6个香菇L135菌株主要性状的比较分析.pdf
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1、 Edible and medicinal mushrooms 2023,31(5):332337 6 个香菇 L135 菌株主要性状的比较分析 刘 昆 蒋 俊 宋小亚 路新彦 曾凡清 应国华(丽水市农林科学研究院 浙江 丽水 323000)摘 要 以从丽水各地收集的表型差异明显的 6 个香菇 L135 菌株为材料,比较分析菌丝形态、菌丝生长速度、漆酶活性、抗高温能力、子实体形态、栽培产量等指标,以期筛选出性状优良与疑退化菌株,为后续菌种种性退化机理研究奠定材料基础。研究结果表明,6 个菌株中 L135-21 综合性状表现优良;L135-1 的菌丝形态、漆酶活性、抗高温能力表现较差,出菇期集中
2、,子实体较小;L135-30 耐高温能力、产漆酶能力较强,但栽培产量与子实体形态均较差;L135-18、L135-19 所有性状指标均较差。综合评价,L135-1、L135-18、L135-19、L135-30为退化明显株系,并且可能代表 3 个不同的退化类型,可作为后续退化机理研究的代表菌株。关键词 香菇;L135;退化;性状 中图分类号:S646 文献标识码:A 文章编码:2095-0934(2023)05-332-06 Comparative analysis of main characters of six strains of Lentinula edodes variety L1
3、35 LIU Kun JIANG Jun SONG Xiaoya LU Xinyan ZENG Fanqing YING Guohua(Lishui Institute of Agriculture and Forestry Sciences,Lishui 323000,China)Abstract Six Lentinula edodes cultivated strains of variety L135 with obvious phenotypic differences collected from various locations in Lishui were used as e
4、xperimental materials,the mycelial morphology,mycelial growth rate,laccase activity,high temperature resistance,cultivated yields,fruiting body morphology and other trait indicators were compared and analyzed,in order to screen out strains with good characters and obvious signs of degradation,which
5、laid a material foundation for the subsequent research on the mechanism of strain degradation.The results showed that L135-21 combined excellent trait performance;L135-1 had poor performance in mycelial morphology,laccase activity,and high temperature resistance,with a concentrated fruiting period a
6、nd smaller fruiting bodies.L135-30 has strong high temperature resistance and laccase activity,but the cultivated yields and fruiting body morphology are poor.L135-18 and L135-19 had poor performance in all trait indicators.Based on the comprehensive evaluation,L135-1,L135-18,L135-19,and L135-30 wer
7、e identified as significantly degraded strains,which representing three different degradation types,and can be used as representative strains for subsequent research on the mechanism of degradation.Keywords Lentinula edodes;L135;degradation;agronomic characters 基金项目:丽水市科技局重点研发项目(2017ZDYF09);国家现代农业产业
8、技术体系建设专项(CARS-20);浙江省农业(食用菌新品种选育)新品种选育重大科技专项(2021C02073-1-2)作者简介:刘昆(1984),男,硕士,助理研究员,主要从事食用菌菌种质量相关研究。E-mail:。刘 昆等:6 个香菇 L135 菌株主要性状的比较分析 333 香菇(Lentinula edodes)具有重要的食用和药用价值,在中国已经有 800 余年的栽培历史1-2。据中国食用菌协会统计,2021 年我国香菇鲜品总产量近 1 300 万吨,占所有食用菌总产量的 31.34%,是我国第一大菇种3。随着栽培规模与菌种使用年数的增加,主栽品种在历经数次传代、分离、保藏、繁育和运
