DB15∕T 2072-2021 动物垫料中大肠埃希氏菌 0157:H7-NM 检测.pdf
《DB15∕T 2072-2021 动物垫料中大肠埃希氏菌 0157:H7-NM 检测.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《DB15∕T 2072-2021 动物垫料中大肠埃希氏菌 0157:H7-NM 检测.pdf(12页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、 ICS 07.100.01 CCS B 41 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 20722021 动物垫料中大肠埃希氏菌 O157: H7/NM 检测 Detection of Escherichia coli O157: H7/NM in animal bedding 2021-01-25 发布 2021-02-25 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 20722021 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 本文件由中华人民共和国呼和浩特海关提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国呼和浩
2、特海关、二连浩特市疾病预防控制中心、内蒙古自治区农牧业科学院。 本文件主要起草人:赵治国、崔强、郭文丽、延涵、王海艳、陈林军、敖威华、韩祎陟、靳木子、罗晓平、李军燕。 DB15/T 20722021 1 动物垫料中大肠埃希氏菌 O157:H7/NM 检测 1 范围 本文件规定了动物垫料中大肠埃希氏菌O157: H7/NM的定性检测方法、 设备和材料、 培养基和试剂。 本文件适用于动物垫料中大肠埃希氏菌O157:H7/NM定性检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中, 注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,
3、其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 GB/T 33682 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴别微生物方法通则 SN/T 1538.1 培养基制备指南 第1部分:实验室培养基制备质量保证通则 SN/T 1538.2 培养基制备指南 第2部分:培养基性能测试实用指南 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 动物垫料 animal bedding 用于吸收动物排泄物,使动物保持舒适生活环境的铺垫物。 注: 包括动物笼内非直接与动物机体接触的铺垫物。 4 设备和材料 4.1 设备和材料
4、 4.2 恒温培养箱:36 1 。 4.3 均质器。 4.4 振荡器。 4.5 电子天平:感量 0.1 g,0.0001 g。 4.6 全自动微生物生化鉴定系统。 4.7 全自动微生物生化鉴定系统。 4.8 酶联免疫分析仪。 4.9 二级生物安全柜。 4.10 pH 计。 4.11 生物显微镜。 DB15/T 20722021 2 4.12 微量移液器。 4.13 无菌锥形瓶:容量 500 mL,250 mL。 4.14 无菌吸管:1 mL(具 0.01 mL 刻度) 、10 mL(具 0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸头。 4.15 无菌培养皿:15 mm90 mm。 4.16 无菌棉签。
5、 4.17 无菌镊子。 4.18 无菌剪刀。 4.19 无菌勺。 4.20 无菌玻片。 4.21 无菌接种环。 5 培养基和试剂 5.1 实验用水符合 GB/T 6682 的要求。 5.2 改良 EC 肉汤(mEC+n) :见附录 A 中 A.2。 5.3 改良山梨醇麦康凯琼脂(CT-SMAC) :见附录 A 中 A.3。 5.4 三糖铁琼脂(TSI) :见附录 A 中 A.4。 5.5 营养琼脂:见附录 A 中 A.5。 5.6 半固体琼脂:见附录 A 中 A.6。 5.7 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-MUG(MUG-LST) :见附录 A 中 A.7。 5.8 氧化酶:见附录 A 中 A.8
