SN∕T 5381-2021 膨果苋检疫鉴定方法(出入境检验检疫).pdf
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1、ICS 65.020.01 CCS B 16 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 5381-2021 膨果克检疫鉴定方法Detection and identification of amarnthus deflexusL. 2021-06-18发布2022-01-01实施中华人民共和国海关总署发布中华人民共和同向入境检验检疫行业标准膨果竟检疫鉴定方法SN/T S:1Rl-2021 兴巾国海关出版社有限公叫出版发行北京市朝阳区东四环南路甲1号(OOOZ3)编辑部:(010)65194242-7531网址www.CL 印张1.2S 字数37千字2021年7月第一版2021年7月第一次印
2、刷印苦x:1-500 书专书号155175 675 定价20.00兀SN/T 5381-2021 目IJ1=1 木文件按照GB/T1. 1-2020 (标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规则起草。本文件由中华人民共和同海关总署提山并归口。本文件起草单位:中同检验检疫科学研究院、福州海关技术中心、二连海关技术中心、青岛海关技术中心、无锡海关综合技术巾心、巾华人民共和国银川海关、广州、|海关技术巾心、南通海关综合技术中.IL0 本文件主要起草人:徐晗、潘绪斌、虞费、袁、淑珍、邵秀玲、孙晃晃、胡诗瑶、吴悔荣、孙民琴OI 膨果宽检疫鉴定方法1 范围本文件规定了膨果觅(Amar川del
3、jZe:r:L.)检疫鉴定方法。本文件适用于膨果觅检疫鉴定。2 规范性引用文件SN/T 5381-2021 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件.仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的11用文件.其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T 1193 基因检字号实验室技术要求SN/T 3710 异株克市属检疫鉴定11法SN/T4715 杂草采集、保存和|制作规范3 术语、定义和缩略i吾3. 1 术语和定义SN/T 3710界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3. 1. 1 胞果UtricIe |牛果的一种,又称囊果,由合生心皮形成
4、的一类果实,具一枚种子。成熟时,果皮薄且l燥,疏松地包罔种子,极易与种子分离O3. 1. 2 苞片Bract 在花或花序基部的退化的单片或数片叶或叶状结构.是介于正常叶和花之间的一种变态叶,有保护也芽或果实的作用。3. 1. 3 高光谱Hyperspectral 光i谱昔分辨率优于波段多的特点光谱通道数多达数十甚至数百个以上,而且各光谱通道间往往是连续的。3.2 缩略语下列缩回再语适用于木文件OPCR: polymerase chain reaction,聚合酶链式反应。DNA: deoxyribonuleic acid,脱氧核糖核酸。ITS: in ternal transcr讪ed叩ace
5、rs1 and 2 and the interveni吨5.8S ribosomal gene,核糖休DNA内转录间隔仄1和内转录间隔仄2,以及5.8S核糖体基因oTAE:Tris acetate-EDTA buffer,Tris乙酸电泳缓冲液。1 SN/T 5381-2021 4 膨果宽基本信息学名:Amarathusdfle立usL. 英文名:largefruit amaranth, Argentina amaranth, deflexed amaranth, low amaranth 分类地位:双子日|植物纲Magnoliopsida,石竹曰Caryophyllales,克科Amaran
6、thaceaeJussieu,克属lmaranlh usL. ,自克f巨属lmaranlhussuhgen. llh旷五iaCKunth) Gren. Godr. 有害生物信息参见附录A。5 方法原理膨呆克植株、花序、花、胞架和种子等形态特征是鉴定该种的主要依据,基于DNA条形码鉴定的分子生物学方法作为形态学鉴定的辅助于段O当植物体组织完好,在花果期,具备花等繁殖器官,可仅使用形态学鉴定方法。当植物体组织不完整,在幼苗期,或仅有种子、叶片等部分组织时.需采用形态学和分子生物学相结什的鉴定方法。种子鉴定可选择性参考高光谱特征(参见附录B)。6 器具和试剂6. 1 仪器体视显做镜、电子天平(感量。
7、.001峙,0.001g)、液氮罐、纯水机、电子天平、水浴锅、高斥灭菌器、高温干燥箱、离心机、电泳仪、PCR仪、电泳槽、凝胶成像系统、高通量研磨机、涡旋震荡器等。6.2 设备电动筛或套筛、解剖刀、解剖针、放大镜、直凡、慑子、小毛笔、培养阳、指形管、广口瓶、白瓷盘、分样白、分样板、样品铲、样品袋、标签、记录主氏、标木瓶、标木盒、可调移液器(J000 ,IlL, 200 Ill, J 00 11L, 20L, 10 JlL, 2. 5 ,uL)、可调移液器枪头等。6.3 试剂防虫剂、幢脑精、干操剂。植物基|大|组提取试剂盒、PCR反应体系常用试剂、TAE电泳缓冲液和|核酸分子量标准物质等。7 检测
