DB14∕T 1942-2019 实验动物 中国地鼠微卫星DNA 检测方法.pdf
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1、 ICS 65.020.30 B 44 DB14 山西省地方标准 DB 14/T 19422019 实验动物 中国地鼠微卫星 DNA 检测方法 Laboratory animal Method for microsatellite markers of Chinese hamster 2019 - 12 - 01 发布 2020 - 02 - 01 实施 山西省市场监督管理局 发 布 DB14/T 19422019 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 术语和定义 . 1 3 抽样 . 1 4 方法 . 2 DB14/T 19422019 II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-
2、2009给出的规则编写。 本标准由山西省科学技术厅提出、归口并监督实施。 本标准起草单位:山西医科大学。 本标准主要起草人:宋国华、刘田福、陈朝阳、高继萍、张锐虎、续国强。 DB14/T 19422019 1 实验动物 中国地鼠微卫星 DNA 检测方法 1 范围 本标准规定了实验动物 中国地鼠(以下简称实验中国地鼠)遗传检测抽样数量及微卫星 DNA 检测方法。 本标准适用于实验中国地鼠品系鉴别、质量控制及遗传组成分析。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 实验中国地鼠 laboratory Chinese hamster 指经人工饲育, 对其携带的微生物和寄生虫实行控制, 遗
3、传背景明确或者来源清楚, 用于科学研究、教学、生产和检定以及其它科学实验的中国地鼠 (Gricetulus griseus)。 2.2 近交系中国地鼠 inbred strain Chinese hamster 以全同胞或亲子交配方式繁殖 20 代以上的中国地鼠,近交系数达 98.6%以上。 2.3 封闭群中国地鼠 closed colony Chinese hamster 以非近亲交配方式繁殖中国地鼠,在不从外部引入新个体的条件下,至少连续繁殖 4 代以上。 2.4 微卫星 DNA microsatellite DNA 是指基因组中由 16 个碱基组成的串联重复序列。不同个体的重复数不同而形
4、成了微卫星 DNA的多态性。 3 抽样 对近交系中国地鼠抽样数量不做要求。每个封闭群随机抽取非同窝成年实验中国地鼠,雌雄各半。采样数量按表1进行。 DB14/T 19422019 2 表1 封闭群实验中国地鼠遗传检测抽样要求 群体数量(只) 抽样数量(只) 少于 100 15 大于 100 30 4 方法 4.1 采样 观察动物外观,核对编号,中国地鼠取 0.5 cm 尾尖组织或眼眶静脉丛采血,-20低温保存。 4.2 微卫星位点的选择 各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因数、PCR 反应的退火温度见表 2。PCR 引物的 5端用FAM 荧光染料进行标记。近交系中国地鼠在表 2 中选择 10
5、 个微卫星位点,封闭群中国地鼠在表 2 中选择 15 个微卫星位点。 表2 中国地鼠微卫星位点 位点 引物序列 退火温度 (C) 片段大小 最大等位基因数 Chm35 F: AGGCTGCTTCCTAAACCCAT 51 354-391 4 R: CTGGGAAGGCTGAACTCAAG Chm93 F: TCTGTGTGTCTGTGAATGCG 58 242-299 7 R: GGATGTAAGATGGCTCCGAA Chm147 F: CATCTGGGCTTTCAATGGAT 58 233-292 9 R: GCTCCCTAAATAACCCCCAA Chm79 F: AGGGGAGATCT
6、TGGGTCAGT 51 270-355 5 R: AACATGGAGGAGCACAAACC Chm120 F: GATAGGAGGGAGCAAAAGGG 58 376-432 12 R: CCTGAGAGCCTCAGAGCAGT Chm162 F: TCTTCCCTTCACAACCCAAG 58 167-214 12 R: AGCAGTGCCCTTTGAAACAT Chm10 F: GGCTGGTGATTTCAATGGTT 59 217-357 5 DB14/T 19422019 3 4.3 PCR 扩增 4.3.1 提取基因组 DNA 用苯酚氯仿法或试剂盒提取基因组 DNA。 4.3.2
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