帕拉米韦原料含量测定方法比较研究.pdf
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1、天津药学TianjinPharmacy2023年第35卷第4期收稿日期:2022鄄11鄄03*通讯作者:韩晓捷,E-mail:。药品质量与检验帕拉米韦(peramivir)是一种新型抗流感病毒制剂,其具有3个可以与流感病毒糖蛋白神经氨酸酶(NA)蛋白活性位点残基相互作用的化学基团,可有效对抗A型和B型流感病毒,尤其是对扎那米韦和磷酸奥司他韦已产生耐药性变异的病毒具有良好的治疗效果,且对A型H1N1药力较B型更为有效1-5。本品可采用静脉给药途径,更容易向口服或吸入有困难的患者、丧失意志的重症患者和婴幼儿给药,在血液中浓度比扎那米韦和磷酸奥司他韦更高,保持有效活性时间更长,可更有力地拮抗病毒。帕
2、拉米韦有望成为对抗A型H1N1药物的一颗新星6。帕拉米韦分子式为C15H28N4O4,相对分子质量为328.41。由于胍基和羧基的存在,使得帕拉米韦为极性较强的两性化合物。本文建立了非水滴定法和高效液相色谱法对帕拉米韦原料药的含量进行测定,并对2种方法进行了比较。1仪器与试药1.1仪器梅特勒托利多T50型全自动电位滴定仪,配有DGi113-SC复合玻璃pH智能电极;岛津LC-20AD型高相液相色谱仪,配有紫外检测器;安捷伦1260型高相液相色谱仪,配有二极管阵列检测器;梅特勒托利多XS205DU型十万分之一电子天平。1.2试药帕拉米韦对照品(批号101260-202203,纯度:按帕拉米韦计为
3、85.1%,中国食品药品检定研究院);帕拉米韦原料药(批号202201,202202,202203,均来自企业);乙腈为色谱纯,购自默克公司。高氯酸、冰醋酸、醋酐、邻苯二甲酸氢钾基准试剂、磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸均为分析纯;水为超纯水。2方法与结果2.1非水滴定法2.1.1高氯酸标准溶液的制备取无水冰醋酸(按含水量计算,每1 g水加入5.22 ml醋酐)750 ml,加入高氯酸(70%72%)8.5 ml,摇匀,在室温下缓慢滴加23 ml醋酐,边加边摇,加完后摇匀放冷,加无水冰醋酸适量使终体积为1 000 ml,摇匀,放置24 h,即得。2.1.2高氯酸标准溶液的标定取在105 干燥至恒重的基
4、准邻苯二甲酸氢约0.16 g,精密称定,加无水冰醋酸20 ml使溶解,加结晶紫指示液1滴,摇匀,用配制好的高氯酸溶液滴定至蓝色,并将滴定的结果用空白试验校正。经标定,该高氯酸标准溶液的浓度为0.099 02 mol/L。帕拉米韦原料含量测定方法比较研究段玺玉,韩晓捷*(天津市药品检验研究院,天津300070)摘 要目的:建立并比较高氯酸非水滴定法和高效液相色谱法测定帕拉米韦原料药的含量。方法:非水滴定法:以无水冰醋酸为溶剂,0.1 mol/L的高氯酸滴定液为滴定剂,电位法指示滴定终点进行滴定。高效液相色谱法:采用Welch Ultimate AQ-C18(150 mm4.6 mm,5 m)色谱
5、柱,以1 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液(称取磷酸二氢钾约0.136 g溶于1 000 ml水,加入1 ml三乙胺,并以磷酸调pH 6.0)为流动相A,以乙腈为流动相B,90%A相等度洗脱10 min。流速为1.0 ml/min,柱温为40,检测器波长为210 nm,进样量为20 l。结果:两种方法均符合方法学验证要求。对同一批次样品进行测定,结果无显著性差异(P0.05)。结论:两种方法均能用于帕拉米韦含量测定,为其质量控制提供依据,且各有优势。可根据实际情况和需求选择相应的方法。关键词原料药;帕拉米韦;含量测定;非水滴定法;高效液相色谱法中图分类号:R927.2文献标识:A文章编号:1006
