石榴皮多酚提取物联合二甲双胍对2型糖尿病小鼠模型的治疗作用.pdf
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1、四川医学 年 月第 卷(第 期).广东省大学生创新创业训练计划项目(编号:)为共同第一作者基础与实验研究:./.论著石榴皮多酚提取物联合二甲双胍对 型糖尿病小鼠模型的治疗作用汪 鹏徐树辉吴桂冰李鸿基李斯锦黄沛婷余宗峻(广州医科大学基础医学院广东 广州)【摘要】目的 探究石榴皮多酚()提取物联合二甲双胍()对 型糖尿病()小鼠模型的协同治疗作用 方法 高糖高脂饲料联合链脲佐菌素诱导建立 小鼠模型 连续治疗 周期间观察并记录小鼠一般状况():进食量()、饮水量()及体质量()小鼠糖耐量相关指标():空腹血糖()、口服糖耐量试验曲线下面积记录并用空腹胰岛素与空腹血糖计算胰岛素功能相关指标():胰岛素
2、抵抗指数、胰岛素敏感性指标和 细胞功能 结果 小鼠在造模成功后的第 周开始出现、增多但 减轻的糖尿病症状 小鼠经 和 治疗后发现:两药均能显著改善小鼠的、和 但对 的影响不明显两药对小鼠、和 作用的差异无统计学意义 两药联合使用在改善小鼠 和 方面均具有交互作用且该交互作用在改善除 外的其他 和 指标方面均要显著强于单独用药 结论 能有效治疗 其治疗作用与 基本相当 当 与 联合使用时两者存在交互作用以协同治疗 因此 联合 有可能成为一种安全、经济、有效的治疗 的新方案值得进一步研究推广【关键词】石榴皮多酚二甲双胍 型糖尿病小鼠模型【中图分类号】【文献标志码】【文章编号】().【】()()()
3、.():()()()():()():.:.【】四川医学 年 月第 卷(第 期).型糖尿病()是以糖代谢异常为基础的多种代谢紊乱疾病约占糖尿病病患的 以上 中国 防治指南(年版)指出二甲双胍()是治疗 的一线用药并贯穿治疗始终当使用 治疗血糖仍未达标者则可加用 葡萄糖苷酶()抑制剂()临床上常用的 降糖药主要为阿卡波糖但阿卡波糖价格昂贵且有较多不良反应 因此寻找更经济、安全的 新药具有重要的临床意义 近年来有研究报道石榴皮的多酚提取物石榴皮多酚()对 的活性表现出较强的抑制作用且未表现出明显毒性作用 目前其与 联合使用治疗 的作用尚未见报道 为此本研究通过 联合 使用观察其对 的协同治疗作用以探
4、讨一种新的治疗 的临床用药方案将为 的临床治疗提供借鉴 材料与方法 实验动物:健康雄性昆明种小鼠 只 周龄体质量()()由广东省医学实验动物中心提供(生产许可证号 (粤)小鼠饲养在广州医科大学实验动物中心(使用许可证号(粤)常规饲养观察 周后使用 本研究的动物饲养条件符合相应实验动物等级标准所有动物相关操作均按照广州医科大学实验动物伦理委员会的规定执行 主要试剂与仪器:乙醇提取物(鞣花酸 安石榴苷 石榴多酚 )由宝鸡浩翔生物技术有限公司提供盐酸二甲双胍片柠檬酸二钠(分析纯)柠檬酸(分析纯)由上海阿拉丁生化科技股份有限公司提供清洁级维持鼠料高脂高糖饲料均由南京盛民科研动物养殖场提供链脲佐菌素()