6、。 5.9 革兰氏染液:见附录 A 中 A.9。 5.10 大肠埃希氏菌 O157 显色培养基。 5.11 大肠埃希氏菌 O157 和 H7 诊断血清。 5.12 生化鉴定试剂盒。 5.13 革兰氏阴性菌生化鉴定卡。 5.14 飞行质谱仪靶板。 5.15 大肠埃希氏菌 O157:H7/NM ATCC 35150 或等效标准菌株。 5.16 EHEC 肠道出血性大肠埃希氏菌 ATCC 35130 或等效菌株。 5.17 大肠埃希氏菌株 ATCC 25922 或等效标准菌株。 6 检验程序 大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验流程序见图1。 DB15/T 20722021 3 361,18 h24
7、 h 361,18 h24 h 图1 大肠埃希氏菌 O157:H7/NM 检验流程 样品制备 检样 25 g 或 25 cm2样液+225 mL mEC+n 肉汤 CT-SMAC 平板和大肠埃希氏菌 O157 显色培养基平板 挑取可疑菌落 510 个接种 TSI,氧化酶阴性,革兰氏阴性杆菌 MUG-LST 阴性 阴性 非 E.coil O157 血清学实验 生化实验或辅助鉴定 结果报告 DB15/T 20722021 4 7 操作步骤 7.1 取样 7.1.1 取样原则 应遵循随机性、代表性的原则。取样过程遵循无菌操作程序,防止一切可能的外来污染。 7.1.2 样品处理 7.1.2.1 颗粒状
8、或粉末样品 对送检样品包装内不同部位样品进行随机多点取样至少250 g,充分混匀后称取25 g颗粒状或粉末状垫料样品,加入225 mL mEC+n肉汤,充分振摇或均质1 min2 min,置361培养18 h24 h,进行预增菌。 7.1.2.2 平面样品 无菌操作将灭菌规格板(5 cm5 cm)放在平面垫料表面,用浸有无菌稀释液(磷酸缓冲液或生理盐水)的棉拭子,在规格板内来回均匀涂抹整个方格 3 次,并随之转动棉拭子,然后用灭菌剪刀剪去棉拭子与手接触的部分,将棉拭子头置入装有 25 mL无菌稀释液的无菌锥形瓶中,根据样品面积大小重复取样14个规格板面积,相应地将棉拭子头置入25 mL100
9、mL的无菌稀释液中,充分振摇制成样品原液(1 mL原液对应的样品面积为1 cm2),取样量见表1。取25 mL样品原液加入225 mL mEC+n肉汤,充分振摇或均质1 min2 min,置361培养18 h24 h,进行预增菌。 表1 不同面积平面类垫料样品取样量 样品面积 m2 取样量 cm2 规格板数 小于0.25(含) 25 1 0.250.5(含) 50 2 0.50.75(含) 75 3 大于0.75 100 4 7.2 分离培养 分别用接种环取增菌的mEC+n肉汤增菌液1环,划线接种于一个CT-SMAC平板和一个大肠埃希氏菌O157显色培养基平板,于36 1 培养18 h24 h
10、,观察各个平板上生长的菌落,根据菌落形态初步判定典型和可疑菌落,大肠埃希氏菌O157在各种选择性琼脂平板上的菌落特征见表2。 根据菌落形态挑取510个典型菌落或可疑菌落(少于5个时,全部挑取),划线接种于营养琼脂平板,36 1 培养18 h24 h。 表2 大肠埃希氏菌 O157 在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性琼脂平板 大肠埃希氏菌O157菌落形态 CT-SMAC平板 菌落为圆形、光滑、较小的无色菌落,中心呈现较暗的灰褐色。 大肠埃希氏菌O157显色培养基 依据显色培养基的说明书判定。 DB15/T 20722021 5 7.3 鉴定 7.3.1 革兰氏染色镜检 大肠埃希氏菌O157
11、:H7/NM为革兰氏阴性杆菌,无芽孢,有鞭毛,动力试验结果呈阳性。其鞭毛抗原丢失,动力试验结果呈阴性。 7.3.2 生化鉴定 挑取纯培养的菌落进行大肠埃希氏菌O157生化鉴定,在CT-SMAC和大肠埃希氏菌O157显色琼脂平板上分别挑取510个可疑菌落,分别接种TSI琼脂,同时接种MUG-LST肉汤,并用大肠埃希氏菌株(ATCC 25922或等效标准菌株)做阳性对照和肠道出血性大肠埃希氏菌(ATCC 35130或等效标准菌株)做阴性对照,于36 1 培养18 h24 h。必要时进行氧化酶试验。 在TSI琼脂中,典型菌株为斜面与底层均呈黄色,产气或不产气,不产生硫化氢(H2S)。置MUG-LST
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- DB15T 2072-2021 动物垫料中大肠埃希氏菌 0157:H7-NM 检测 DB15 2072 2021 动物 垫料中 大肠 埃希氏菌 0157 H7 NM
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【clo****rst】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【clo****rst】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。