辽宁某规模化猪场猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析.pdf
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1、 收稿日期:作者简介:王洪奎()男 本科 高级兽医师 研究方向:商品猪饲养管理、疾病防治 :辽宁某规模化猪场猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析王洪奎(阜新蒙古族自治县现代农业发展服务中心 辽宁 阜新)中图分类号:文献标志码:文章编号:()摘 要:研究主要针对辽宁省某规模化猪场发病猪只采集病料样品 分离鉴定致病菌同时利用纸片法进行药敏试验 筛选敏感性药物 结果表明 分离菌株为多杀性巴氏杆菌 药敏试验结果表明菌株对氟苯尼考、卡那霉素等药物高度敏感 可作为猪场该类疾病防控的候选药物关键词:猪 巴氏杆菌 分离鉴定 药敏试验 猪巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌引起的急性流行性或散发性和继发性传染病 又
2、叫猪肺疫 猪巴氏杆菌病根据临床症状可分为急性型和慢性型 类 急性型多以出血性败血性病变、咽喉肿胀发炎和肺部充血、水肿、炎症等为主要临床表现 慢性病例多发病缓慢 主要表现为呼吸苦难 慢性肺炎 个别可见关节炎症状 且其常与猪瘟等混合感染 严重的可引起猪只死亡 对养猪业危害巨大近日 辽宁某规模化猪场部分猪发病 病猪体温升高 可达 精神沉郁 食欲减少或不食 干咳 部分猪鼻孔流出浆性或脓性分泌物 呼吸困难 张口呼吸 结膜发绀 皮肤表面有大小不一致且形状不规则的红色斑块 少数猪轻微腹泻 部分猪于发病 日内死亡 剖检死亡病猪后 可见咽喉部红肿发炎 黏膜充血、水肿 胸腔与肺脏黏连 胸腔积液 肺充血、水肿 部分
3、坏死 脾脏表面有散在出血点 轻微肿大 综合临床症状、剖检变化及流行病学情况 疑似为巴氏杆菌引起为进一步确诊 现场采集病猪肺脏、淋巴结等组织样品 对致病菌进行分离鉴定 同时进行药物敏感性试验 以期对临床上该类疾病的防治提供理论依据 材料与方法 实验材料 主要试剂 普通营养肉汤琼脂培养基 培养基 革兰氏染色试剂盒购于北京索莱宝科技有限公司 (含 )购于南京诺唯赞生物科技股份有限公司 细菌基因组 提取试剂盒购于生工生物工程(上海)股份有限公司 甲醇、无水乙醇、三氯甲烷等试剂为国产分析纯 主要仪器电热恒温培养箱 购自于北京六一仪器有限公司 凝胶成像系统购自于江苏捷达科技有限公司 电泳仪 、电 泳 槽、
4、仪 购自于美国伯乐有限公司 无菌工作台 购自于青岛海尔公司 病料及实验动物猪场发病死亡猪 头 剖检后无菌采集肺脏组织样品 养猪 ()保存待检 级昆明小鼠 只 雌雄各半购自于沈阳长生实验动物有限公司 实验方法 细菌分离培养将病料组织样品涂布于营养琼脂培养基和血平板培养基上 放入培养箱培养观察 用接种环取单菌落 进一步划线培养纯化 同时挑取单个菌落在 培养基中进行振荡培养 纯化培养后菌株进行革兰染色镜检 观察菌体染色特性及形态 生化鉴定 参考生化试验试剂说明书将分离菌培养物接种于各生化 反 应 管 中 培养 观察并记录结果 细菌 基因序列分析使用 通用引物进行普通 扩增 上下游引物分别为 和 引物
5、由生工生物公司进行引物合成 扩增条件:预变性 变性 退火温度 退火时间 延伸 共 个循环 最后 延伸 保存然后取 产物进行琼脂糖凝胶电泳凝胶成像仪观察结果 同时将 产物送往上海生工生物公司进行测序 测序结果与 中已发表的基因序列进行同源性比对 致病性试验无菌条件下挑取普通琼脂培养基上培养的单个菌落接种于 液体培养基中 、/培养 取 只健康的 级小鼠 随机分为试验组和对照组 每 组 只 对 试 验 组 小 鼠 腹 腔 注 射 含有 个细菌的菌液 对照组小鼠注射等体积的 液体培养基 逐日观察小鼠发病死亡情况 并对死亡小鼠及未死亡小鼠分别进行剖检 观察记录小鼠各个组织病变情况 同时取病变脏器进一步分
6、离病原菌 药敏试验采用纸片扩散法进行药敏试验 挑取琼脂平板培养基上的单菌落接种于 液体培养基 、/培养 取 菌液分点滴加在琼脂平板上 应用玻璃棒均匀涂布于培养基上 将常用抗菌药物药敏纸片贴在平板培养基上 培养 观察抑菌圈是否出现并测定其直径 结果 细菌分离培养分离菌在普通琼脂平板上生长出灰白色菌落 表面光滑且较为湿润、边缘整齐 血平皿上生长出灰白色菌落 表面光滑且较为湿润、边缘整齐且没有溶血现象(图)挑取单菌落至于载玻片上 进行革兰氏染色 染色后将载玻片置于油镜下观察 镜下可见本次分离菌株呈淡红色、两端钝圆的短杆状 为革兰阴性菌(图)注:普通琼脂平板:血平板图 分离菌平板培养基菌落形态 第 期
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