6、-5687(2023)04-0007-067天津药学TianjinPharmacy2023年第35卷第4期2.1.3滴定方法的选择和滴定曲线的绘制帕拉米韦结构中同时含有碱性的胍基和酸性的羧基,但总体表现为弱碱性,在水溶液中直接滴定无明显突跃,而在非水酸性介质中其碱性显著增强,从而能够出现明显突跃7,并且帕拉米韦在酸性介质中溶解性较好。所以本研究选择以无水冰醋酸为溶剂,采用高氯酸非水滴定对帕拉米韦含量进行测定。在高氯酸非水滴定过程中,采用电位滴定法进行滴定终点的判断。并考查了结晶紫指示剂,在等当点前后溶液颜色的变化情况。滴定曲线如图1所示,一阶导数图见图2。由图1可知,本方法滴定突跃大,终点颜色
7、变化明显(从紫色蓝色),指示剂法判断滴定终点与电位滴定结果一致,本研究选择电位法指示终点。2.1.4重复性试验取帕拉米韦(202201)6份,各0.15 g,精密称定,加40 ml无水冰醋酸使溶解后进行滴定,计算帕拉米韦的含量平均值为100.67%,RSD为0.03%,结果表明,方法重复性良好。2.1.5中间精密度试验由2名分析人员在不同时间各对6份供试品进行测定,对2次试验共12个测定结果进行分析以判断方法的精密度。计算帕拉米韦的含量平均值为100.69%,RSD为0.04%,结果表明,方法中间精密度性良好。2.1.6准确度试验取帕拉米韦(批号202201),按照配制供试品溶液称样量的80%
8、、100%和120%称样,精密称定,每个水平称取3份。分别加入无水冰醋酸40 ml使溶解后进行滴定,计算帕拉米韦的回收率(回收率%=测得量/加入量100%),结果平均回收率为99.89%,RSD为0.11%,见表1。结果表明,该方法准确度良好。2.1.7溶液稳定性试验取帕拉米韦(批号202201),制备供试品溶液,置于室温(23)。分别于0、2、4和6 h测定帕拉米韦含量。含量平均值为100.68%,RSD为0.05%。结果表明,室温条件下,帕拉米韦供试品溶液6 h稳定。2.1.8样品测定取本品约0.15 g,精密称定,加无水冰醋酸40 ml使溶解,照电位滴定法(中国药典2020年版四部通则0
9、701)在磁力搅拌下,用高氯酸滴定液(0.1 mol/L)滴定,并将滴定的结果用空白试验校正。每1 ml高氯酸滴定液(0.1 mol/L)相当于32.84 mg帕拉米韦(C15H28N4O4)。以无水物计算,3批样品测定结果见表2。2.2高效液相色谱法2.2.1色谱条件以Welch Ultimate AQ-C18(150 mm4.6 mm,5 m)为色谱柱,以1 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液(称取磷酸二氢钾约0.136 g溶于1 000 ml水,加入1 ml三乙胺,并以磷酸调pH 6.0)为流动相A,以乙腈为流动相B,90%A相等度洗脱10 min。流速图2一阶导数曲线V/ml02461 20
10、01 0008006004002000dE/dV图1滴定曲线V/ml600550500450400350U/mV0246水平加入量(mg)测得量(mg)回收率(%)80%121.45121.3299.89121.30121.0299.77120.98120.7599.81100%151.38151.43100.03151.66151.70100.02152.10152.0499.97120%181.82181.3599.75181.47181.1299.81182.37182.2399.92表1非水滴定法加样回收率试验结果表2非水滴定法含量测定结果批号202201202202202203含量(
11、%)100.7100.5100.78天津药学TianjinPharmacy2023年第35卷第4期1.帕拉米韦图3空白溶剂(A)对照品(B)供试品(C)典型色谱图为1.0 ml/min,柱温为40,检测器波长为210 nm,进样量为20 l。2.2.2溶液的制备2.2.2.1对照品溶液的制备称取对照品约含帕拉米韦20 mg,精密称定,至10 ml量瓶中,加溶剂溶解并稀释至刻度,作为对照品储备液。精密移取帕拉米韦对照品储备液1.0 ml至10 ml量瓶中,加溶剂稀释至刻度,作为对照品溶液。溶剂为乙腈-水(1090)。2.2.2.2供试品溶液的制备称取供试品适量(约含帕拉米韦20 mg)至100
