银杏素在小鼠压力超负荷心肌肥厚中的作用研究.pdf
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1、:/心血管疾病多学科研究专题银杏素在小鼠压力超负荷心肌肥厚中的作用研究石广永 张 冰 赵 琳 陈亚武 金振晓 徐学增(空军军医大学西京医院心血管外科 陕西 西安)基金项目:国家自然科学基金青年科学基金()作者简介:石广永 硕士 住院医师 从事心脏病腔镜治疗及心肌保护研究:通信作者:徐学增:网络首发:/()摘要 目的 探究银杏素()对压力超负荷心肌肥厚小鼠的心脏保护作用 方法/小鼠(周龄)只 通过主动脉弓缩窄()建立小鼠压力超负荷心肌肥厚 随机分为手术组()、手术 组()和假手术组()手术组不做处理 手术 组于术后每日给予 治疗 假手术组经历同样手术操作 但不进行 线打结 通过小鼠心脏超声评估小
2、鼠心脏收缩功能 通过心脏超声、心脏质量与胫骨长度比值、染色和 的转录水平等评估心肌肥厚程度 通过肺脏质量与体质量比值、血清脑钠肽()水平和 的转录水平等评估术后心力衰竭程度 最后通过 染色及纤维化相关分子的转录水平评估心脏的纤维化程度 结果 显著改善了 手术引起的小鼠心脏射血分数下降()和短轴缩短率的下降()降低了 术后小鼠心脏室间隔厚度()和左心室后壁厚度()减小了心脏质量与胫骨长度比值()减小了 术后心肌细胞横截面积()及肥厚相关基因 的转录水平()显著减小了 术后小鼠肺脏质量与体质量的比值()降低了小鼠血清中 的含量()同时降低了左心室心肌组织中 的转录水平()最后 显著减轻了 术后小鼠
3、心脏纤维化程度()降低了小鼠心脏组织中纤维化相关分子 ()、()和 ()的转录水平 结论 具有改善 术后小鼠心脏功能、减轻心肌肥厚和心力衰竭以及减轻心肌纤维化的作用关键词 银杏素 压力超负荷 心肌肥厚 心脏功能中图分类号 文献标志码 ()()/()()()()()()()()()()():/()()()()()()()()心脏通过增加心肌质量来适应血压的持续升高或血容量的持续增加 这种心肌的增长被广泛地定义为心肌肥厚 当心脏承受比正常负荷更大的负荷时心肌肥厚可使心室壁压力最小化并维持收缩功能 由于心肌细胞的不可再生性 心肌肥厚通常表现为单肥厚与循环激素增加、血流动力学超载、心肌细胞损失以及收缩
4、和舒张功能降低 病理性心肌肥厚的另一个典型特征是过量细胞外基质的积累和沉积 其由疤痕组织或纤维化组成 病理性心肌肥厚将进展为心力衰竭 给社会和家庭带来沉重负担银杏在传统和西方医学中都被公认为药用植物 银杏生物活性潜力与黄酮类化合物和萜烯三内酯的存在有关 但许多其他化合物也可能具有协同作用 目前 银杏中已报道存在 种生物黄酮类化合物 其中以杏黄酮、黄酮、银杏黄酮、银杏黄酮和异银杏黄酮最为常见 已经有很多研究报道表明 银杏黄酮类物质具有抗氧化、抗癌、抗病毒、抗菌和抗炎等多种生物活性 在心血管、代谢和神经退行性疾病中具有多种潜在作用 银杏素()是银杏中一种天然无毒的双黄酮 具有抗癌、抗炎、抗微生物、