5、由上海麦克林生化科技有限公司提供罗氏怡动型血糖仪及试纸由北京莱科百奥生物技术公司提供小鼠胰岛素 试剂盒由北京华夏远洋科技有限公司提供 低温高速离心机购自 公司光吸收酶标仪()购自美国 公司 方法 小鼠模型制备:参照 模型建立方法选取健康雄性昆明小鼠适应性喂养 周 造模前模型组先饲喂高糖高脂饲料 个月再更换成清洁级标准维持鼠料同时将溶解于柠檬酸盐缓冲液中的 按照 /体质量剂量左下腹腹腔注射 次/持续 对照组给予同等剂量的柠檬酸盐缓冲液 于尾尖处取血测量空腹血糖()选择 /者作为 造模成功的标准 实验动物分组与给药:选取造模成功的小鼠根据析因设计定量资料的方差分析要求我们设置 组每组 只来观察 及
6、 对 的协同治疗效果:空白模型组(对照组)、提取物治疗组()、二甲双胍治疗组()、联合用药治疗组()分别以蒸馏水、提取物(/)、(/)、联合(各 /)灌胃 次/连续 周 实验期间小鼠自由采食饮水 观察指标与测定方法 水平检测:于给药第 周周末早上 时至下午 时换笼禁食不禁水并于小鼠尾静脉采血并做好创口的消毒工作通过罗氏血糖测试仪及配套试纸条基于葡萄糖氧化酶法对血糖进行快速测定 口服葡萄糖耐量试验():于给药前及给药后第 周小鼠禁食但正常供水 后灌胃给予 葡萄糖(/)负荷 于负荷前()及负荷后 、和 测定血糖值计算血糖曲线下面积()以反映对葡萄糖的耐受程度该值越小说明耐受性越好 其计算公式为 (
7、/)()/()/()/(血糖值 血糖值 血糖值 血糖值)空腹胰岛素水平():于给药前及给药后第 周各组小鼠禁食不禁水 后眼眶取血及时分离血清并采用酶联免疫吸附法根据胰岛素 试剂盒附带说明书测定小鼠的 胰岛素抵抗和 细胞功能的稳态模型评估四川医学 年 月第 卷(第 期).():用 和 计算胰岛素抵抗()和 细胞功能()的稳态模型评估胰岛素抵抗状态和胰岛 细胞功能而胰岛素敏感性指数()则反映胰岛素对体内葡萄糖摄入的反应效率 /()()统计学方法:采用 软件不同时间点的 数据的比较考虑到进食量()的影响作随机区组设计的协方差分析不同时间点其他数据的比较作单因素重复测量数据的方差分析不同治疗组数据间的
8、比较采用两因素重复测量资料的方差分析不同药物间交互作用的判断采用析因设计重复测量资料的方差分析各水平间的两两比较采用最小二乘法检验药物处理前后数据间的比较采用 检验 以 为差异有统计学意义统计资料以()表示 结 果 模型制备情况:只健康雄性昆明小鼠用于造模其中死亡 只造模成功 只造模成功率 造模后小鼠的血糖值从造模前的()/显 著 升 高 到()/()排除 对 的影响后造模后修正 ()从造模前的()显著增加到()()我们对对照组模型小鼠的各项指标作了跟踪观察见表 所示模型小鼠的血糖值在第 周时即开始升高()并于第 周时趋于稳定小鼠的 及饮水量()在第 周内逐渐增加()但 的增加量却有所下降()
9、排除 对 的影响后小鼠的 在第 周内不断减轻()表 小鼠造模成功后、的变化()项目造模成功后第 周第 周第 周第 周(/)(/)(/)(/)(/)注:与造模成功后比较 与第 周比较 与第 周比较 及 对 小鼠一般情况、及 的治疗作用:对于 经 及 治疗后小鼠的 随着时间的推移与对照组一样(见表)仍在逐步增加()两药对 治疗的差异无统计学意义()对于 经 及 治疗后小鼠的 随着时间的推移与对照组(见表)的变化完全相反均在逐步减少()两药对 作用的差异无统计学意义()见表 表 及 对、及 的治疗作用()分组项目给药前第 周第 周第 周第 周(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)注:与给药
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