晚期NSCLC放疗前后血清circPVT1和miR-486-5p水平变化及临床意义.pdf
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1、Tianjin Med J,September 2023,Vol.51 No.9晚期NSCLC放疗前后血清circPVT1和miR-486-5p水平变化及临床意义张天伟,张金标,张燕,明汇,张鹏,聂东摘要:目的探讨晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者放疗前后血清环状 RNA 浆细胞瘤转化迁移基因 1(circPVT1)、微小 RNA-486-5p(miR-486-5p)水平变化及对放疗疗效的评估价值。方法研究纳入 137 例晚期NSCLC 患者作为 NSCLC 组,另选取健康体检者 140 例作为对照组。采用实时荧光定量 PCR(qPCR)检测血清circPVT1、miR-486-5p表达水平,
2、比较放疗前后及不同放疗疗效患者血清circPVT1和miR-486-5p水平;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清circPVT1、miR-486-5p水平对放疗疗效的诊断价值。结果与对照组相比,NSCLC组放疗前血清circPVT1表达水平升高,miR-486-5p表达水平降低(P0.05);经Targetscan在线分析显示,circPVT1与miR-486-5p有靶向关系;鳞癌与腺癌NSCLC患者放疗前血清circPVT1、miR-486-5p表达水平比较差异无统计学意义(P0.05);与TNM分期期患者相比,期患者血清circPVT1表达水平升高,miR-486-5p表达水平降低(P0
3、.05);与放疗前相比,放疗后患者血清circPVT1表达水平降低,miR-486-5p表达水平升高(P0.05)。与放疗有效组相比,无效组放疗前和放疗后血清circPVT1表达水平升高,miR-486-5p表达水平降低(P0.05);与放疗前相比,放疗有效组和无效组在放疗后均显示血清circPVT1水平降低,而miR-486-5p水平升高(P0.01)。血清circPVT1、miR-486-5p联合诊断放疗无效的AUC为0.918(95%CI:0.8590.958),敏感度为80.65%,特异度为88.00%,联合诊断效能优于单独诊断。结论血清circPVT1、miR-486-5p水平对晚期
4、NSCLC放疗疗效有一定评估价值。关键词:癌,非小细胞肺;RNA,环状;化放疗;环状RNA浆细胞瘤转化迁移基因1;微小RNA-486-5p中图分类号:R734.2文献标志码:ADOI:10.11958/20230346Changes and clinical significance of serum circPVT1 and miR-486-5p levels before and afterradiotherapy for advanced NSCLCZHANG Tianwei,ZHANG Jinbiao,ZHANG Yan,MING Hui,ZHANG Peng,NIE DongDepa
5、rtment of Tumor Blood Radiotherapy,Zibo 148th Hospital,Zibo 255300,ChinaCorresponding AuthorE-mail:Abstract:ObjectiveTo investigate changes of serum levels of circulating RNA plasmacytoma variant translocation 1(circPVT1)and microRNA-486-5p(miR-486-5p)before and after radiotherapy in patients with a
6、dvanced non-small celllung cancer(NSCLC)and their evaluation value for radiotherapy efficacy.MethodsA total of 137 patients with advancedNSCLC were selected as the NSCLC group,and 140 health examination personnel in our hospital were selected as the controlgroup.Real-time fluorescence quantitative P
7、CR(RT-qPCR)was applied to detect serum expression levels of circPVT1 andmiR-486-5p.Serum levels of circPVT1 and miR-486-5p before and after radiotherapy were compared.Receiver operatingcharacteristic(ROC)curve was applied to analyze the diagnostic value of serum circPVT1 and miR-486-5p levels forrad
8、iotherapy efficacy.ResultsCompared with the control group,the serum expression level of circPVT1 was obviouslyhigher before radiotherapy in the NSCLC group,and the expression level of miR-486-5p was obviously lower(P0.05).According to Targetscan online analysis,circPVT1 had a targeted relationship w