8、7. 1 样品检测7. 1. 1 口岸监测在检疫现场采集植株鉴定用样品,要求植株完整,形态学特征完好o化部鉴定用样品,要求处于果实成熟期、外型完整。种子鉴定用样品,要求发育成熟、籽粒饱满、外型完好。7. 1. 2 植物产品检测将现场检疫抽取的送检样品充分混匀,制成平均样品O采用四分法,视样品多少取平均样品的二分之一至四分之三(较少样品时)作为试验样品,称取其重量并记录,每份试验样品不少于1kg,剩余的平均样品加!占标签作为保罔样品保存。送检样品不足1kg的全部检测。7. l. 3 胞果和种子过筛检验SN/T 5381-2021 根据样品个体的直径确定套筛的规格.从大到小依次套上不同孔径的规格筛
9、并加上!自筛,将适量样品倒入规格筛的上层内,盖上筛盖,用回旋法过筛(或用电动筛振荡),使样品充分分离,把过筛的筛上物和筛下物分别倒入内瓷盘内,用摄子挑取杂草籽实,放于培养皿内。?昆杂于植物原粮和种子中的克属胞果或种子,一般在孔径为5mm筛下物巾获得o当样品土重少时,也可将全部样品放入白瓷盘巾进行人工挑检o7.2 镜检在解剖镜或放大镜下镜柿。进行植株花部特征和胞果内部特征观察时,辅以解剖刀、解剖针等1.具。8 鉴定方法8. 1 形态学鉴定8. l. 1 克属一年或短时多年生草本,茎直立或伏卧O叶互生,全缘,有叶柄。花单性,雌雄同株或异株,腋生或顶生,聚生成单一或阅惟状穗状花序;每花有1苞片及2小
10、苞片,干膜质;花被片。-5,大小相等或不等,绿色或着色,薄膜质,直立或向外反折,在果期直立,间或在花期后变硬或基部加厚;立在itt;5,少数1-4,花丝钻状或丝状,基部尚生,花药2室;无退化雄疏;子房具1直生胚珠,花柱极短或缺,柱头2-3,钻状或条形,宿存,内面有细齿或做硬毛o胞果球形成卵形,侧扁,膜质,不裂、周裂成不规则开裂o种子双凸镜状,侧扁,黑色、深褐色、红褐色或褐色,平滑,边缘锐或饨,具光泽Oi亥属含克亚属、白克亚属和异株克亚属,约74种,除南北两极外,均有分布。我国有20余种。8. l. 2 白宽亚属一年生或短时多年生草本,雌雄同株,平卧或匍旬,少直立。茎光滑或近光滑,有时被短柔毛。
11、叶互生,具柄,形状多变,线形至椭圆形,基部渐狭或模形,先端具小短尖。花序多为腋生忡|簇状或短穗状,少见顶生短穗状。雄花花被片(1-)3-5,推恶(1-)3-5。雌花花被片(1-)3-5 ,柱头2-30胞果不裂、不规则开裂或周裂。约52种,分布广泛。我国约12种。8. l. 3 膨果宽8. l. 4. 1 植株和茎植株远端被毛或成熟期变光滑。茎倾斜上升或匍旬,基部多分枝,从根茎部向外呈辐射状,通常10 cm50 cm高。8. 1.4.2 日十叶柄约为叶片长度的1/2;叶片菱状卵形、RX:卵形至披针形,长1cm 2 cm,宽0.5cm 1 cm,基部渐挟或模形,边全缘、平滑或略皱缩,先端近急、尖、
12、钝状或微凹至浅凹缺,具小短尖。3 SN/T 5381-2021 8. 1.4.3 花序1页生同锥花序三角锥状,直立.密生厚实,远端兀叶.腋生花序团簇状o8. 1. 4. 4 苞片苞片线形,长o.5 mml mm,约为花被片长度的1/208. 1. 4. 5 花被片雌花花被片2-3,狭椭罔形或矩同状披针形,不具爪,等长或近等长,长1.2 mm2 mm,先端急尖;花性分支直立,柱头30雄花簇生于花序先端,花被片2-3;雄疏2-308. 1.4.6 胞果表面具2-3条纵肋,略做膨大,椭同体型,长2mm3 mm,明显长于花被片,表面光滑,不开裂。8. 1. 4. 7 种子双凸透镜状,椭圆形,长1mm1
13、. 2 mm,具明显环边,深褐色至黑色,种脐歪斜,下凹O8.2 分子生物学鉴定8.2.1 DNA提取及浓度测定使用常见商品化试剂盒提取膨果克基因组DJ八。用以提取核酸的植物组织用量参照所采用商品化试剂盒使用说明。用紫外分光光度计或核酸浓度测定仪检测所提取核酸浓度,浓度以达到8.2.2步骤中使用的商品化PCR试剂盒中要求的DN八模板用量为准。8.2.2 PCR及测序膨果克的PCR步骤及测序.参见附录C,防污染措施应符合SN/T1193的规定。9 结果判定9. 1 植株鉴定植物体各部分组织完整,符合8.1及附录D、附录E、附录F和附录G所述克属植株、花序、化、胞果等形态特征.可判定为膨果克o9.2
14、 种子及部分组织鉴定符合8.1及附录D、附录E、附录F和附录G所述膨果克种子或叶片等部分组织形态特征,并与附录日所列膨果克ITS参考序列一致性在99%以上时.可判定为膨果克。10 标本和样本的保存和处理杂草标本的保存方法按照SN/T4715的规定o4 .1 地理分布附录A(资料性)膨果宽相关信息SN/T 5381-2021 原产南美洲问根廷、坡利维亚、巳丙和秘鲁等地,现入侵于欧洲同班牙、德同、法同等21个同家及地区。北美洲美国东西部沿海地区,中美洲墨西哥,非洲摩洛哥和南非,亚洲日本、印度、以色列和土耳其,以及大洋洲均有分布。中同元分布。.2 经济危害为吉农田、牧草(茵秸)、果同(柑情、甘蔚)等
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