 平滑有光泽, 呈粘液状, 直径2mm3mm。在2,3,5-氯化三苯基四氮唑(简称TZC,下同)选择性培养基上,28培养72h,产生的菌落呈不规则圆
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