眼镜蛇粉对小鼠H22肝癌细胞移植瘤的抑制作用及免疫功能的影响.pdf
《眼镜蛇粉对小鼠H22肝癌细胞移植瘤的抑制作用及免疫功能的影响.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《眼镜蛇粉对小鼠H22肝癌细胞移植瘤的抑制作用及免疫功能的影响.pdf(4页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、目的 观察眼镜蛇粉及其水提液对小鼠H22肝癌细胞移植瘤的抑制作用以及小鼠免疫功能的影响。方法 取60只小鼠随机分成模型组、环磷酰胺组(0.015 g/kg)和蛇粉混悬液高剂量组(3.75 g/kg)、低剂量组(1.88 g/kg)以及蛇粉水提液高剂量组(20 g/kg)、低剂量组(10 g/kg),每组10只;通过小鼠右侧腋下无菌接种H22肝癌细胞悬液建立小鼠H22肝癌细胞移植瘤模型,灌胃给药结束后取出瘤块称重,计算肿瘤抑制率。另取72只小鼠随机分成空白组、模型组和蛇粉混悬液高剂量组、低剂量组以及蛇粉水提液高剂量组、低剂量组(药物剂量同上);除空白组外,各组小鼠隔天腹腔注射环磷酰胺溶液(50
2、mg/kg)建立免疫抑制模型,灌胃给药结束后眼眶静脉丛取血测定吸光度值,取肝脏和脾脏称重,按公式计算免疫器官指数、胸腺指数、碳廓清指数和吞噬指数。结果 通过比较,蛇粉混悬液高、低剂量,蛇粉水提液高、低剂量均能显著抑制肝癌细胞移植瘤的生长(P0.01或P0.05),并呈现一定量效关系,肿瘤抑制率分别为69.06%、49.81%、56.42%、41.51%;蛇粉混悬液高剂量、蛇粉水提液高剂量均能显著提高免疫抑制小鼠胸腺指数(P0.01或P0.05);蛇粉混悬液高剂量,蛇粉水提液高、低剂量均能显著提高免疫抑制小鼠巨噬细胞碳廓清指数(P0.01或P0.05);蛇粉混悬液高、低剂量,蛇粉水提液高、低剂量
3、均能显著提高免疫抑制小鼠巨噬细胞吞噬指数(P0.05)。结论 眼镜蛇粉及蛇粉水提液对小鼠H22肝癌细胞移植瘤有抑制作用,与增强小鼠免疫反应具有相关性。关键词:眼镜蛇;肝癌;肿瘤抑制;免疫功能中图分类号:R285.5文献标识码:A文章编号:2095-4441(2023)04-0058-04引文格式:张文涛,邱华,禤继斌,等.眼镜蛇粉对小鼠H22肝癌细胞移植瘤的抑制作用及免疫功能的影响J.广西中医药大学学报,2023,26(4):58-61.收稿日期:2023-03-06第一作者简介:张文涛,硕士,实验师,研究方向:中药抗肿瘤*通信作者:黄丽贞,女,硕士,高级实验师,研究方向:中药药理学;E-ma
4、il:肝癌的发生率在我国全部恶性肿瘤中位居第 4位,致死率高居第2位1。临床上针对癌症治疗以手术、放疗、化疗等方法为主,随着我国中医药的不断发展,中药及中药有效成分在抗肿瘤方面的作用被证实及其作用机理被阐明,中药治疗联合西医治疗起到协同增效作用,在肿瘤治疗领域得到广泛认可2-3。眼镜蛇 Naja naja(Linnaeus)具有通经络、祛风湿、强筋骨的功效,可用于治疗风湿关节痛、脚气病等4。研究表明,眼镜蛇毒具有抗肿瘤5、抗炎镇痛6、影响凝血功能7、体外抑菌8等药理活性,蛇胆具有镇咳祛痰9、抗菌消炎10等药理活性,但眼镜蛇其它部位药理作用未见相关报道。因此本文将通过现代药理学研究方法对眼镜蛇粉
5、进行抗肝癌作用及对免疫功能影响的研究,为眼镜蛇药用价值的开发提供科学依据。1材料1.1动物SPF级昆明种(KM)小鼠,体质量1822 g,雌雄各半,由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供,生产许可证号:SCXK(湘)2019-0004。广西中医 582023 年 第 26 卷 第 4 期广西中医药大学学报药大学实验动物中心资质号:SYXK桂2019-0001。饲养环境:室温2030,相对湿度60%80%。1.2药物眼镜蛇粉由广西金圣堂生物医药科技有限公司提供,为眼镜蛇科动物眼镜蛇Naja naja(Linnaeus)除去内脏、鳞片和头部的干蛇段粉碎而成,将蛇粉制备成超微细粉,用纯水配成浓度为 0
