牛羊O型口蹄疫ELISA试验的抗体检测.pdf
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1、动物生产622023.8牛羊O型口蹄疫ELISA试验的抗体检测高波(瓦房店市动物疫病预防控制中心,辽宁瓦房店116300)口蹄疫是由口蹄疫病毒引发的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。口蹄疫是人畜共患传染病,被国际兽医组织确定为一类传染病,主要侵害偶蹄兽,它的临诊特征为体温升高、精神不振、流涎,在唇部内面、齿龈、舌面、蹄部、乳房处皮肤出现水疱,水疱逐渐破裂后,体温达到正常。口腔内出现水疱期间,趾间、蹄冠的较软皮肤也出现水疱,破裂的水疱短时间形成烂斑,随后逐渐康复,若护理不当,激发感染化脓菌,形成溃疡坏死,甚至会出现蹄甲脱落。有的病牛在康复过程中,病情由好转变为加重,全身衰竭,心脏停搏而
2、死亡。此病传染性极强。感染后传播速度快,对人畜危害严重,因此,做好此疫病的预防、控制、消灭措施显得格外重要。口蹄疫病预防主要是通过疫苗的免疫使牛羊体内产生抗体,来保护牛羊不再发病,免疫质量好坏决定抗体的保护程度。通常采用酶联免疫液相阻断法检测牛、羊血清中的口蹄疫O型抗体。检测出抗体的OD值,通过OD值来判断牛羊抗体的保护率。如果抗体的OD值下降,已经不在保护范围内,就应该立即进行牛羊的疫苗免疫接种。不及时免疫,有可能造成牛羊发病,直接造成养殖户的经济损失。现接到检测任务,需要将20份牛血清做O型口蹄疫抗体检测,介绍如下。1 检验原理采用酶联免疫液相阻断法。牛羊待检样品中O型抗体的含量与显色OD
3、值呈负相关,通过与病毒抗原对比来判断抗体效价。试剂盒在22的实验室回温1小时。利用回温时间准备试验用的器材。100微升单道移液器、12道移液器、枪尖、量杯、量筒、加样槽、拍板用的吸水纸等。2 试剂配制2.1 洗涤液配制今天检测牛血清样品20份,洗板时所需要的洗涤液的体积为300微升100孔5次2=300毫升。使用前拿出一包固体洗液加500毫升纯化水,摇晃直至溶解,在无菌条件下配制试验用洗涤液,可以在28条件下保存7天。配制的洗涤液用于洗板和抗原的稀释。2.2样品稀释液(1x)配制20份样品所需的样品稀释液(1x)的体积为12毫升。使用前,将浓缩样品稀释液(5x)1份加4份蒸馏水稀释,即3毫升浓
4、缩样品稀释液(5x)加入12毫升纯化水。在无菌条件下配制(无菌水和无菌容器)样品稀释液(1x)共计15毫升。在28条件下能够保存1个月。配制好的样品稀释液(1x)用来作样品的稀释,也用作阴阳对照的稀释。3 具体操作步骤试验前,将所有的试剂盒组份取出来,放在实验台上,应恢复到20261小时。试剂使用时,轻轻摇晃均匀后倒入加样槽内。稀释浓缩病毒抗原:使用配制好的洗涤液,按450倍稀释浓缩病毒抗原液(即1份浓缩病毒抗原加449份洗涤液),20微升的浓缩病毒抗原加入8.98毫升的洗涤液中,工作用的病毒抗原就配置好了。血清稀释板加样操作步骤:试验以每板20份样品操作,包被板A1A10孔各加175微升的样
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