9、ith miR-486-5p.There were no significantdifferences in serum expression levels of circPVT1 and miR-486-5p before radiotherapy between patients with squamouscell carcinoma and adenocarcinoma NSCLC(P0.05).Compared with TNM stage group,the serum expression level ofcircPVT1 was obviously higher in patie
10、nts with stage IV NSCLC,and serum expression level of miR-486-5p was obviouslylower(P0.05).The serum expression level of circPVT1 was obviously lower in patients after radiotherapy than that beforeradiotherapy,and the expression level of miR-486-5p was obviously higher(P0.05).Compared with the effec
11、tiveradiotherapy group,the serum expression level of circPVT1 was increased and the expression level of miR-486-5p wasdecreased before and after radiotherapy in the ineffective group(P0.05).Compared with before radiotherapy,both theeffective and ineffective radiotherapy groups showed a decreased ser
12、um circPVT1 level and an increased miR-486-5p levelafter radiotherapy(P0.05).The AUC(95%CI:0.859-0.958)of combined diagnosis of serum circPVT1 and miR-486-5p作者单位:淄博一四八医院肿瘤血液放疗科(邮编255300)作者简介:张天伟(1983),男,主治医师,主要从事肿瘤放射治疗方面研究。E-mail:通信作者E-mail:临床研究998天津医药 2023 年 9 月第 51 卷第 9 期非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌的主要病理类型,除少
13、数早期患者可通过手术治疗外,多数患者采用放疗、化疗或两者相结合的治疗方式。虽然NSCLC的治疗取得一定进步,但患者预后存在较大差异,因此寻找与预后相关的分子标志物对临床指导治疗具有重要意义。环状RNA浆细胞瘤转化迁移基因1(circPVT1)是一种环状RNA,在肺癌、鼻咽癌等多种肿瘤中呈高表达,其通过调控靶基因表达,促进肿瘤生长与转移1-2。研究显示,在NSCLC细胞中,沉默circPVT1表达可通过上调miR-1208表达增强 NSCLC 细胞的放射敏感性3,提示 circPVT1 与NSCLC的放疗有关。经Targetscan在线分析显示,circPVT1 与 miR-486-5p 有靶向
14、结合位点,miR-486-5p 在 NSCLC 中呈低表达,发挥抑癌基因的作用4。研究显示,大蒜素通过上调 miR-486-5p 表达,抑制肺癌细胞增殖、侵袭,增强细胞对X线的敏感 性5。本 研 究 探 讨 circPVT1、miR-486-5p 与NSCLC 放疗疗效的相关性,为 NSCLC 的治疗提供参考。1对象与方法1.1研究对象选择2020年9月2022年6月在淄博一四八医院进行治疗的137例晚期NSCLC患者作为NSCLC组,其中男83例,女54例,年龄4275岁,平均(57.568.05)岁,病理类型腺癌75例,鳞癌62例,根据国际抗癌联盟(UICC)第8版肺癌TNM分期,期81例
15、,期56例。纳入标准:(1)患者均经病理诊断为原发性NSCLC,TNM分期期。(2)不符合手术治疗指征,无放疗禁忌证。(3)入组前1个月内未接受放化疗及免疫治疗。排除标准:(1)合并其他恶性肿瘤患者。(2)严重器质性疾病患者。(3)重度贫血、自身免疫性疾病患者。(4)精神疾病或认知障碍者。选择同期在本院健康体检者140例作为对照组,其中男77例,女63例,年龄4578岁,平均(58.3410.05)岁。2组性别(c2=0.885)、年龄(t=0.715)比较差异无统计学意义(P0.05)。本研究通过医院伦理委员会批准(伦理号:ysbyy202316)。1.2方法1.2.1治疗采用新华医疗器械有
16、限公司的医用电子直线加速器(型号:600E)进行放疗,定位CT为国产64排螺旋CT,采用常规放疗方案,按照肿瘤靶区(GTV)、临床靶区(CTV)及计划靶区(PTV)设置35个照射区,放射源为6 MV X线,每次23 Gy,每周5次,放疗周期46周,总剂量6070 Gy,放疗结束后观察4周评价治疗效果。1.2.2疗效评估参照实体瘤疗效评价标准RECIST指南,分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、疾病稳定(SD)与疾病进展(PD);有效=CR+PR。1.2.3实时荧光定量PCR(qPCR)检测血清circPVT1、miR-486-5p表达采集患者放疗前及放疗后 4 周空腹静脉血5 mL,对照组
17、采集体检当天空腹静脉血5 mL,3 000g离心20 min,分离血清,-70 冰箱保存。使用Trizol试剂(北京百奥莱博科技有限公司)提取血清总 RNA,并用 PrimeScriptRT-PCR试剂盒(日本TaKaRa公司公司)反转录。使用分光光度计分析RNA浓度与纯度后,取1 g RNA使用qPCR检测试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)进行PCR扩增,反应体系 50 L,其中 Taq/RTase Mix 2 L,2One Step RT-PCRBuffer 25 L,上、下游引物(10 mol/L)各1 L,加双蒸水至50 L。反应条件:45 反转录30 min,94 预变性2 min;9