9、输后,出现了菌种退化现象,给香菇产业健康发展带来不良影响。香菇品种 L135(国品认菌 2007005)为福建省三明市真菌研究所于 2007 年筛选育成。为低温晚熟型品种,菌龄 160200 天,子实体柄短肉厚,菇形圆正,鳞片少,易形成花菇。其菌丝抗逆性较差,抗杂菌能力较弱,不耐高温,不易越夏,适宜32 以下区域或海拔较高、气温凉爽地区栽培。浙江省庆元县、景宁县等高海拔山区因夏季凉爽、冬季温差大,满足 L135 品种特性要求,因而 L135曾被菇农广泛栽培。近年来,L135 品种在生产中逐渐表现出烂棒率高,产量低,菇小、畸形等问题,给菇农带来了严重的经济损失4。为研究香菇 L135 品种退化的
10、原因,探索香菇品种退化的内在机理,本文以 6 个不同来源的生产用 L135 菌株为实验材料,对其菌丝形态、漆酶活性、抗高温能力、栽培产量、子实体特征等进行比较分析,期望筛选出遗传稳定、性状较好与明显退化的菌株,为进一步研究香菇种性退化机理奠定基础,为香菇品种选育提供指导。1 材料与方法 1.1 供试菌株 从丽水各地收集不同来源且栽培中使用的香菇 L135 品种菌株,经初步筛选后获得 6 株表型差异明显的菌株,编号分别为:L135-1、L135-18、L135-19、L135-21、L135-29、L135-30。为了确定菌株的真实性,以上海农业科学院食用菌研究所提供的 L135 菌株为对照,按
11、照国家农业标准 NYT 18452010食用菌菌种区别性鉴定拮抗反应、NY/T 17432009食用菌菌种真实性鉴定 RAPD法、NY/T 17302009食用菌菌种真实性鉴定 ISSR 法,对 6 个菌株进行了真实性鉴定,鉴定结果显示所有菌株均真实可靠。1.2 实验方法 1.2.1 培养基制作 马铃薯葡萄糖琼脂粉(PDA)培养基:购自荣研生物科技(中国)有限公司,按照说明书加热溶解,于 121 灭菌 20 min,待温度降至 60 左右时,分装于直径 90 mm 培养皿中,每皿 20 mL。木屑培养基:培养基配方为杂木屑 78%、麦麸20%、红糖 1%、石膏 1%,料水比为 11.2,pH自
12、然。取木屑培养基 45 g 分装于 20 mm 300 mm试管中,使用木棒压平至固定高度,硅胶塞封口,121 灭菌 60 min,冷却至常温后备用。木屑琼脂培养基:培养基配方为杂木屑(粉碎机粉碎 2 min,10 目过筛)78 g、麦麸 20 g、石膏1 g、葡萄糖 1 g、琼脂粉 16 g,混合搅拌均匀后,称取 2.90 g 分装到 100 mL 三角瓶,加水 25 mL,于 121 灭菌 30 min,待温度降至 60 左右时,分装于直径 90 mm 培养皿中,每皿 20 mL。愈创木酚(POD)培养基:PDA 培养基中加入 0.04%愈创木酚,于 121 灭菌 20 min 灭菌后分装
13、于 90 mm 培养皿中,每皿 20 mL5。漆酶活性定量试剂盒:购自北京索莱宝科技有限公司。1.2.2 菌株活化 将试验菌株从试管斜面中接种于 PDA 平板中心,于25 下活化培养7天,使用7 mm打孔器,在菌落边缘同步生长菌丝处取菌丝块,用于后续试验。1.2.3 菌株性状检测 菌丝形态观察。将活化菌丝块分别接种于PDA平板与木屑琼脂培养基中心,每个菌株 3 个重复,于 25 培养 30 天,观察菌丝形态生长变化情况。菌丝生长速度测定。将 3 块活化菌丝块接种于装有木屑培养基的试管中心,于 25 温度下直立334 2023 年 第 31 卷 第 5 期 培养,待菌丝生长 1 cm 时,划起始
14、生长线,最快菌株菌丝生长至距试管底部 1 cm 时划终止生长线,测量生长距离,计算日均生长速度。漆酶活性定性测定。将活化菌丝块接种于POD平板上,每个菌株 3 个重复,25 培养 812 天,每天定时记录有无红棕色变色圈的产生及变色圈直径的大小,记录变色圈直径。根据变色圈的直径大小,检测漆酶产生能力。漆酶活性定量测定。将活化菌丝块分别接种于铺有半透膜的木屑培养基平板上,每个菌株 3 个重复,25 培养 15 天,收集菌丝体。于液氮中将菌丝体研磨成粉末状。按照漆酶活性检测试盒说明书进行漆酶定量测试。高温协迫检测。将 3 块活化菌丝块接种于装有木屑培养基的大试管中,25 培养 710 天后,划起始
15、生长线。随后置于 42 高温处理 4 h 后,继续 25 培养,菌丝距试管底部 1 cm时,划终止生长线,测量生长距离,计算高温胁迫处理后菌丝生长速度。农艺性状检测。栽培地点位于浙江省丽水市景宁县包凤村,在高棚内采用常规层架式栽培出菇管理。栽培料配方为杂木屑 79,麦麸20,石膏1,含水量55%60%,pH 自然。栽培袋规格为 15 cm55 cm,每袋填装栽培料 1.8 kg,常压灭菌,开放式接种。每个菌株设 3 个小区重复,每重复 36 棒。子实体菌幕裂开但未完全消失时进行采摘,统计单棒产量。每个菌株随机挑取 100 个子实体,测量子实体单菇重,菌盖直径、厚度,以及菌柄直径和长度。1.2.
16、4 数据分析 使用 R 软件进行统计分析。2 结果与分析 2.1 香菇 L135 不同菌株菌丝形态 分别接种到 PDA 培养基和木屑琼脂培养基的6 个 L135 菌株菌丝形态差异明显(图 1)。在 PDA培养基中,菌株 L135-1、L135-18、L135-19 菌丝较稀疏,无加厚隆起,无原基形成。在木屑琼脂培养基中,菌株 L135-1 菌丝明显稀疏,L135-18、L135-19 菌丝相对较浓,但无褐色斑点、子实体原基发生。菌株 L135-21、L135-29、L135-30 在两种培养基均出现菌丝局部加厚隆起、变色及出现子实体原基形态等现象,与大田栽培中正常菌棒转色前期菌丝隆起现象类似。
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