HJ 347.1-2018 水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法(环境保护).pdf
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1、中华人民共和国国家环境保护标准 HJ 347.12018 部分代替 HJ/T 3472007 水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法 Water qualityDetermination of fecal coliformMembrane filtration 2018-12-26 发布 2019-06-01 实施 生 态 环 境 部 发 布 HJ 347.12018 i 中华人民共和国生态环境部 公 告 2018 年 第 73 号 为贯彻中华人民共和国环境保护法 ,保护生态环境,保障人体健康,规范生态环境监测工作,现批准水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法等五项标准为国家环境保护标准,并予发布。 标准名称
2、、编号如下。 一、 水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法 (HJ 347.12018) ; 二、 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法 (HJ 347.22018) ; 三、 水质 细菌总数的测定 平皿计数法 (HJ 10002018) ; 四、 水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法 (HJ 10012018) ; 五、 水质 丁基黄原酸的测定 液相色谱- 三重四极杆串联质谱法 (HJ 10022018) 。 以上标准自 2019 年 6 月 1 日起实施,由中国环境出版集团出版,标准内容可在生态环境部网站( 自以上标准实施之日起, 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法(试
3、行) (HJ/T 3472007)废止。 特此公告。 生态环境部 2018 年 12 月 26 日 HJ 347.12018 iii 目 次 前 言. iv 1 适用范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 方法原理.1 5 干扰和消除.1 6 试剂和材料.2 7 仪器和设备.2 8 样品.3 9 分析步骤.3 10 结果计算与表示.4 11 精密度和准确度.5 12 质量保证和质量控制.5 13 废物处理.6 14 注意事项.6 附录 A(资料性附录) 粪大肠菌群检验记录及报告格式.7 HJ 347.12018 iv 前 言 为贯彻中华人民共和国环境保护法和中华人民共和国水污
4、染防治法 ,保护生态环境,保障人体健康,规范水中粪大肠菌群的测定方法,制定本标准。 本标准规定了测定地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的滤膜法。 本标准是对水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法(试行) (HJ/T 3472007)滤膜法部分的修订。 本标准首次发布于 2007 年,原起草单位为中国环境监测总站。本次为第一次修订。 本次修订的主要内容如下: 完善了方法原理的表述; 增加了检出限; 增加了规范性引用文件、术语和定义、干扰和消除、仪器和设备、样品采集、样品保存、精密度和准确度、质量保证和质量控制、废物处理等章节; 自本标准实施之日起,水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵
5、法和滤膜法 (试行) (HJ/T 3472007)废止。 本标准的附录 A 为资料性附录。 本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。 本标准起草单位:辽宁省环境监测实验中心。 本标准验证单位:大连市环境监测中心、丹东市环境监测中心站、锦州市环境监测中心站、辽阳市环境监测站、铁岭市环境保护监测站和沈阳市疾病预防控制中心。 本标准生态环境部 2018 年 12 月 26 日批准。 本标准自 2019 年 6 月 1 日起实施。 本标准由生态环境部解释。 HJ 347.12018 1 水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法 1 适用范围 本标准规定了测定水中粪大肠菌群的滤膜法。 本标准适用于