18、4 变性 30 s,60 退火 30 s,72 延伸 30 s,35 个循环;72 终延伸5 min。circPVT1、miR-486-5p及内参引物购自生工生物工程(上海)股份有限公司。circPVT1引物:上游5-GGTTCCACCAGCGTTATTC-3,下游 5-CAACTTCCTTTGGGTCTCC-3;miR-486-5p引物:上游5-ACACTCCAGCTGGGTCCTGTACTGAGCTGCCCCGAG-3,下游5-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3;GAPDH 引物:上游 5-GAGTCAACGGATTTGGTCGTT-3,下游5-TTGATTTTGGAGGGATCTC
19、G-3;U6引物:上游5-CTCGCTTCGGCAGCACAT-3,下游5-TTTGCGTGTCATCCTTGCG-3。PCR 反应结束后,分别以GAPDH、U6为内参,采用2-Ct法计算circPVT1、miR-486-5p相对表达量。1.3统计学方法采用SPSS 25.0软件进行数据分析,实验数据符合正态分布的用xs表示,2组间比较采用独立样本t检验,配对样本采用配对t检验;计数资料使用例(%)表示,组间比较采用2检验;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清circPVT1、miR-486-5p水平对放疗疗效的诊断价值。检验水准=0.05。2结果2.1对照组与 NSCLC 患者血清 circ
20、PVT1、miR-486-5p表达水平比较与对照组比较,NSCLC组放疗前血清circPVT1表达水平显著升高,miR-486-5p表达水平显著降低(P0.01)。与放疗前比较,放疗后患者血清 circPVT1 表达水平降低(P0.01),miR-486-5p表达水平升高(P0.01)。见表1。2.2circPVT1 与 miR-486-5p 靶 向 关 系经Targetscan 在线分析显示,circPVT1 与 miR-486-5p具有靶向关系,见图1。was 0.918,the sensitivity was 80.65%and the specificity was 88.00%.Th
21、e combined diagnosis was better than singlediagnosis(Z=2.06,2.024,P0.05).ConclusionSerum levels of circPVT1 and miR-486-5p have certain value inevaluating the efficacy of radiotherapy for advanced NSCLC.Key words:carcinoma,non-small-cell lung;RNA,circular;chemoradiotherapy;cyclic RNA plasmacytoma va
22、rianttranslocation 1;micro RNA-486-5p999Tianjin Med J,September 2023,Vol.51 No.92.3NSCLC患者放疗前不同病理类型与分期血清circPVT1、miR-486-5p表达水平比较鳞癌与腺癌NSCLC患者放疗前血清circPVT1和miR-486-5p表达水平比较差异无统计学意义(P0.05);与TNM期患者比较,期患者血清circPVT1表达水平升高,miR-486-5p表达水平降低(P0.01),见表2。2.4NSCLC放疗不同疗效血清circPVT1、miR-486-5p 表达水平比较137 例患者中,CR 患
23、者 3 例(2.2%),PR 患 者 72 例(52.6%),SD 患 者 18 例(13.1%),PD患者44例(32.1%),放疗近期总有效患者75例(54.7%),无效患者62例(45.3%)。与放疗有效组相比,无效组放疗前和放疗后血清circPVT1表达水平升高,miR-486-5p 表达水平降低(P0.05);与放疗前相比,放疗后的有效组和无效组中血清circPVT1表达水平降低,miR-486-5p表达水平升高(P0.05),见表3。2.5放疗前血清circPVT1、miR-486-5p水平对放疗疗效的诊断价值放疗前血清circPVT1、miR-486-5p及两者联合诊断放疗无效的
24、ROC曲线见图1;曲线下面积(AUC)、截断值、敏感度、特异度及约登指数见表 4;联合诊断效能优于单独诊断(Z 分别为2.006和2.024,P0.05)。Fig.1Targeting relationship diagram of circPVT1 and miR-486-5p图1circPVT1与miR-486-5p的靶向关系图组别对照组NSCLC组tn140137circPVT1/GAPDH放疗前1.010.132.360.3838.472放疗后-1.970.42t10.397P0.01,表2、3同。Tab.1Comparison of serum circPVT1 and miR-48
25、6-5pexpression levels before and after radiotherapy between thecontrol group and the NSCLC group表1对照组与NSCLC患者血清circPVT1、miR-486-5p表达水平比较(xs)组别对照组NSCLC组tmiR-486-5p/U6放疗前1.050.120.730.1024.439放疗后-0.920.09t18.642临床特征病理类型腺癌鳞癌tTNM分期期期tn75628156circPVT12.370.402.330.370.6972.230.312.530.424.525miR-486-5p0
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