巨细胞病毒IgM抗体检测试纸条的改良与性能评价.pdf
《巨细胞病毒IgM抗体检测试纸条的改良与性能评价.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《巨细胞病毒IgM抗体检测试纸条的改良与性能评价.pdf(5页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、改良巨细胞病毒IgM抗体检测试纸条,以消除IgG抗体干扰,提高检测准确度。方法院该试纸条采用胶体金免疫层析法制备,以鼠抗人IgM抗体作为金标抗体。首先,制备胶体金标记抗体,并制成胶体金垫。其次,沿着层析方向在硝酸纤维素(nitrocellulose,NC)膜上依次设置IgG抗体拦截线I、检测线T及对照线C,并在检测线T处包被1.5 mg/mL的巨细胞病毒重组抗原,在对照线C处包被0.5 mg/mL的羊抗鸡IgY抗体,在拦截线I处包被3.0 mg/mL的鼠抗人IgG抗体。最后,将胶体金垫、NC膜、吸水纸、样品垫等粘贴在聚氯乙烯底板上,制成试纸条,并对其性能进行评价。结果院该试纸条可有效降低样本中
2、效价臆1 280的IgG抗体对检测结果的干扰,且在检测国家参考品时的准确度、最低检出限及重复性均符合要求。该试纸条与10种相近病原体无交叉反应,且与酶联免疫吸附试剂盒的检测结果具有较高的一致性。结论院改良后的巨细胞病毒IgM抗体检测试纸条可消除IgG抗体干扰,且检测高效方便、准确度高,能更好地满足基层单位临床检验的需要。关键词巨细胞病毒;IgM抗体;试纸条;胶体金免疫层析法;IgG抗体干扰中国图书资料分类号R318曰R446.6文献标志码A文章编号1003-8868渊2023冤07-0039-05DOI院10.19745/j.1003-8868.2023136Improvement and p
3、erformance evaluation of test strip forcytomegalovirus IgM antibody detectionCHEN Heng-li(INTEC PRODUCTS,INC.,Xiamen 361022,Fujian Province,China)AbstractTo modify the test strip for cytomegalovirus IgM antibody detection to eliminate IgG antibodyinterference and improve detection accuracy.A test st
4、rip was prepared by colloidal gold immunochromatographywith the mouse anti-human IgM antibody as the gold standard antibody.The colloidal gold-labeled antibody were produced,and then the colloidal gold pad was made.A nitrocellulose(NC)membrane was set with an IgG antibody intercept line I,detection
5、line T and control line C sequentially along the direction of chromatography,and coated with 1.5 mg/mLrecombinant cytomegalovirus antigen at the detection line T,with 0.5 mg/mL goat anti-chicken IgY antibody at the controlline C and with 3.0 mg/mL mouse anti-human IgG antibody at the intercept line
6、I.The colloidal gold pad,NC film,absorbentpaper and sample pad were pasted onto a polyvinyl chloride backing to form the test strip,then the test strip underwentperformance evaluation.The test strip could effectively reduce the interference of IgG antibodies with the titre nothigher than 1 280 in th
