NY∕T 1471-2017 牛毛滴虫病诊断技术(农业).pdf
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1、ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准牛毛滴虫病诊断技术NY/T 1471一2017代替NY/T1471-2007 Diagnostic techniques for bovine trichomoniasis 2017 -06-12发布2017 - 10 -01实施;!命中华人民共和国农业部发布NY/T 1471一2017目U吕本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准代替NY/T1471一2007(牛毛滴虫病诊断技术。与NY/T1471一2007相比,除编辑性修改外,主要技术变化如下:一-病原PCR检查时增加了一对可用PCR引物。本标准由农业部兽医局
2、提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。本标准起草单位:南京农业大学、中国动物卫生与流行病学中心。本标准主要起草人:李样瑞、徐立新、严若峰、宋小凯、郑增忍。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:一一-NY/T1471-2007。I NY/T 1471一2017引毛滴虫病是由胎儿三毛滴虫(Tritrichomonas f oetus )寄生于牛生殖道引起的疾病。该病呈世界性分布,引起牛,尤其是奶牛生殖器官炎症、死胎、流产和不育,可对畜牧业生产造成严重的经济损失。毛滴虫病被世界动物卫生组织列为通报盖革画.画画.主要通过自然交配传播,已染病动物的精液和污染的器械人工授精
3、也可引H NY/ T 1471-2017 牛毛滴虫病诊断技术1 范围本标准规定了牛毛滴虫病的病原显微镜检查技术和聚合酶链反应CPCR)扩增虫体DNA的检测方法。本标准适用于牛毛滴虫病的诊断。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/ T 6682 分析实验室用水规格和实验方法GB 19489实验室生物安全通用要求3 缩略语下列缩略语适用于本文件。CT AB: hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烧基三甲基澳化镜。DNA:
4、 deoxyribonucleic acid,脱氧核糖核酸。dNTP: deoxynucleoside triphosphate,三磷酸脱氧核昔酸。PBS: phosphate buffer solution,磷酸盐缓冲液。PCR: polymerase chain reaction,聚合酶链反应。Tq酶:Taq DNA polymerase, Taq DNA聚合酶。4 生物安全措施进行牛毛滴虫病实验室检测时,如显微镜检查、DNA提取等,按照GB19489的规定执行。5 临床诊断5. 1 临床症状5. 1. 1 公牛公牛很少或没有临床症状发生。若有症状,主要包括敬液性包皮炎,包皮肿胀,并分泌出
5、大量服性物质;包皮蒙古膜上出现粟粒大的红色结节,有痛感,不愿交配。5. 1. 2 母牛母牛出现阴道损伤,卡他性炎症,阴道红肿;黠膜出现粟粒大或更大的小结节,排出蒙古液性分泌物;宫颈和子宫内膜出现炎症;随后发生不规则的发情,子宫脱垂、子宫积服和早期(1周16周)流产。5. 2 结果判定根据牛交配、人工授精或母牛的生殖系统检查史,公牛具有5.1.1临床表现、母牛具有5.1.2临床表现时,可判定为疑似牛毛滴虫病。6 实验室诊断6. 1 样品的采集与运输l NY/T 1471-2017 6. 2 主要仪除特别说显微镜、载6. 1. 1 样晶的采集6. 1. 1. 1 母牛选择发情后1d2 d的母牛,用
6、水将母牛外生殖器洗涤干净。然后,采用下列任何一种方法采样:a) 取市场上出售的常规型号的注射器,如50mL、100mL的注射器,将30mL40 mL的300C350C灭菌生理盐水急速注入阴道,以洗涤子宫和阴道壁。收集洗涤液于离心管中,1 500 r/ min2 000 r/ min离心5min后,取沉淀物作为待检样品。b) 取一长30cm、直径0.9cm,并在离端9cm处弯成150。角的消毒玻璃管,注人1mL2 mL 的300C350C灭菌生理盐水,6. 1. 1.2 公牛首先将公牛外生后,以手压紧包皮口,2000 r/min离心56.1.1.3 精液取人工采集体。聚合酶、1XPCR研件、捣碎
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