NY∕T 3859-2021 果品中交链孢霉菌鉴定技术规程(农业).pdf
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1、lCS 65.020.01 CCS B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准NY /T 3859-2021 果品中交链子包霉菌鉴定技术规程Technical code of practice for identification of Alternaria Nees in fruits 2021-05-07发布2021-11-01实施片中华人民共和国农业农村部发布NY / T 3859-2021 本文件rll农业农村;11利中111.1飞 Ii!Jt!lIHo本文件111仑l lU,f;1fI化技术委以会的/C/TC510)们门。本立:i+ l ,;0: ,y位,北京农业1页-l:tfJ叫l
2、与检测技术IiIf)Io(;、叶,11科t院fj物研究所。本文刊主:l:i人,11冬柿、李IIM川、冯l出jC、T法、T.5(11!.末、羽11出车、啊,、l .果品中交链子包霉菌鉴定技术规程1 范围斗牛水飞立;立文:1才l件1牛|一占肌见lU川i川i豆二7了,鲜食J贝4札4LlA川l)彤巴态,于法(耳衍1一t法击守)。本文1HtiJl1T鲜食织品I交链仙似的的鉴定。2 规范性引用文件下列文件巾的1);)仅该日期MJ.业的版本Jli川立:11。3 3.1 CB 4789. 16 C/丁6682C 19489 GB/ T 2740: DNA聚介IjJJ;UJi.合成ft (I DNA J:-段以
3、J3.2 GcnUank敖据美同|叫朱IJ?iJ技夕rJ数据库。4 防污染措施4. 1 鉴定过f,l1 1约污染.NV施饺c4.2 鉴定i二tf,lI(19-:trU废弃物rrr!i?121 5 原理第一法分子生物学法NY/ T 3859-2021 J-tI. ri二川JYJil1I川文fI.有的f ,虫111):ii川于本迢ri的斗E似有il:rj斗的月、止时采用*;IW链式反应(PlR)扩W1tlMl中具I:;j核椭f*慕|刘1),转录间隔1KA叶的A.2)。6. 4 PCl级lliU(l!.lH ,Jt八1(I(J八3), 6.5 dNTPs, 2. 5 mmo/1.。6.6 上样级l液
4、(见lf.f,JtA 1 (I(J I飞的。6.7 1、AE级 l液(!AI.附A rlr的A.5), 6.8 I)NA分子lI柄而i,n以11J1tJ.lx分100- 1 000 hp的I)Jn段。6.9 Tal DNA绞1l/1fi, 6. 10 J)拟;01附H附#粉俯I)f咆泳主6. 1门1浓!J;I刽起l。6 12 元水乙醉。注除科妹nljl. .本WJ!liJfI试用l均为分析纯!l化试剂,JKJ.JG I.I(T 6682规定的级点.7 设备和材料除分子生物学实A防空常规灭l油及精养设备外其他,j二要设备和材料如下a) I:j Jili冷冻肉心机.品大转速10000 ,./ mi
5、n; b) 冰衍-20C .2 C-4 C, c) )己|感主110.0Jgj d) 灭的倒挝人11,)为0.2:15MPa, 11;)111控范lililUJ为105 C - J 35 C, c) 旋涡混匀r.,M;转i韭为2800 r/ min, f) PCR扩用仪1/,1.豆范1l14C-99 C.控混有H立 士0.25C, g) ll!.J仪:韩trlfJuJ在5V- 600 V,输IIf流2mA- 200 mA, h) 串,fj快成像仪,302nm紫外透!照仪、自llyt臼光光源、l二l光转换板、uv千涉泌光il、机梳头像捕捉软jl、佟|你分析软斗,。不锈钢小)TIJ(lI日科手术小
6、);j) 做tr(ifi州移rU?,2.51.、101. 、2011.、 1001.、200,1.、IIII L; k) rl心管O.2 ml.( PCR ,)、1.5 ml.,2 ml., B 鉴定步骤8 1 样品采集与处理ffl不锈钢小刀土&lIfi科手术小刀切l仅*.111.病症组织约0.3g,JIj元jf泌纸l吸干水分.JII iU级研院.罕1世J二状。8. 2 基因组DNA的提取8.2.1将|向吁仰俯f!脐轩后的!巾V怦扩样f.r,川IA山川川l叫圳.lll刊l0111川11刊】11门川n、-60 m刊t川n、, 12 000 r/ min .t 心10 mno 8. 2. 2 11
7、1. u,j液转入新的1.5 ml.尚心竹1,川l人呼f;t;f)(的式;,l(I jI如:外J儿自;(ilt干干甘HIIJ.足10min.12 000 r/min离心10min.可(丝一次。8. 2. 3 111. I.i,j液转入:TMI1. 5 m 1. Ik心,1,JII入2衍体在HI(J);7K乙iWi屁匀,-20C下放且不少r1 h, 1 0( .12 000 r/ min ;t心10mino 8 2.4 N I.i,液岭70%乙IW说:谅。NA沉淀2次.8.2.5 ,然千;除后院!二50Vl.北j:ii水或IrisEDT八级冲向UI;I1U快板DN八,一20C冰箱XJF备川。注却
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