6、地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的测定。 本方法的检出限:当接种量为 100 ml 时,检出限为 10 CFU/L;当接种量为 500 ml 时,检出限为2 CFU/L。 2 规范性引用文件 本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是未注明日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB/T 14581 水质 湖泊和水库采样技术指导 HJ 494 水质 采样技术指导 HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 粪大肠菌群 fecal coliforms 又称耐热大肠菌群(thermotolerant coliforms) 。44.5培
7、养 24 h,能在 MFC 选择性培养基上生长,发酵乳糖产酸,并形成蓝色或蓝绿色菌落的肠杆菌科细菌。 3.2 菌落形成单位 colony- forming units(CFU) 单位体积样品中的细菌群落总数。 4 方法原理 样品通过孔径为 0.45 m 的滤膜过滤,细菌被截留在滤膜上,然后将滤膜置于 MFC 选择性培养基上,在特定的温度(44.5)下培养 24 h,胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长,粪大肠菌群能生长并发酵乳糖产酸使指示剂变色,通过颜色判断是否产酸,并通过呈蓝色或蓝绿色菌落计数,测定样品中粪大肠菌群浓度。 5 干扰和消除 5.1 活性氯具有氧化性,能破坏微生物细胞内的酶活性,导致
8、细胞死亡,可在样品采集(8.1)时加入硫代硫酸钠溶液(6.6)消除干扰。 5.2 重金属离子具有细胞毒性,能破坏微生物细胞内的酶活性,导致细胞死亡,可在样品采集(8.1)HJ 347.12018 2 时加入乙二胺四乙酸二钠溶液(6.7)消除干扰。 6 试剂和材料 除非另有说明,分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂或生物试剂,实验用水为蒸馏水或去离子水。 6.1 MFC 培养基。 胰胨 10 g 蛋白胨 5 g 酵母浸膏 3 g 氯化钠 5 g 乳糖 12.5 g 胆盐三号 1.5 g 1%苯胺蓝水溶液 10 ml 1%玫瑰红酸溶液(溶于 8.0 g/L 氢氧化钠液中) 10 ml 将上述培养基
9、中的成分(除苯胺蓝和玫瑰红酸外) ,溶解于 1 000 ml 水中,调节 pH 至 7.4,分装于三角烧瓶内,于 115高压蒸汽灭菌 20 min,储存于冷暗处备用。临用前,按上述配方比例,用灭菌吸管分别加入已煮沸灭菌的 1%苯胺蓝水溶液 1 ml 及 1%玫瑰红酸溶液 (溶于 8.0 g/L 氢氧化钠液中) 1 ml,混合均匀。如培养物中杂菌不多,则不加玫瑰红酸亦可。加热溶解前,加入 1.2%1.5%琼脂可制成固体培养基。也可选用市售成品培养基。配制好的培养基避光、干燥保存,必要时在 53冰箱中保存,分装到平皿中的培养基可保存 24 周。配制好的培养基不能进行多次融化操作,以少量勤配为宜。当
10、培养基颜色变化,或脱水明显时应废弃不用。 6.2 无菌滤膜:直径 50 mm,孔径 0.45 m 的醋酸纤维滤膜,按无菌操作要求包扎,经 121高压蒸汽灭菌 20 min,晾干备用;或将滤膜放入烧杯中,加入实验用水,煮沸灭菌 3 次,15 min/次,前 2 次煮沸后需更换水洗涤 23 次。 6.3 无菌水:取适量实验用水,经 121高压蒸汽灭菌 20 min,备用。 6.4 硫代硫酸钠(Na2S2O35H2O) 。 6.5 乙二胺四乙酸二钠(C10 H14N2O8Na22H2O) 。 6.6 硫代硫酸钠溶液:(Na2S2O3)=0.10 g/ml 称取 15.7 g 硫代硫酸钠(6.4) ,
11、溶于适量水中,定容至 100 ml,临用现配。 6.7 乙二胺四乙酸二钠溶液:(C10 H14N2O8Na22H2O)=0.15 g/ml 称取 15 g 乙二胺四乙酸二钠(6.5) ,溶于适量水中,定容至 100 ml,此溶液可保存 30 d。 7 仪器和设备 7.1 采样瓶:1 L、500 ml 或 250 ml 带螺旋帽或磨口塞的广口玻璃瓶。 7.2 高压蒸汽灭菌器:115、121可调。 7.3 恒温培养箱:允许温度偏差 44.50.5。 7.4 过滤装置:配有砂芯滤器和真空泵,抽滤压力勿超过50 kPa。 7.5 pH 计:准确到 0.1 pH 单位。 7.6 培养皿:直径 90 mm
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