HPLC法同时测定西藏凹乳芹根中4种成分的含量.pdf
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1、Journal of Traditional Chinese Veterinary Medicine2023年42卷第5期Vol.42 No.5 2023西藏凹乳芹(Vicatia thibetica de Boiss.)为伞形科(Umbelliferae)凹乳芹属植物,产自四川、云南、西藏,还分布于印度、巴基斯坦、尼泊尔等地1-2。西藏凹乳芹性温,味甘、苦、辛,具有祛风除痹等功效,在藏医中用于治疗隆病引起的头脑与四肢疾病及肾部疾病、黄水病等,是藏药基础方五大根药的重要组成之一。西藏凹乳芹的根具香味,常被用于食品佐料,其叶片藏芹菜可食用3-4。西藏凹乳芹的根又称西归,在大理白族地区已有百余年的
2、使用记录,可作为滋补蔬菜炖肉、炖鸡等,其鲜品可生食5。国内外研究表明,西藏凹乳芹具有补血、补气、调经等功效,用于面色萎黄、眩晕心悸、血虚所致的月经不调、痛经等症6,还有抗氧化、调节机体免疫等药理作用。西藏凹乳芹中含有香豆素类成分伞形花内酯、佛手柑内酯等,黄酮类成分芹菜素以及阿魏酸等活性成分。本研究利用HPLC法同时对西藏凹乳芹中以上4种活性成分进行含量测定,为后续研究提供理论依据。1材料1.1试剂与药物西藏凹乳芹采自甘肃中医药大学临夏和政药用植物园,引种自西藏,经甘肃中医药大学杜弢教授鉴定为西藏凹乳芹的干燥根。甲醇(色谱纯)、85%磷酸(色谱纯)均为天津市大茂化学试剂有限公司产品;伞形花内酯对
3、照品(批号PS010610)、佛手柑内酯对照品(批号PS010563)、芹菜素对照品(批号PS011063)、阿魏酸对照品(批号PS012244)均为成都普思生物科技股份有限公司产品;水为超纯水。1.2仪器设备高效液相色谱仪 Waters e2695,沃特世科技(上海)有限公司;超声波清洗机(250ZDE,昆山禾创超声仪器有限公司);中草药粉碎机(FW135,天津市泰斯特仪器有限公司);电子天平 PSC30U-120V,飞宏(东莞)电子有限公司;电子天平 CP513,奥豪斯仪器(常州)有限公司。2方法与结果2.1溶液的制备2.1.1对照品溶液的制备分别精密称取伞形花内酯、佛手柑内酯、芹菜素及阿
4、魏酸对照品各5 mg,使用甲醇(HPLC)溶解后,转移到10 mL容量瓶中,定容,充分摇匀,得质量浓度为0.5 mg/mL的4个对照品母液。2.1.2西藏凹乳芹样品溶液的制备取干燥后的西藏凹乳芹,经粉碎机粉碎后过筛,称取粉末2.0 g放于干DOI:10.13823/ki.jtcvm.2023.064中图分类号:S853.7文献标识码:A文章编号:1000-6354(2023)05-0078-03HPLC法同时测定西藏凹乳芹根中4种成分的含量李阳1,2,余晓晖1,杜弢1,朱昕宇1,郭玫1,21.甘肃中医药大学,甘肃兰州730000;2.甘肃省高校中(藏)药化学与质量研究重点实验室,甘肃兰州730
5、000摘要:建立同时测定西藏凹乳芹中伞形花内酯、佛手柑内酯、芹菜素以及阿魏酸等含量的方法。采用 SinoChrom ODS-BP 柱(250.0 mm4.6 mm,5 m);检测波长 320 nm;柱温 30;流动相为0.05%磷酸-甲醇,进行梯度洗脱;流速为1 mL/min。结果显示,伞形花内酯、佛手柑内酯在0.005 00.500 0 mg/mL范围内,阿魏酸在0.010 00.500 0 mg/mL范围内,芹菜素在0.002 50.500 0 mg/mL范围内有良好的线性关系,平均回收率分别为102.00%、96.00%、96.58%、104.40%。本试验建立的方法可行性较高,可以用于
6、同时测定西藏凹乳芹中伞形花内酯、佛手柑内酯、芹菜素以及阿魏酸4种成分的含量。关键词:HPLC法;西藏凹乳芹;含量测定收稿日期:2022-08-16;网络首发日期:2023-04-18网络首发链接:https:/ 78李阳,余晓晖,杜弢,等.HPLC法同时测定西藏凹乳芹根中4种成分的含量J.中兽医医药杂志,2023,42(5):78-80燥的100 mL具塞锥形瓶中,精密量取20 mL甲醇,摇匀,称重,超声提取(50,50 kHz,功率100%)30 min,用甲醇补足减失质量,抽滤,将续滤液过0.45 m(有机系)微孔滤膜,得淡黄色澄清液体,作为供试品溶液。2.2检测波长的确定将 4 种对照品
7、母液稀释至一定浓度后,在 200400 nm 波长范围之内进行全波长扫描,4 种成分在320 nm波长处均有较好的吸收,故选择320 nm作为检测波长。2.3色谱条件色谱柱为SinoChrom ODS-BP柱(250.0 mm4.6 mm,5 m);流动相为甲醇(A)-0.05%磷酸溶液(B),梯度洗脱程序见表1;流速1 mL/min;柱温30;进样体积10 L;检测波长320 nm。对照品色谱图如图1所示。2.4方法学考察2.4.1线性关系考察精密吸取“2.1.1”项下制备的伞形花内酯对照品母液(0.5 mg/mL)、佛手柑内酯对照品母液(0.5 mg/mL),分别稀释成7个浓度梯度,芹菜素
8、对照品母液(0.5 mg/mL)稀释成8个浓度梯度,阿魏酸对照品母液(0.5 mg/mL)稀释成 6 个浓度梯度,用“2.3”项下的色谱条件进行分析,以峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标进行线性回归,回归方程、相关系数及线性范围见表2。2.4.2精密度试验取“2.1.2”项下制备的供试品溶液,按照“2.3”项下的色谱条件连续进样6次,计算得伞形花内酯、佛手柑内酯、芹菜素、阿魏酸峰面积的RSD分别为0.58%、1.07%、0.67%、2.01%,表明仪器精密度良好。2.4.3加样回收率试验精密称取已知含量的西藏凹乳芹粉末2.0 g,平行6份,分别精密加入与样品含量相当的各对照品母液,按照“2.1.
9、2”项下方法提取、制备供试品溶液,按照“2.3”项下的色谱条件分析,计算得伞形花内酯、佛手柑内酯、芹菜素、阿魏酸的平均回收率分别为 102.00%、96.00%、96.58%、104.40%,RSD分别为1.3%、2.8%、2.5%、2.1%(n=6)。2.4.4稳定性试验采用“2.3”项下的色谱条件,将制备的供试品溶液于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h进样分析,计算得伞形花内酯、佛手柑内酯、芹菜素、阿魏酸峰面积的RSD分别为1.6%、1.5%、2.2%、1.2%,表明样品溶液在12 h内稳定性良好。2.5样品测定按照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,平行制备图1对照品HPLC色谱
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