GB∕T 38086-2019 生物样品中金属硫蛋白含量的测定.pdf
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1、书 书 书犐 犆犛 犃 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?犌犅犜 ?犇犲 狋 犲 狉犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犿犲 狋 犪 犾 犾 狅 狋 犺 犻 狅 狀 犲 犻 狀(犕犜)犻 狀犫 犻 狅 犾 狅 犵 犻 犮 犪 犾狊 犪犿狆 犾 犲 狊 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?书 书 书前言本标准按照 给出的规则起草。本标准由全国生化检测标准化技术委员会( )提出并归口。本标准起草单位:国家农业标准化监测与研究中心(黑龙江) 、深圳市计量质量检测研究院、上海市计量测试技术研究院、成都大学四川抗菌素工业研究所、吉林省检验检疫局技术中心、哈尔滨商业大学食品学院、哈尔滨春
2、源生物科技开发有限公司。本标准主要起草人:王志强、王韦达、董珊、周婕、杜业刚、李兰英、杨晨、容会、张根生、张福源、吴楠、彭丽萍、王世琨、姜雯、刘文超、孔鲁裔、牟钰、徐凤霞、王海宽、李碧芳、杨俊、李意、刘奕雄、杨国武。犌犅犜 生物样品中金属硫蛋白含量的测定范围本标准规定了生物样品中兔源金属硫蛋白型和型( 和 )测定的液相色谱串联质谱法。本标准适用于生物制剂或生物提取物等生物样品中兔源金属硫蛋白型和型总含量的测定。本方法的检出限为 。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文
3、件。 分析实验室用水规格和试验方法术语和定义、缩略语 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。 特征肽段狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犮狆 狅 犾 狔 狆 犲 狆 狋 犻 犱 犲唯一在靶蛋白的胰蛋白酶水解产物中发现、其氨基酸序列具有专属性的多肽。 金属硫蛋白犿犲 狋 犪 犾 犾 狅 狋 犺 犻 狅 狀 犲 犻 狀一类富含半胱氨酸且具有高度结合金属能力的低相对分子质量蛋白质。 金属硫蛋白型和型犿犲 狋 犪 犾 犾 狅 狋 犺 犻 狅 狀 犲 犻 狀犪 狀 犱在大多数哺乳动物的内脏器官中广泛存在,尤以肝、肾细胞为主,而且参加其功能调节的一类蛋白质。 缩略语下列缩略语适用于本文件。:二硫苏糖醇( ):碘
4、代乙酰胺( ):金属硫蛋白( )原理试样经胰蛋白酶酶切后产生特征肽段,用液相色谱串联质谱法测定试样中特征肽段的含量,按照兔源 和 平均相对分子质量与特征肽段的相对分子质量比值为 ,计算出试样中 犌犅犜 和 的总含量。试剂试验用水为 中规定的一级水。 碳酸氢铵() :分析纯。 二硫苏糖醇( ) :生化级。 碘代乙酰胺( ) :生化级。 胰蛋白酶:测序级,活力大于 (是测定胰蛋白酶活性的底物) , 冷冻保存。 甲酸() :色谱纯。 乙腈() :色谱纯。 碳酸氢铵溶液( ) :称取 碳酸氢铵,用水溶解后定容至 。 二硫苏糖醇溶液( ) :称取 二硫苏糖醇,用碳酸氢铵溶液溶解后定容至 。 碘代乙酰胺溶
5、液( ) :称取 碘代乙酰胺,用碳酸氢铵溶液溶解后定容至 。 胰蛋白酶溶液( ) :移取 胰蛋白酶用 碳酸氢铵溶液溶解。 甲酸溶液( ,体积分数) :移取 甲酸,用水定容至 。仪器设备及器具 液相色谱串联质谱仪:配电喷雾离子源。 蛋白超滤管: ( ) 。 蛋白低吸附离心管: 。 天平:感量 、 。 涡旋混合器。 微量移液器: 、 、 。 高速冷冻离心机:最高转速不低于 。 恒温水浴锅: 。分析步骤 特征肽段合成序列 为合成肽段,经脱盐纯化工艺,其中的半胱氨酸是由碘代乙酰胺试剂进行了烷基化修饰,标记为 。合成的特征肽段物质信息见附录。特征肽段 冷冻保存。 特征肽段溶液配制特征肽段储备溶液:准确称
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