12、ml量瓶中,加溶剂溶解并稀释至刻度,作为供试品溶液。2.2.3系统适用性试验取“2.2.2.1”项下对照品溶液(浓度:189.40 g/ml),按“2.2.1”项下色谱条件进行测定,记录色谱图,按主峰计算,理论塔板数为6 395,拖尾因子为1.077。结果表明,系统适用性良好。空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液色谱图见图3。2.2.4专属性试验2.2.4.1空白溶剂干扰试验吸取乙腈-水(1090)20 l,按照“2.2.1”项下所述色谱条件进行测定,在帕拉米韦出峰位置,未见干扰峰。结果表明,空白溶剂不干扰帕拉米韦的测定。2.2.4.2强制降解试验称本品适量(按帕拉米韦计约含20 mg),置10
13、ml量瓶中,加溶剂溶解并稀释至刻度,作为供试品储备液。精密移取供试品储备液1.0 ml置10 ml量瓶中,加入1 mol/L盐酸溶液1 ml,60 加热1 h,用1 mol/L氢氧化钠溶液中和后用溶剂稀释至刻度,作为酸降解溶液;精密移取供试品储备液1.0 ml置10 ml量瓶中,加入1 mol/L氢氧化钠溶液1 ml,60 加热4 h后,取出放凉至室温,用1 mol/L盐酸溶液中和后用溶剂稀释至刻度作为碱降解溶液;精密移取供试品储备液1.0 ml置10 ml量瓶中,加入30%过氧化氢溶液1 ml,60 加热4 h后,取出放凉至室温,用溶剂稀释至刻度,作为氧化降解溶液;取于105 加热4 h的本
14、品适量(相当于帕拉米韦20 mg),精密称定,置100 ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,作为热降解溶液;另取于(4 500500)lx光照24 h的本品适量(相当于帕拉米韦20 mg),精密称定,置100 ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,作为光降解溶液。将上述强制降解溶液按照“2.2.1”项下所述色谱条件进行测定。结果见图4。图4表明,本品在105 加热4 h和(4 500500)lx光照24 h条件下尚比较稳定。在酸降解条件下,产生的主要杂质在4.8 min,与帕拉米韦分离度为6.146。在碱降解条件下,产生的主要杂质在3.7和8.0 min,各杂质之间和各杂质与帕拉米韦分离度分别为10.295
15、和5.260。在氧化降解条件下,产生的主要杂质在2.9、3.6和4.3 min,各杂质之间和各杂质与帕拉米韦分离度分别为2.668、1.541和4.126。将强制降解溶液按照“2.2.1”项下色谱条件,使用二极管阵列检测器进行测定,主峰的峰纯度见表3,均大于999.9。以上试验结果表明此方法专属性良好。2.2.5线性与范围精密称取对照品含帕拉米韦18.93 mg,置于10 ml量瓶中,用溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品储备液。分别精密移取该溶液0.5、0.8、1.0、1.2、1.5和3.0 ml,置于10 ml量瓶中,加溶剂稀释至刻度,摇匀,制成质量浓度分别为94.70、151.52、1
16、89.40、227.28、284.10和568.20 g/ml的标准系列溶液。精密量取各标准系列溶液20 l,注入高效液相色谱仪。以峰面积(Y)为纵坐标,以帕拉米韦质量浓度(X)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程:Y=1107X+176 248(r=0.999 8)。结果表明,帕拉米韦质量浓度在94.70568.20 g/ml范围内,与峰面积具有良好的线性关系。0510t/minA05101t/minB0510t/minC19天津药学TianjinPharmacy2023年第35卷第4期图4未破坏(A)酸降解(B)碱降解(C)氧化降解(D)热降解(E)光降解(F)试验结果2.2.6精密度试验2
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- 帕拉米韦 原料 含量 测定 方法 比较 研究
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