四环素降低致倦库蚊共生Wolbachia密度方法的建立及效果评价.pdf
《四环素降低致倦库蚊共生Wolbachia密度方法的建立及效果评价.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《四环素降低致倦库蚊共生Wolbachia密度方法的建立及效果评价.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、第 卷第 期 年 月寄生虫与医学昆虫学报.收稿日期:通信作者:/.四环素降低致倦库蚊共生 密度方法的建立及效果评价吕慧鑫 姜玉庭 郭晓霞 倪 孟 邢 丹赵彤言 张灵玲(.福建农林大学生命科学学院 福州 .军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所 病原微生物生物安全国家重点实验室 媒介生物危害和自然疫源性疾病北京市重点实验室 北京)摘要 胞内共生菌 在昆虫生理生殖和天然免疫方面发挥着重要作用 蚊虫体内的 密度与其抗病毒作用有很强的相关关系 本研究建立了一种利用四环素处理幼虫降低致倦库蚊共生 密度的方法 并采用实时荧光定量 进行了效果评估 结果显示 使用 /四环素处理致倦库蚊海口株和温州株 处理
2、后 密度中位数分别下降 和 倍 卵巢及其余组织的 密度均下降至 以下 其中 卵巢中 密度下降 倍 可见 /四环素处理幼虫能显著降低蚊虫体内 密度 为后续清除、探究 对致倦库蚊感染和传播病毒的影响提供了技术基础关键词 致倦库蚊 四环素 沃尔巴克氏体 (.)./.吕慧鑫等:四环素降低致倦库蚊共生 密度方法的建立及效果评价 沃尔巴克氏体 是常见的昆虫细胞内共生菌 隶属于变形菌门变形菌纲 亚门立克次体目立克次体科沃尔巴克氏体属 为革兰氏阴性菌 该菌于 年在尖音库蚊 的卵巢内发现(.)广泛分布于无脊椎动物体内 超过 的节肢动物自然感染沃尔巴克氏体(.)目前 已分成 个亚组(.)节肢动物体内感染 最常见的
3、是 和 亚组 丝虫体内则主要为 和 亚组(.)对宿主昆虫具有重要作用 一方面 不但能改变昆虫适应环境的能力还能通过胞质不相容、孤雌生殖、雌性化或者杀雄作用等多种方式调控昆虫生殖 另一方面 可以调控媒介昆虫免疫系统 进而影响其 对 部 分 病 毒 的 传 播 能 力 研 究 发 现 能 够 增 强 黑 腹 果 蝇 抵抗 病毒的能力(.)在蚊虫体内 通过多种方式影响病毒的复制从而降低蚊虫对登革病毒()、基 孔 肯 雅 病 毒()(.)、黄热病毒()(.)、寨卡病毒()(.)和西尼罗病毒()(.)等的传播能力 影响蚊虫媒介效能的机制有多种例如:通过激活宿主 途径介导抗氧化剂的表达应对氧化胁迫 进而产
4、生多种抗菌肽、抑制 增殖(.)同时 通过在宿主体内与病毒等病原体竞争营养物质 也起到了抑制病原体生长的作用(.)此 外 通过上调甲基转移酶等其他宿主因子抑制 病毒复制(.)可见 对于蚊虫传播虫媒病毒的影响机制是复杂的 可能存在多种机制共同作用 进一步阐明 介导的病毒抑制机制有利于深入了解 在病毒传播中所起作用 从而为蚊媒和蚊媒病防控提供科学依据研究表明 昆虫体内的 密度与其抗病毒效应有很强的相关关系 拟果蝇抗病毒株中 密度明显高于敏感株(.)同样 蚊虫与蚊虫细胞中 密度也同蚊虫及其细胞的抗病毒保护作用关系密切(.)本研究利用四环素处理幼虫 建立了一种降低致倦库蚊体内自然感染 密度的方法 确定了
5、最佳的四环素处理浓度 并对处理效果进行了评估 为明确 对病毒媒介效能及蚊虫繁殖生理提供技术基础 材料与方法 蚊虫 致倦库蚊温州株及海口株于 年 月分别采自海南海口及浙江温州 于养虫室连续常规养殖 温度()相对湿度 光照 黑暗 主要仪器和试剂 实时荧光定量 仪()、英莱顿 位核酸提取仪(上海英莱盾生物技术有 限 公 司)、耶 拿仪()、凝胶成像系统()四环素(宝日医生物技术(北京)有限公司)(赛默飞世尔科技(中国)有限公司).、.、.、()、均为宝日医生物技术(北京)有限公司 致倦库蚊携带 的 检测 取新羽化致倦库蚊海口株、温州株各 只单只蚊虫麻醉后置于 管中 随后加入 颗研磨磁珠和 裂解液 于
6、 的条件下研磨 然后根据 提取试剂盒的说明书进行蚊虫基因组的提取 获取的基因组 通过紫外分光光度计检测浓度和纯度 并将其作为 模 板 使 用 ()表 面 蛋 白()基因引物进行 扩 增 基 因 引 物 序 列:上 游 引 物()序列为 下游引物()序列为寄生虫与医学昆虫学报第 卷第 期 产物大小为 体系 :预混液()无核酶水()模板()上下游引物各 反应程序:预变性 变性 退火 延伸 个循环 延长 反应产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定 不 同 浓 度 四 环 素 处 理 致 倦 库 蚊 体 内 以海口株为代表 从卵杯中取出适量的致倦库蚊海口株卵筏 待其卵孵化后(约 )进行分盘养殖 将幼虫分为 盘 每
7、盘数量为 条 其中 盘设置为对照组 另外 盘分别加入不同浓度四环素处理 四环素终浓度分别为、/每 更换一次固定浓度的四环素隔夜水保证其处理浓度并记录幼虫死亡率 至蚊虫龄时计算幼虫死亡率 根据死亡率筛选合适的四环素处理浓度 饲养条件与 相同用上述筛选的最佳四环素处理浓度处理致倦库蚊海口株、温州株幼虫及成虫 两株致倦库蚊每株蚊虫养殖 盘 分别为四环素处理组和对照组 幼虫阶段处理方法同上 成虫饲喂含有相应浓度四环素的 糖水 四环素处理致倦库蚊体内 的效果评估 及 核 糖 体 蛋 白 ()基因标准曲线的绘制:取四环素处理组及对照组羽化第 天的雌蚊进行实验 海口株对照组、海口株处理组、温州株对照组、温州
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 四环素 降低 致倦库蚊 共生 Wolbachia 密度 方法 建立 效果 评价
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。