DB32∕T 3683-2019 猪链球菌9型PCR检测技术规程.pdf
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1、 ICS 11.220 B 41 江苏省地方标准 DB32 DB32/T 36832019 猪链球菌 9 型 PCR 检测技术规程 Technical regulation for PCR detecting Streptococcus suis Serotype 9 2019-12-03 发布 2019-12-25 实施 江苏省市场监督管理局 发布 DB32/T 36832019 I 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由江苏省农业科学院提出并归口。 本标准起草单位:江苏省农业科学院。 本标准主要起草人:倪艳秀、何孔旺、周俊明、祝昊丹、吕立新、俞正玉、王丹丹、张
2、雪寒、温立斌、李彬。 DB32/T 36832019 1 猪链球菌 9 型 PCR 检测技术规程 1 范围 本标准规定了猪链球菌9型PCR检测技术所用的仪器设备和主要试剂、引物、方法步骤、结果判定、废弃物处理和防止污染的措施等要求。 本标准适用于猪链球菌 9 型的 PCR 检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件, 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 病死及病害动物无害化处理技术规
3、范(农医发201725号) 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 猪链球菌9型 Streptococcus suis serotype 9 属于链球菌属的一种细菌,根据其荚膜多糖抗原的差异,可分为1-31、33及1/2共33个血清型。猪链球菌9型是猪链球菌的一个血清型,不仅对猪致病性很强,而且可以感染特定的人群,是一种人兽共患病病原菌。 4 仪器设备和主要试剂 4.1 仪器设备 高速离心机、水浴锅、PCR仪、核酸电泳仪、凝胶成像系统。 4.2 主要试剂 生理盐水、 超纯水、 蛋白酶K、 2 PCR Mix、 琼脂糖 (电泳级) 、 DNA分子量标准 (DL 2000 Marke
4、r) 。 5 引物 5.1 上游引物:5- GGCTACATATAATGGAAGCCC- 3。 5.2 下游引物:5- CCGAAGTATCTGGGCTACTG- 3。 6 方法步骤 6.1 样品处理 6.1.1 病料样品处理 DB32/T 36832019 2 采用差速离心法,取约 5 g 病料(肝或肺或脑组织),剪碎研磨,用 5 mL 生理盐水混悬,先 2 000 r/min 离心 2 min,去除大组织块,取上清液,后 10 000 r/min 离心 5 min,弃上清液,沉淀以 200 L 超纯水重悬,备用。 6.1.2 待检培养物样品处理 取待检液体培养物 (纯培养物或混合培养物)
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