6、.25 g/ml、0.125 g/ml的混悬液。另取眼镜蛇粉200 g,加15倍纯净水浸泡2 h,加热煮沸2 h,过滤,滤渣加10倍量水,加热煮沸1 h,过滤,合并滤液,浓缩至生药量为1 g/ml、0.5 g/ml的水提液。1.3细胞株H22细胞购于江苏凯基生物技术股份有限公司,加入含10%胎牛血清的RPMI1640培养基,在细胞培养箱中培养。1.4试剂胎牛血清(浙江天杭生物科技股份有限公司,批号:21100201);RPMI1640培养基(江苏凯基生物技术股份有限公司,批号:20220106);PBS缓冲液(江苏凯基生物技术股份有限公司,批号:20220125);环磷酰胺一水合物(上海麦克林
7、生化科技有限公司,批号:C13640176);印度墨汁(北京索莱宝生物科技有限公司,批号:1224D021);无水碳酸钠(国药集团化学试剂有限公司,批号:20160516)。1.5仪器洁净工作台(苏净集团苏州安泰空气技术有限公司,型号:SW-CJ-1F);倒置显微镜(Nikon CorPoration,型号:Model EcliPse Ts2);低速台式离心机(湘仪离心机仪器有限公司,型号:TDZ4-WS);二氧化碳培养箱(New Srunswick,型号:Galaxy 170S);电子天平赛多利斯科学仪器(北京)有限公司,型号:BSA224S;多功能酶标仪(瑞士 TECAN 公司,型号:In
8、finite M200 Pro)。2实验方法2.1H22肝癌移植瘤模型的建立将H22肝癌细胞株接种于小鼠腹腔内,7 d后取生长良好的H22肝癌腹水型荷瘤小鼠,将其颈椎脱臼处死,在无菌条件下抽取乳白色腹水,在显微镜下进行细胞计数,用生理盐水稀释成1.0107CFU/ml。以每只小鼠0.2 ml接种于小鼠腋窝皮下,制备H22肝癌移植瘤模型11。2.2肿瘤抑制作用取60只小鼠随机分成6组,即模型组、环磷酰胺组(0.015 g/kg)、蛇粉混悬液高剂量组(3.75 g/kg)、蛇粉混悬液低剂量组(1.88 g/kg)、蛇粉水提液高剂量组(20 g/kg)、蛇粉水提液低剂量组(10 g/kg),每组10
9、只,雌雄各半。除模型组及环磷酰胺组灌胃给予生理盐水(NS)外,各组动物空腹灌胃给予相应药物,给药容积为 15 ml/kg。每天灌胃给药 1次,连续21 d。第22 d按2.1项方法制备H22肝癌移植瘤模型。接种后,环磷酰胺组腹腔注射环磷酰胺溶液(浓度为0.75 g/L,给药体积为20 ml/kg),其余各组均腹腔注射等剂量生理盐水,每日1次,同时各组均按上述方法继续灌胃10 d,末次给药后第2 d,小鼠予颈椎脱臼处死,迅速解剖取出瘤块称重,计算抑瘤率。肿瘤抑制率(%)=(模型组平均瘤重-药物组平均瘤重)/模型组平均瘤重100%。2.3对小鼠免疫器官指数的影响取72只小鼠随机分为空白组、模型组、
10、蛇粉混悬液高剂量组(3.75 g/kg)、蛇粉混悬液低剂量组(1.88 g/kg)、蛇粉水提液高剂量组(20 g/kg)、蛇粉水提液低剂量组(10 g/kg),每组12只,雌雄各半。各组灌胃给药,空白组、模型组灌胃给予NS,其余各药物组灌胃给予相应的药物,给药容积为20 ml/kg,每天1次,连续21 d,第22 d开始,除空白组外,其余各组小鼠隔天腹腔注射环磷酰胺溶液建立免疫抑制模型,剂量为50 mg/kg,注射容积为10 ml/kg,空白组按同等条件注射 NS,同时各组均继续灌胃给药,持续7 d。末次给药1 h后,各鼠称重后处死,剪取脾脏及胸腺称重,按公式计算免疫器官指数。免疫器官指数:脾
11、脏指数=脾脏质量(mg)/体质量(g);胸腺指数=胸腺质量(mg)/体质量(g)。2.4对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响小鼠分组与给药方法同2.3项,末次给药1 h后,各小鼠尾静脉注入 10%印度墨汁(10 ml/kg),注入墨汁后 2 min(t1)、10 min(t2)于小鼠眼眶静脉丛取血,用移液枪吸取20 l加到2 ml 0.1%的Na2CO3溶液中混匀,于600 nm处测定吸光度值(OD),取血后立即处死小鼠,取肝脏和脾脏称重,按公式计算碳廓清指数(K)和吞噬指数()。K=(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1);=体质量/(肝质量+脾质量)K1/3。2.5统计学处理数据采用SPSS 2
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 眼镜蛇 小鼠 H_ 2822 29 肝癌 细胞 移植 抑制 作用 免疫 功能 影响
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。