7、e sample on the test results,and met the requirements for accuracy,limit of detection and repeatabilitywhen used to detect the national reference.There were no cross reactions found between the test strip and 10 kinds of similarpathogens,and the test strip had high consistency with the ELISA kit.The
8、 modified test strip for cytomegalovirusIgM antibody eliminates the interference of IgG antibody effectively and has high detection efficiency and accuracy,and canbe used for the clinical laboratory tests of elementary institutions.悦澡蚤灶藻泽藻 酝藻凿蚤糟葬造 耘择怎蚤责皂藻灶贼 允燥怎则灶葬造袁2023袁44渊7冤院39-43Key wordscytomegal
9、ovirus;IgM antibody;test strip;colloidal gold immunochromatography;interference of IgG antibody0引言巨细胞病毒是一种疱疹病毒,能引起受感染细胞肿大,主要通过血液、性行为及垂直传播1。如果孕妇感染巨细胞病毒,可导致胎儿出现宫内感染,造成流产、早产、死胎或胎儿畸形2-4。巨细胞病毒是“优生五项”检查项目中的一项。在我国和其他国家,“优生五项”检查已被列为孕前健康检查的常规检测项目,国内主要通过筛查血清抗体进行积极的预防和控制5-6。目前,检测血清抗体的常用方法有胶体金免疫层析法、酶联免疫吸附(enzym
10、e linked immunosorbentassay,ELISA)法和化学发光法。ELISA法手工操作步骤烦琐,检测时间长,不能满足临床快速诊断的要作者简介院陈亨莉(1987),女,硕士,研发工程师,主要从事医疗器械体外诊断试剂研发工作。栽澡藻泽蚤泽论著陈亨莉.巨细胞病毒IgM抗体检测试纸条的改良与性能评价J.医疗卫生装备,2023,44(7):39-43.39 窑医疗卫生装备窑 2023年7月第44卷第7期悦澡蚤灶藻泽藻 酝藻凿蚤糟葬造 耘择怎蚤责皂藻灶贼 允燥怎则灶葬造 窑 灾燥造援 44 窑 晕燥援 7 窑 July 窑 2023求;化学发光法成本高,对设备和人力有较高要求,在基层卫生
11、单位实施起来有一定难度;而胶体金免疫层析法则简便、快速、检测成本低、无需仪器设备,十几分钟即可用肉眼观察结果,可实现即时检测,在临床筛查检测中被广泛应用。胶体金免疫层析法虽有众多优点,但其在检测IgM抗体时存在一定的漏检率,易产生假阴性结果7。如样本中含有高效价的病原体特异性IgG抗体,则病原体IgG抗体与病原体IgM抗体会在检测线处竞争病原体抗原结合位点而导致检测结果出现假阴性8。为了消除IgG抗体的干扰,一般采用抗人IgG抗体结合去除样本中的IgG抗体,该方法多应用于ELISA、化学发光、免疫比浊检测试剂中,在免疫层析试剂中的应用较少。目前可采取的方式是将抗人IgG抗体加入到标记物垫、滤过
12、垫或样品处理液中9。添加至标记物垫或者滤过垫中处理工艺较为烦琐,而添加在样品处理液中常温保存容易造成IgG抗体失效。鉴于此,为获得更高的检测准确度,本研究对巨细胞病毒IgM抗体检测试纸条进行改良,将抗人IgG抗体直接包被于硝酸纤维素(nitrocellulose,NC)膜上,即在NC膜的检测线下方设置一条包被有高浓度鼠抗人IgG抗体的拦截线以结合样本中的干扰IgG抗体,工艺简单合理、高效方便、可操作性强。1试纸条的制备1.1材料与试剂巨细胞病毒重组抗原、鼠抗人IgM单克隆抗体及鼠抗人IgG抗体均由北京新创生物工程有限公司提供;NC膜购自德国Sartorius公司;玻璃纤维、聚氯乙烯(polyv