5、抗脂肪和神经保护作用 通过抑制细胞周期、诱导细胞凋亡、刺激自噬和靶向多种信号通路(如/和)来抑制癌症进展基于 在其他组织和疾病模型中的抗炎和抗氧化特性 我们推测其对压力超负荷心肌肥厚可能具有心脏保护作用 因此 本研究的目的是探究 对压力超负荷心肌肥厚小鼠的心脏保护作用 材料与方法 材料/小鼠(周龄)只 购自空军军医大学实验动物中心 所有动物操作均得到空军军医大学实验动物福利与伦理委员会批准 实验动物许可证号:(陕)购自 (美国)总 提取试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司 反转录试剂盒及定量试剂均购自北京启衡星生物科技有限公司 小麦胚芽凝集素()购自 (美国)小鼠脑钠肽()试剂盒购自武汉伊莱
6、瑞特生物科技股份有限公司 所有引物均由北京擎科生物科技股份有限公司进行合成 方法 小鼠主动脉弓缩窄手术()调节氧气流量为 /(异氟烷含量为/)后将小鼠置于麻醉诱导盒中进行麻醉诱导待小鼠完全麻醉后 将小鼠用胶带固定于操作台 剪开胸骨 用撑开器撑开 分离胸腺 暴露主动脉弓用 线穿过主动脉弓 垫上 针头 打结后抽出针头 缝合后完成手术 实验分为手术组()、手术 组()和假手术组()手术组术后正常饲养 不做处理 手术 组于术后每日通过腹腔给予 剂量 假手术组小鼠经历同样手术操作 但不进行 线打结 小动物心脏超声调节氧气流量为 /(异氟烷含量为 /)后将小鼠置于麻醉诱导盒中进行麻醉诱导 待小鼠完全麻醉后
7、 将小鼠用胶带固定 于前胸处涂抹超声耦合剂 采集胸骨旁长轴与短轴 超图像 用 软件分析计算射血分数()、短轴缩短率()、舒张末室间隔厚度、舒张末左室后壁厚度 标本收集小鼠行 后 周 通过吸入/异氟烷进行麻醉 剪断小鼠颈动脉收集动脉血 随后剪断肋骨 暴露并摘取心脏 小鼠血液常温放置 后 离心 收集血清冻存于 小鼠心脏直接冻存于 用于后续定量 或者于/多聚甲醛中固定 然后进行石蜡包埋 染色心肌组织经过多聚甲醛固定、包埋、石蜡切片及脱腊后 滴加 /硼酸钠水溶液处理后进行抗原修复 再洗涤 次 用 /进行透化处理后 于 下用 溶液过夜孵育 洗涤 次 用 二脒基苯基吲哚染色细胞核 最后于共聚焦显微镜下观察
8、并拍照 采用 软件测量心肌细胞表面积 染色心肌组织经过多聚甲醛固定、包埋、石蜡切片及脱腊后 滴加 /盐酸乙醇溶液 超纯水浸泡后滴加丽春红染色液 再依次浸泡于空军军医大学学报 年 月 第 卷第 期 :/冰醋酸水溶液、/磷钼酸水溶后滴加胺蓝染液溶液 最后将切片完全浸泡在 /冰醋酸溶液完成染色 经过乙醇 二甲苯溶液脱水 待二甲苯晾干 用中性树胶封片进行拍照 定量 心肌细胞经过处理后 洗涤 次加入 按照总 提取试剂盒说明书进行总 提取 经过 定量后 按照反转录试剂盒说明书进行反转录 反转录结束后 按照定量试剂盒进行定量 循环为:、个循环 用 方法定量 表达水平 统计学分析数值以 表示 多组间采用单因素
9、方差分析对数据进行统计分析 表示差异有统计学意义 结果 具有改善 小鼠心脏功能的作用为了检测 对病理性心肌肥厚小鼠心脏功能的影响 我们对小鼠进行 手术并通过腹腔给予 处理 术后 周各组小鼠心脏超声如图 所示 术后 周 手术组小鼠心脏 降低了()给予 治疗后 手术组小鼠心脏 升高了 (图)手术组小鼠心脏 比假手术组下降了 ()给予 治疗后 手术 组小鼠心脏 升高了 (图)这提示 具有改善 小鼠心脏功能的作用:术后 周小鼠心脏超声典型图:术后 周小鼠心脏 统计:术后 周小鼠心脏 统计 :银杏素:射血分数:短轴缩短率图 对 小鼠心脏功能的影响 具有减轻 小鼠心肌肥厚的作用为了明确 对 小鼠心肌肥厚的
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