13、inyl chloride,PVC)底板、吸水纸购自上海金标生物科技有限公司。氯金酸、柠檬酸钠、牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、碳酸钾(K2CO3)购自美国SIGMA公司。1.2仪器与设备电热鼓风干燥箱为上海双五金牌;离心机购自湖南湘仪实验室仪器开发有限公司;划膜仪和数控切条机购自上海金标生物科技有限公司。1.3胶体金标记抗体的制备1.3.1胶体金粒径的选择采用柠檬酸钠还原法制备胶体金10。选择粒径大小约为40 nm的胶体金,观察胶体金溶液的物理性状,采用分光光度计在波长300700 nm范围内进行扫描,测定其最大吸收峰。胶体金溶液视觉观察呈清亮的紫红色,溶液
14、上层无漂浮物,底部无黑色聚集物。如图1所示,胶体金溶液的最大吸收峰在534 nm处,峰宽较小,表明制备的胶体金溶液颗粒分布均匀,透光性和稳定性良好。1.3.2胶体金标记最适pH的选定取7个1.5 mL离心管,分别加入1 mL胶体金溶液,然后依次加入5、6、7、8、9、10、11 滋L 0.2 mol/L的K2CO3溶液,混匀。再分别加入10 滋g鼠抗人IgM单克隆抗体,混匀。静置15 min后,各加入200 滋L10%NaCl溶液,混匀,静置2 h,用分光光度计测定534 nm波长处的吸光度值。保持吸光度值变化最小的K2CO3溶液用量为最适pH。如图2所示,当0.2 mol/L K2CO3溶液
15、用量在811滋L时其吸光度值只有微小变化,溶液保持紫红色,很稳定。在其他用量时,颗粒出现团聚,溶液颜色变为灰色或紫色。因此,选择在1 mL胶体金中加入8 滋L0.2 mol/L K2CO3溶液时为标记最适pH。1.3.3标记抗体最适标记量的选定取7个1.5 mL离心管,分别加入1 mL胶体金溶液,再各加适量0.2 mol/L K2CO3溶液混匀调至最适pH。体依次加入1、2、5、10、15、20、25 滋g鼠抗人IgM单克隆抗体,混匀。静置15 min后,分别加入200 滋L 10%NaCl溶液,混匀。静置2 h后,用分光光度计测定534 nm波长处的吸光度值。吸光度值最大处对应的标记量为稳定
16、胶体金的最低抗体量,在此基础上加20%即为最适的抗体标记量。如图3所示,标记量小于10 滋g时,胶体金溶液的吸光度值呈上升趋势;标记量大于10 滋g后,胶体图1胶体金溶液标记前后紫外-可见光谱图图2不同K2CO3溶液用量条件下胶体金标记溶液吸光度值的变化1.00.80.60.40.20541 nm胶体金溶液胶体金标记抗体溶液300400500600700波长/nm46810120.2 mol/L K2CO3溶液/滋L0.80.60.40.20534 nm栽澡藻泽蚤泽论著陈亨莉.巨细胞病毒IgM抗体检测试纸条的改良与性能评价J.医疗卫生装备,2023,44(7):39-43.40 窑医疗卫生装备
17、窑 2023年7月第44卷第7期悦澡蚤灶藻泽藻 酝藻凿蚤糟葬造 耘择怎蚤责皂藻灶贼 允燥怎则灶葬造 窑 灾燥造援 44 窑 晕燥援 7 窑 July 窑 2023图5试纸条实物图样品垫胶体金垫NC膜吸水纸金溶液吸光度值略微下降后趋于平缓,溶液颜色无明显变化,表明10 滋g为稳定胶体金的最低抗体量。因此,1 mL胶体金溶液最适抗体标记量为12 滋g(最低抗体量基础上加20%)。1.3.4胶体金标记抗体的表征随着标记过程中胶体金颗粒表面与抗体和BSA的结合,其最大吸收峰会发生移动,由图1可以看出,胶体金标记鼠抗人IgM单克隆抗体后,最大吸收峰所在波长由534 nm移至541 nm,说明胶体金标记成
18、功。1.4胶体金垫的制备在最佳制备条件的基础上,制备胶体金标记抗体。将制备的胶体金标记抗体用分光光度计在波长300700 nm范围内进行扫描,检测标记效果。再用干燥基础液固定于玻璃纤维垫上,制成胶体金垫,在45 益下干燥35 h备用。1.5改良NC膜的制备沿着层析方向在NC膜上依次设置IgG抗体拦截线I、检测线T及对照线C,如图4所示。根据前期研究8,最终确定拦截线I上包被的鼠抗人IgG抗体最佳使用浓度为3.0 mg/mL,检测线T上包被的巨细胞病毒重组抗原最佳使用浓度为1.5mg/mL,对照线C上包被的羊抗鸡IgY抗体最佳使用浓度为0.5 mg/mL。NC膜制备完成后在37 益下干燥2 h备
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 巨细 病毒 IgM 抗体 检测 试纸 改良 性能 评价
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。